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作者：甘桢广东海洋大学

学位级别：硕士

罗非鱼是一种在全世界广泛养殖的经济鱼类,近年来,以链球菌病为代表的罗非鱼病害频繁发生,给罗非鱼产业造成了巨大的经济损失,严重阻碍了该产业的健康发展。由于其较高的经济价值,对罗非鱼病害的研究逐渐成为水产动物病害防治领域的研... 详细信息

罗非鱼是一种在全世界广泛养殖的经济鱼类,近年来,以链球菌病为代表的罗非鱼病害频繁发生,给罗非鱼产业造成了巨大的经济损失,严重阻碍了该产业的健康发展。由于其较高的经济价值,对罗非鱼病害的研究逐渐成为水产动物病害防治领域的研究热点,而由无乳链球菌引起的链球菌病是其中一个主要的研究方向。然而,目前关于罗非鱼的T细胞,特别是关于T细胞激活方面的研究还十分有限。CD59、CD2BP2和Lck是三种与共刺激分子CD2存在互作的关键蛋白分子,在CD2介导的T细胞激活中起到着至关重要的作用。为了解罗非鱼T细胞对胞内寄生菌的免疫应答机制,本研究以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为研究对象,克隆了尼罗罗非鱼CD59、CD2BP2和Lck的cDNA序列全长,并对其组织分布、对无乳链球菌刺激的免疫应答以及功能特征进行了初步的研究。CD59是一种重要的补体抑制蛋白和T细胞调节蛋白,在非特异性免疫应答和特异性免疫应答中都发挥着重要的作用。在本研究中,尼罗罗非鱼的CD59基因(简称为On-CD59)被成功克隆,序列分析结果表明On-CD59的cDNA全长为1176 bp,包含一段长为74 bp的5’端非编码区、一段长为748 bp的3’端非编码区以及一段长为354 bp、编码117个氨基酸的开放式阅读框(ORF)。On-CD59所推测的氨基酸序列具有已知CD59分子所具有的五大特征结构,包括N端的信号肽、C端的GPI锚定区、中间的LU结构域、CCXXXXCN基序以及10个半胱氨酸残基。在健康的罗非鱼中,On-CD59 mRNA的表达在本研究所检测的所有组织中都能被检测到,其中在脑的表达量远高于其他组织;在经灭活无乳链球菌刺激24 h后,On-CD59 mRNA在皮肤、大脑、头肾、胸腺和脾脏的表达都发生了显著的上调。此外,在灭活无乳链球菌刺激后,On-CD59的表达在皮肤、脑、头肾、胸腺和脾脏表现出明显的时间依赖性表达模式,On-CD59在皮肤的表达水平于免疫12 h后达到峰值,而在脑和头肾则是于免疫24 h后达到峰值,在胸腺和脾脏到达峰值的时间最晚,为免疫48 h后。补体抑制活性试验结果表明On-CD59不但具有补体抑制活性,而且这种活性具有物种选择性。而生物素-链霉亲和素ELISA以及集落形成单位试验结果则分别表明,On-CD59能结合革兰氏阳性菌细胞壁的主要组分PGN和LTA,并对无乳链球菌具有一定的抗菌活性。CD2BP2是几种与CD2胞质区结合的接头蛋白之一,在CD2介导的T细胞激活以及核剪接中都起着关键的作用。在本研究中,尼罗罗非鱼的CD2BP2基因(简称为On-CD2BP2)被成功克隆,序列分析结果表明On-CD2BP2的cDNA全长为1429 bp,包含一段长为111 bp的5’端非编码区、一段长为193 bp的3’端非编码区以及一段长为1125 bp、编码374个氨基酸的开放式阅读框。On-CD2BP2所推测的氨基酸序列具有已知CD2BP2分子所具有的两大特征结构,即C端的GYF结构域和GPFXXXXMXXWXXXGYF基序,且其所推测的基因结构与已知的CD2BP2分子十分相似。在健康的罗非鱼中,On-CD2BP2 mRNA在头肾、脾脏和肝脏的表达量较高;在经灭活无乳链球菌刺激48 h后,On-CD2BP2 mRNA在头肾、脾脏和脑的表达都发生了显著的上调。此外,在灭活无乳链球菌刺激后,On-CD2BP2在头肾、脾脏和脑的表达表现出明显的时间依赖性表达模式。On-CD2BP2在脑的表达水平于免疫24 h后达到峰值,而在头肾和脾脏则是于免疫48 h后达到峰值。Lck在关于T细胞的分化、增殖和效应功能的信号转导中都起着至关重要的作用。在本研究中,尼罗罗非鱼的Lck基因(简称为On-Lck)被成功克隆,序列分析结果表明On-Lck的cDNA全长为2213 bp,包含一段长为286 bp的5’端非编码区、一段长为421 bp的3’端非编码区以及一段长为1506 bp、编码501个氨基酸的开放式阅读框。On-Lck所推测的氨基酸序列具有对于转导TCRs信号所不可缺少的几个结构特征,且其所推测的基因结构与已知的Lck分子十分相似。在健康的罗非鱼中,On-Lck mRNA在胸腺、脾脏、头肾和鳃的表达量较高;在经灭活无乳链球菌刺激后,On-Lck mRNA在胸腺、脾脏和头肾的表达都发生了显著的上调。此外,在灭活无乳链球菌刺激后,On-Lck在头肾、脾脏和脑的表达表现出明显的时间依赖性表达模式。On-Lck在胸腺和脾脏的表达水平于免疫48 h后达到峰值,而在头肾则是于免疫72 h后达到峰值。

