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基于纳米抗体检测赭曲霉毒素A的酶免疫传感方法构建及抗体定向进化研究

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基于纳米抗体检测赭曲霉毒素A的酶免疫传感方法构建及抗体定向进...

作者：王雪柔海南大学

学位级别：硕士

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)主要是由曲霉和青霉产生的次级代谢产物,主要污染粮谷类、咖啡、中草药、葡萄及葡萄酒等农作物及食品。研究表明,OTA对人类及动物都具有肝肾毒性、致癌和致突变等作用,是目前对人类及动物最具威胁的真菌... 详细信息

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)主要是由曲霉和青霉产生的次级代谢产物,主要污染粮谷类、咖啡、中草药、葡萄及葡萄酒等农作物及食品。研究表明,OTA对人类及动物都具有肝肾毒性、致癌和致突变等作用,是目前对人类及动物最具威胁的真菌毒素之一。因此,对OTA建立高灵敏度、快速简便的检测方法意义重大。本研究从两个方向着手,致力于提高检测方法的灵敏度。一是结合新型信号放大方式构建检测OTA的酶促免疫传感方法;二是对抗OTA纳米抗体进行体外亲和成熟,提高纳米抗体的亲和力。主要研究如下:1. 钙黄绿素可与Ce结合形成络合物,其荧光发生猝灭;当Ce与PO结合产生Ce PO时,钙黄绿素从络合物中解离,其荧光发生复性。利用钙黄绿素与PO竞争结合Ce的原理,构建磷酸盐触发荧光免疫传感系统。通过优化免疫传感系统中各参数,如抗原浓度、抗体浓度、甲醇浓度、竞争反应时间、p H值和离子强度,建立了基于纳米抗体-碱性磷酸酶融合蛋白(Nb-AP)检测OTA的磷酸盐触发荧光免疫分析法。该方法的线性范围为0.19-1.26 ng/m L,IC为0.46 ng/m L,LOD为0.12ng/m L。通过加标回收实验结合HPLC-FLD方法,证明Nb-AP介导的PT-FIA方法准确可靠,适用于食品和环境中痕量污染物的检测。2. 纳米抗体(Nanobody,Nb)是当前已知尺寸最小的基因工程抗体,具有稳定性高、水溶性好等优点,同时其结构简单,易于体外亲和成熟。本研究以抗OTA的纳米抗体Nb28为对象,通过SWISS-MODEL对Nb28进行建模,获得其三维结构模型。在对其结构进行能量最小化后,使用Autodock4.2将其与OTA分子进行模拟对接,初步预测Nb28与OTA结合的关键氨基酸位点。经丙氨酸扫描后,通过ELISA检测突变子的亲和力的变化,最终确定Nb28与OTA结合的4个关键氨基酸位点,分别为Gly53、Met79、Ser102和Leu149。3. 经同源建模、分子对接和丙氨酸扫描确定纳米抗体Nb28与OTA的四个关键氨基酸位点后,将上述四个关键氨基酸位点进行两两配对,并构建53G&102S-m Lib和79M&149L-m Lib两个随机突变文库。以OTA-BSA为靶标,经4轮生物淘选后,获得亲和力更高的纳米抗体突变子Nb-G53Q&S102D,其IC为0.29 ng/m L,KD值为52 n M,分别比Nb28低1.4倍和1.36倍。本研究首次对免疫库筛选获得的纳米抗体进行体外亲和成熟,结合筛选结果及模拟仿真发现,氨基酸残基的极性、疏水相互作用和侧链空间位阻对于抗体与抗原相互作用至关重要,研究结果对纳米抗体的体外亲和成熟具有一定的参考价值。

关键词：纳米抗体赭曲霉毒素A 荧光免疫分析分子模拟定向改造体外亲和成熟

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中国现代美学中的审美自律论研究

中国现代美学中的审美自律论研究

作者：王雪柔安徽师范大学

学位级别：硕士

肇始于康德美学的审美自律思想在西方美学史中具有重要作用,它呈现出完整的生命历程与理论谱系,审美自律作为美学与艺术批评领域的关键话语,其重要地位不言而喻。以审美自律作为理论依据,重返20世纪中国现代美学的发生场,就会发现审美... 详细信息

