新鲜和冷冻保存的人羊膜中bFGF mRNA的检测

作     者：柯碧莲 张皙 许迅 邱孝芝 沈卫英 申庆祥 

作者机构：上海交通大学附属第一人民医院眼科上海200080 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院上海200031 上海市计划生育研究所200032 

出 版 物：《眼科新进展》 (Recent Advances in Ophthalmology)

年 卷 期：2004年第24卷第5期

页      面：358-360页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主　　题：羊膜 反转录PCR 碱性成纤维细胞生长因子 

摘      要：目的 研究新鲜和冷冻保存羊膜中是否存在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA。方法 从新鲜和保存 1周羊膜中用常规的酚、氯仿法抽提总RNA ,RT PCR一步法扩增。PCR产物回收后与PBS质粒同时以EcoRI、HindIII双酶切 ,将酶切产物通过T4DNA连接酶连接 ,重组质粒。将重组质粒导入感受态的DH5α大肠杆菌中 ,筛选阳性菌落抽提质粒后行酶切鉴定 ,选取阳性克隆测序。结果 RT PCR产物电泳 ,可见单一清晰的条带 ,约 4 10bp。重组质粒酶切后见二条带 ,小带约 4 10bp ,与插入片段一致。测序结果表明目的片段与bFGF的序列完全相同。结论 新鲜和冷冻保存的羊膜组织中存在bFGF的mRNA。