关键词：尼罗罗非鱼 T细胞激活相关基因基因克隆 Real-Time PCR 功能研究

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溶藻弧菌耐药基因qnr的克隆及生物信息学分析

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生物技术 2015年第5期25卷 414-419页

作者：周维汤菊芬甘桢简纪常吴灶和丁燏广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

[目的]克隆溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)喹诺酮类耐药基因qnr并分析其蛋白结构,为研究该蛋白的生物学功能奠定基础。[方法]根据NCBI上公布的相关序列设计qnr基因特异性引物,利用PCR方法扩增基因序列,进行DNA测序及生物信息学分析。[... 详细信息

[目的]克隆溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)喹诺酮类耐药基因qnr并分析其蛋白结构,为研究该蛋白的生物学功能奠定基础。[方法]根据NCBI上公布的相关序列设计qnr基因特异性引物,利用PCR方法扩增基因序列,进行DNA测序及生物信息学分析。[结果]从溶藻弧菌染色体上获得qnr基因大小为651 bp,编码216个氨基酸,进化分析可知其与副溶血弧菌有很近的亲缘关系,二级结构分析含有五肽重复序列,三维结构与大肠杆菌质粒上的qnr蛋白空间结构极为相似。[结论]通过对蛋白质序列分析和结构预测,初步确定该基因为喹诺酮耐药基因,为水产细菌的耐药机制研究奠定基础。

关键词：溶藻弧菌喹诺酮耐药基因五肽重复序列生物信息学

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大口黑鲈肠道益生菌的分离与鉴定

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广东海洋大学学报 2023年第4期43卷 62-68页

作者：赵浩航康旭黄子威温依铭汪志文喻大鹏甘桢夏洪丽夏立群鲁义善广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室广东湛江524088 广东海洋大学深圳研究院/广东省水生动物健康评估工程技术研究中心/深圳市海水经济动物种苗健康评价公共技术服务平台广东深圳518120

【目的】分离鉴定大口黑鲈(Micropterus salmoides)肠道益生菌,评估分离菌用作饲料添加剂的益生潜力。【方法】采集大口黑鲈肠道样本,采用稀释涂布法分离细菌,经16S rRNA序列比对和生化试验鉴定种属,并进行抗逆性能、黏附能力、溶血活... 详细信息

【目的】分离鉴定大口黑鲈(Micropterus salmoides)肠道益生菌,评估分离菌用作饲料添加剂的益生潜力。【方法】采集大口黑鲈肠道样本,采用稀释涂布法分离细菌,经16S rRNA序列比对和生化试验鉴定种属,并进行抗逆性能、黏附能力、溶血活性和药敏特性等鉴定。【结果】从大口黑鲈肠道分离菌株84株,经测序、blast比对,筛选出3株同源性最高的菌株MS-1、MS-2、MS-3,分别鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。3株分离菌均为γ-溶血,不具有生物膜,疏水性50%~93.3%,自凝集性43.6%~69.2%;可在pH 2.0~12.0环境和5.0 g/L胆盐中存活;经高温处理后仍可生长;3株菌对大多数抗生素敏感。【结论】芽孢杆菌MS-1、MS-2和MS-3抗逆性高,黏附性能及饲料学安全性高,可作为大口黑鲈养殖中潜在益生菌。

关键词：大口黑鲈肠道微生物益生菌分离与鉴定芽孢杆菌

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罗非鱼免疫学研究进展

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生物技术通报 2014年第11期30卷 32-39页

作者：甘桢王蓓鲁义善汤菊芬简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室湛江524088 仲恺农业工程学院广州510225