肇始于康德美学的审美自律思想在西方美学史中具有重要作用,它呈现出完整的生命历程与理论谱系,审美自律作为美学与艺术批评领域的关键话语,其重要地位不言而喻。以审美自律作为理论依据,重返20世纪中国现代美学的发生场,就会发现审美自律这一源自西方的现代美学理论,始终伴随着中国现代美学的历史建构,在中国现代美学发展历程中发挥着重要作用。本文共分为四章,第一章追溯了审美自律理论的思想来源,并重点阐述了康德的审美自律理论。文艺复兴时期为审美自律理论的创生奠定了主体性的条件,孕育了以唯美主义为特征的城市文化,由此自律性的观念逐渐凸显。启蒙时代真正迎来了审美的独立,随着18世纪艺术实践与美学理论的不断深化,“美的艺术”观念逐渐成型,经验主义者为康德审美自律论提供了部分理论资源,在内外部多重历史机制的影响之下,康德在《判断力批判》中终为审美判断力找到了独立于认识与道德先天法则,从而确证了审美的自我立法。第二章主要论述中国现代美学中的审美自律的发生发展历程与理论维度,审美自律在近代中国的发生不是凭空想象,而是以西方知情意三大领域的划分为依据、以中国社会的感性精神为基础、以知识分子的审美救赎为力量。在为审美自律找到合法性的根基之后,中国现代美学以审美自由为核心走向了审美自律的理论探索道路,主要包括美本质论、美感论、形式论等方面的理论维度。第三章主要论述中国现代美学审美自律思想的实践维度,审美自律实践维度的落实关键在于美育,“人生艺术化”是彼时美育实践的理论主题,社会美育与艺术教育是这一理论主题下的具体实践。同时将审美自律作为一种思想与观念考察其在艺术创作与批评领域的影响以及意义。第四章主要探讨审美自律理论在中国现代美学史中的重大意义,审美自律论在中国现代美学中完成了自身的理论建构以后,在“美学大讨论”“美学热”等重大思潮中,审美自律显现出悬置与重振的局面。在后现代美学与艺术的话语理论形态之下,审美自律性一度被抛弃,但是其坚持审美的立场、坚持审美经验研究的立场在百年中国现代美学的历史进程中的显现出重要影响。

关键词：审美自律中国现代美学理论维度实践维度

民族声乐中陕北民歌演唱风格探究 ——以《兰花花》《三十里铺》为例

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民族声乐中陕北民歌演唱风格探究 ——以《兰花花》《三十里铺》...

作者：王雪柔延安大学

学位级别：硕士

陕北民歌是陕西省地方民间音乐文化的重要组成部分,具有浓郁的地方特色和丰富的文化内涵。在我国众多民歌之中,陕北民歌凭借特殊的地理环境以及人文的影响,逐渐形成了独具特点的民间歌种,陕北民歌题材极为广泛,唱词中叠字以及比兴手法... 详细信息

陕北民歌是陕西省地方民间音乐文化的重要组成部分,具有浓郁的地方特色和丰富的文化内涵。在我国众多民歌之中,陕北民歌凭借特殊的地理环境以及人文的影响,逐渐形成了独具特点的民间歌种,陕北民歌题材极为广泛,唱词中叠字以及比兴手法经常出现,旋律高亢明亮,体现出了陕北人淳朴豪迈的性格特点。通过近年来陕北民歌的不断传播与发展,越来越多的人关注到了陕北的艺术魅力。歌曲的歌词涉及到生产、生活、爱情、战争等多个方面,反映了陕北地区人民的思想情感和生活体验,也表达了他们对于家乡、亲人、信仰和社会变迁的关注和思考。“信天游”作为在我国西北地区广为人知的民歌形式,其自由的节奏、宽广的音域、奔流的旋律都形象的反映了当地时代人们的生活环境。因此信天游的作品中,大多拥有大跨度的跳进,宽广的音域,悠扬的节奏等。《兰花花》与《三十里铺》均为陕北民歌信天游的典型代表,这两首作品旋律高亢悠扬,唱词充满了陕北当地的生活气息,表达了陕北女性对幸福生活和美好爱情的不懈追求,具有极高的研究价值。本研究以陕北民歌的生成背景入手,从人文环境和革命形势两方面对陕北民歌的源起和流传进行了分析,随后以《兰花花》与《三十里铺》为研究对象,结合音乐形态学的研究方法对曲式结构和艺术特点进行了分析,并从咬字、气息、情感、润腔等多个角度对这两首作品的演唱风格进行了概括和描述,最终结合了笔者演唱陕北民歌的实践经验,对陕北民歌演唱过程中的心得体会提出了自己的看法。

关键词：《兰花花》《三十里铺》作品分析演唱分析情感处理

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新型农村合作医疗制度中的政府职能定位

中国劳动关系学院学报 2009年第4期23卷 123-124,F0003页

作者：王雪柔中国劳动关系学院公共管理系北京100048

新型农村合作医疗制度的建设关系到广大农民的切身利益和农村社会稳定的大局,是社会主义新农村建设的重要组成部分。随着新型农村合作医疗制度的实施,暴露出一些亟待解决的问题,强化政府在该制度中的主导性地位成为解决问题的关键。政... 详细信息

新型农村合作医疗制度的建设关系到广大农民的切身利益和农村社会稳定的大局,是社会主义新农村建设的重要组成部分。随着新型农村合作医疗制度的实施,暴露出一些亟待解决的问题,强化政府在该制度中的主导性地位成为解决问题的关键。政府作为公共产品及服务的提供主体,必须在新型农村合作医疗制度中发挥关键作用。在制度设计中充分体现"以人为本"的理念,改善农民的医疗条件,更好地维护农民的切身利益,为我国新型农村合作医疗制度构建做出新的贡献。

关键词：农村合作医疗政府职能财政

反思判断力与审美自律：观念艺术的康德美学依据

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文艺美学研究

文艺美学研究 2022年第1期 205-217页

作者：王雪柔李伟安徽师范大学文学院

观念艺术及其内在机制可在康德美学中找到依据。康德认为不是概念而是愉悦的情感才是鉴赏判断的唯一根据，他的这种概念观被观念艺术逆向运用，并直接以思想观念为主体。康德诠证出的反思判断力及其先验法则，保证了观念艺术以出让作品... 详细信息

观念艺术及其内在机制可在康德美学中找到依据。康德认为不是概念而是愉悦的情感才是鉴赏判断的唯一根据，他的这种概念观被观念艺术逆向运用，并直接以思想观念为主体。康德诠证出的反思判断力及其先验法则，保证了观念艺术以出让作品意义和阐释权的方式，得以实现自身的反身性。观念艺术作为一种高度自律的艺术，离不开康德对审美自律的揭示，但观念艺术在无他者的情况下仍然在自身内部结构中实现自律，体现出观念艺术的“再自律性”。“再自律性”也使得观念艺术的未来难以被准确把握。

关键词：观念艺术反思判断力反身性再自律

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浅析近现代萨克斯专业演奏技巧的发展

浅析近现代萨克斯专业演奏技巧的发展

“危机”与“生机”:“生态文明美学”与“生态美学”之比较

广东省教师继续教育学会第五届教学研讨会

作者：王雪柔陕西省延安市宝塔区延安大学

萨克斯作为一门新兴起的乐器,受到很多人的追捧,人们被他的音色所折服,而好的音色,不是那么容易就能演奏出来的,这需要专业的学习,经年的练习,还有对音乐乐感的深刻领悟,要做到这三点,是非常困难的,很多萨克斯学习者都没有坚持下去,只... 详细信息