罗非鱼是我国主要的养殖鱼类之一,近年来频繁爆发的罗非鱼病害给罗非鱼产业造成了巨大的经济损失。鉴于免疫防治技术在水环境保护、食品安全等方面的优势,探讨鱼体免疫系统特性和免疫应答机制逐渐成为学术界的热点。就罗非鱼的非特异性... 详细信息

罗非鱼是我国主要的养殖鱼类之一,近年来频繁爆发的罗非鱼病害给罗非鱼产业造成了巨大的经济损失。鉴于免疫防治技术在水环境保护、食品安全等方面的优势,探讨鱼体免疫系统特性和免疫应答机制逐渐成为学术界的热点。就罗非鱼的非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫等方面的研究成果作一综述,旨在为今后深入研究罗非鱼病害的免疫防治技术提供一些可行的思路和有效的依据。

关键词：罗非鱼非特异性免疫体液免疫细胞免疫

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罗非鱼CD2BP2的克隆与对无乳链球菌的免疫应答

罗非鱼CD2BP2的克隆与对无乳链球菌的免疫应答

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2014年中国水产学会学术年会

作者：甘桢王蓓鲁义善简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院

CD2BP2（CD2胞质结合蛋白2）是几个与CD2胞质区相互作用的蛋白之一,在CD2介导的T细胞激活以及核剪切中起到着重要的作用。在本研究中,尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）的CD2BP2基因（On-CD2BP2）被成功克隆,序列分析表明On-CD2BP2... 详细信息

CD2BP2（CD2胞质结合蛋白2）是几个与CD2胞质区相互作用的蛋白之一,在CD2介导的T细胞激活以及核剪切中起到着重要的作用。在本研究中,尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）的CD2BP2基因（On-CD2BP2）被成功克隆,序列分析表明On-CD2BP2具有已知CD2BP2的两个重要的结构特征,即GYF结构域和GPFXXXXMXXWXXXGYF基序,且其推测的基因结构也与已知的CD2BP2十分相似。通过荧光定量PCR检测On-CD2BP2在罗非鱼的m RNA表达量,结果表明,在健康的罗非鱼中,On-CD2BP2的转录本主要在头肾和脾脏被检测到;当用灭活的无乳链球菌对罗非鱼进行免疫刺激48 h后,On-CD2BP2在头肾、脾和脑中的表达表现出明显的时序表达模式,在脑的表达于24 h达到峰值,在头肾和脾的表达于48 h达到峰值。以上结果表明,On-CD2BP2在罗非鱼对细菌的免疫应答中起到着重要的作用。

关键词：罗非鱼 CD2BP2 RACE 荧光定量PCR 无乳链球菌

来源： cnki会议评论

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溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

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广东海洋大学学报 2015年第6期35卷 40-46页

作者：朱卫卫邱德全甘桢鲁义善简纪常广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室//广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524025

从患病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内提取白斑综合征病毒(WSSV),PCR证实WSSV毒性,将病毒粗提液稀释10-2、10-3、10-4和10-5倍,攻毒实验表明,最佳攻毒剂量为10-4倍稀释液。对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05、0.10、0.15 mg/m L的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)肽聚糖,免疫24 h后感染WSSV,测定其免疫保护率和肝胰腺的免疫学指标,探讨溶藻弧菌肽聚糖对凡纳滨对虾抗WSSV的影响。结果表明:对虾的保护率随着肽聚糖的浓度增大而增大,与对照组相比,0.05、0.10、0.15 mg/m L组的保护率分别为36.67%、46.67%、56.67%;实验组凡纳滨对虾肝胰腺中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合成酶(NOS)活力与对照组相比的差异有统计学意义(P<0.01)。溶藻弧菌肽聚糖可有效增强凡纳滨对虾自身的非特殊性免疫能力,提高抗WSSV的能力。

关键词：肽聚糖抑制作用凡纳滨对虾白斑综合症病毒免疫指标

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溶藻弧菌肽聚糖和vp28-siRNA对凡纳滨对虾白斑综合征病毒的抑制作用

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广东海洋大学学报 2016年第1期36卷 57-62页

对感染白斑综合征病毒(WSSV)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05和0.10μg/μL的vp28-si RNA,干扰效果实验表明,si RNA最佳浓度为0.10μg/μL。凡纳滨对虾感染WSSV 24 h时注射0.10μg/μL的vp28-si RNA,检测免疫后不同时... 详细信息