萨克斯作为一门新兴起的乐器,受到很多人的追捧,人们被他的音色所折服,而好的音色,不是那么容易就能演奏出来的,这需要专业的学习,经年的练习,还有对音乐乐感的深刻领悟,要做到这三点,是非常困难的,很多萨克斯学习者都没有坚持下去,只有很少一部分人做到。一门乐器如果没有发展,注定会被人们所淘汰,"逆水行舟,不进则退"这就需要萨克斯爱好者们,不断地完善萨克斯,并不断的为之努力,使更多的人了解萨克斯,喜欢萨克斯,学习萨克斯。

关键词：近现代萨克斯演奏技巧

来源： cnki会议评论

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美与时代（美学）（下） 2021年第10期 29-32页

作者：王雪柔安徽师范大学文学院

远古时代人类就有关于寻找合适的生存家园与建立良好生态环境的生态环境意识,农业文明时代人类对于自然的认识以及与自然的关系更加亲密,进入工业化时代,人与自然的关系变得紧张。以美学实践连结人与自然是一条于“危机”中寻求“生机... 详细信息

远古时代人类就有关于寻找合适的生存家园与建立良好生态环境的生态环境意识,农业文明时代人类对于自然的认识以及与自然的关系更加亲密,进入工业化时代,人与自然的关系变得紧张。以美学实践连结人与自然是一条于“危机”中寻求“生机”的道路,生态美学的建立以生态与环境为导向,强调生态美学和其他诸学科理论的互动,注重将生态美学运用到城市建设等具体实践方面上来。而生态文明美学强调在文明的发展中寻找人类的家园感,倡导“乐居”的思想理念。因此,生态美学与生态文明美学二者之间存在诸多相通之处,内涵虽然有所差异,但在后疫情时代与人类命运共同体的理念的推动下,二者又显示出一定的价值合流。

关键词：生态美学生态文明美学人类命运共同体

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从《乐章集》看柳永的禅学观

华夏文化 2022年第1期 37-39页

作者：王雪柔安徽省芜湖市安徽师范大学文学院 241003

柳永,字三变,北宋初期的著名词人,生于公元987年,于公元1031年登进士科及第,曾在科举应试中经历两次失败,宦海沉浮,坎坷漂泊。虽《宋史》无传,但柳永是开一代词风之大家,富有传奇色彩。柳永词通俗且有境界,苏轼赞其“不减唐人高处”。... 详细信息

柳永,字三变,北宋初期的著名词人,生于公元987年,于公元1031年登进士科及第,曾在科举应试中经历两次失败,宦海沉浮,坎坷漂泊。虽《宋史》无传,但柳永是开一代词风之大家,富有传奇色彩。柳永词通俗且有境界,苏轼赞其“不减唐人高处”。由于佛教在宋朝受到统治者的重视,禅宗也有了新的发展,士人参禅风尚盛行,柳永在经历了仕途的跌宕起伏后,其思想中亦渗透着禅学观念,其著作《乐章集》中的许多词篇亦颇具禅味。

关键词：《乐章集》宦海沉浮柳永词《宋史》北宋初期禅学苏轼

汪裕雄审美意象学的视野与方法——以当代审美心理研究与意象论美学为背景

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社会科学动态 2022年第12期 27-32页

作者：王雪柔李伟安徽师范大学文学院安徽芜湖241003

“中西参证”是汪裕雄审美意象学的总体视野,他以一种中性态度,抓住中西文化的根本精神,自觉避开片面的、牵强附会的认识论误区与功利主义倾向。在当代审美心理研究热潮中,汪裕雄坚持审美本位与马克思主义历史唯物论,立足审美活动与审... 详细信息

“中西参证”是汪裕雄审美意象学的总体视野,他以一种中性态度,抓住中西文化的根本精神,自觉避开片面的、牵强附会的认识论误区与功利主义倾向。在当代审美心理研究热潮中,汪裕雄坚持审美本位与马克思主义历史唯物论,立足审美活动与审美经验分析,自觉避开横移普通心理学原理的时代倾向,将审美心理学究推进到审美心理结构的基元。在意象论美学的基础研究中,汪裕雄将“意象”溯源至文化的源头与审美意识产生的原始语境,为意象建立一部“前史”,开辟出“文化意象”的研究路径。

关键词：汪裕雄审美意象意象论美学