对感染白斑综合征病毒(WSSV)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分别注射0.05和0.10μg/μL的vp28-si RNA,干扰效果实验表明,si RNA最佳浓度为0.10μg/μL。凡纳滨对虾感染WSSV 24 h时注射0.10μg/μL的vp28-si RNA,检测免疫后不同时间点的干扰效果。结果表明:在注射vp28-si RNA 6 h后,实验组与对照组WSSV病毒拷贝数差异有统计学意义(P<0.05);在48 h时实验组病毒拷贝数急剧下降,对照组则保持较高水平,可较好干扰WSSV病毒复制,干扰效果持续120 h,对凡纳滨对虾的保护率为40%。凡纳滨对虾用0.10 mg/m L肽聚糖(Peptidoglycan)免疫24 h后感染WSSV,检测6、12、24 h注射vp28-si RNA的保护率。结果显示:6 h注射组的保护率为80%,12 h注射组为63.33%,24 h注射组为56.67%。凡纳滨对虾在肽聚糖和vp28-si RNA作用后,可增加其对WSSV抗感染作用,降低死亡率,干扰时间越早,对对虾的保护率越高。

关键词：凡纳滨对虾免疫增强剂 RNA干扰肽聚糖 vp28-siRNA 白斑综合征病毒

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哈维氏弧菌qnr基因的克隆及原核表达条件优化

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广东海洋大学学报 2016年第1期36卷 93-97页

作者：周维汤菊芬高增鸿甘桢简纪常吴灶和丁燏广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 仲恺农业工程学院广东广州510225

根据Gen Bank中公布的哈维氏弧菌qnr基因序列设计引物扩增哈维氏弧菌qnr序列,将其插入p ET-32a质粒,构建原核表达载体p ET32-qnr,并对诱导温度、时间、IPTG浓度等条件进行优化。结果表明,哈维氏弧菌qnr全长651 bp,编码216个氨基酸;重组... 详细信息

根据Gen Bank中公布的哈维氏弧菌qnr基因序列设计引物扩增哈维氏弧菌qnr序列,将其插入p ET-32a质粒,构建原核表达载体p ET32-qnr,并对诱导温度、时间、IPTG浓度等条件进行优化。结果表明,哈维氏弧菌qnr全长651 bp,编码216个氨基酸;重组蛋白优化条件为于28℃、IPTG浓度为0.05 mmol/L条件下诱导6 h。

关键词：哈维氏弧菌 qnr基因原核表达优化

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湖北省远期结售汇业务的影响因素及政策分析

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武汉金融 2005年第9期 15-17页

作者：甘泰桢吴丽琳李莲国家外汇管理局湖北省分局湖北武汉430071

本文介绍了湖北省远期结售汇业务的基本情况,分析了影响远期结售汇业务的主要因素,在此基础上提出了相关政策建议。

关键词：外汇远期业务结售汇影响因素

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碱金属阳离子在外加电位下影响单分散铜氮掺杂碳材料催化二氧化碳电还原的机理研究

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Chinese Journal of Chemical Physics 2024年第1期37卷 100-108,I0093-I0102,I0118页

作者：赵刚张国桢中国科学技术大学化学与材料科学学院合肥230026 中国科学技术大学未来技术学院合肥230026 中国科学技术大学合肥微尺度物质科学国家研究中心合肥230026

单分散铜氮掺杂碳材料是一类很有希望的二氧化碳电还原催化剂.然而,铜位点周围电极-电解质界面的复杂环境阻碍了人们对该体系机理的全面认识以及在机理基础上的系统性优化.本文建立了一个电双层模型来研究在有外加电位条件下碱金属阳离... 详细信息

单分散铜氮掺杂碳材料是一类很有希望的二氧化碳电还原催化剂.然而,铜位点周围电极-电解质界面的复杂环境阻碍了人们对该体系机理的全面认识以及在机理基础上的系统性优化.本文建立了一个电双层模型来研究在有外加电位条件下碱金属阳离子对单分散铜氮掺杂碳催化剂表面二氧化碳电还原的影响.巨正则系综密度泛函理论计算表明,在相对标准氢电极电势1.2 V的条件下,水合钠离子促进了CO_(2)在Cu位点上的电吸附,使其形成弯曲的二氧化碳负离子;而在足够负的电势条件下,CO_(2)的电吸附(Cu+CO_(2)+e-→Cu-CO_(2)-)而非羧基形成步骤,是钠离子协助下CO_(2)还原为CO反应的决速步.此外,铜与带负电的羧基结合形成类似碳酸氢根的结构,或得益于单价Cu的d10电子构型.研究表明,碱金属阳离子在单分散铜氮掺杂碳上二氧化碳电还原的早期阶段发挥了关键作用,而且恒电势条件的模拟对理解反应机理非常重要.

关键词：阳离子效应二氧化碳电还原恒电势方法第一性原理计算

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