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中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因全长cDNA克隆和重组表达

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水生生物学报 2011年第2期35卷 210-217页

作者：孙妍张亦陈刘逸尘王雪惠王宇凡耿绪云孙金生杨卫军天津师范大学生命科学学院天津300387 天津市水产养殖病害防治中心天津300221 浙江大学生命科学学院杭州310058

根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ34... 详细信息

根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ341280),该基因全长为1457 bp,开放阅读框为330 bp,编码110个氨基酸(含有35个氨基酸的信号肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三个二硫键,有典型的CHH家族结构域。该cDNA编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,达到了85%。Northern杂交和半定量RT-PCR显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH基因表达,提示该基因的表达具有一定组织特异性。利用pCR T7/NT TOPO TA系统重组表达MIH成熟肽,纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L,纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH。研究解决了CHH家族神经肽在机体中的表达量少,直接纯化较难的问题,为深入研究MIH的作用机制和在生产上控制中华绒螯蟹蜕皮和生长奠定了基础。

关键词：中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因组织表达重组表达纯化

牙鲆Toll样受体1基因全长cDNA的克隆及特征分析

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安徽农业科学 2012年第26期40卷 12754-12760页

作者：吴恋孙金生耿绪云潘宝平魏俊利王雪惠高虹天津师范大学生命科学学院天津市细胞遗传与分子调控重点实验室天津300387 天津市水产养殖病害防治中心天津300221

[目的]克隆牙鲆TLR1(Toll like receptors)全长基因,并对其结构特征和表达规律进行分析。[方法]采用同源克隆和快速扩增cDNA末端技术,从牙鲆头肾组织中克隆出TLR1基因cDNA全长序列,并对该基因进行生物信息学和表达模式分析。[结果]牙鲆T... 详细信息

[目的]克隆牙鲆TLR1(Toll like receptors)全长基因,并对其结构特征和表达规律进行分析。[方法]采用同源克隆和快速扩增cDNA末端技术,从牙鲆头肾组织中克隆出TLR1基因cDNA全长序列,并对该基因进行生物信息学和表达模式分析。[结果]牙鲆TLR1基因cDNA全长2 947 bp,开放阅读框(ORF)2 418 bp,编码805个氨基酸,包括26个氨基酸组成的信号肽、2个跨膜区、6个富含亮氨酸重复结构域(LRR)和一个TIR结构域(Toll/interleukin(IL)-1 receptor)。该蛋白的分子量为91.15 kDa,等电点为6.49。氨基酸序列同源性分析显示,牙鲆TLR1基因与其他脊椎动物的TLR1基因序列全长同源性达到69%～35%,TIR序列的同源性达到84%～62%。在系统发生树上牙鲆的TLR1基因首先与斜带石斑鱼聚类。通过荧光定量qRT-PCR检测,结果显示牙鲆TLR1基因的mRNA主要表达于肝脏、心脏和脾脏等组织。[结论]该研究结果为进一步研究TLR1基因的功能和开发牙鲆免疫增强剂奠定了基础。

关键词：牙鲆 Toll样受体1(TLR1) qRT-PCR

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工厂化养鱼实用技术模式研究中水质监测分析报告

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天津农学院学报 2008年第1期15卷 19-24页

作者：魏俊利张树林李娜王雪惠天津市水产研究所天津300221

本试验是工厂化养鱼实用技术模式研究项目中的一个方面。试验于2002年5月24日至7月25日进行,养殖品种为奥尼罗非鱼和短盖巨脂鲤(亦名淡水白鲳)。初始放鱼量40.0 kg/m3,实验结束时单位水体鱼获量奥尼罗非鱼为78.2 kg/m3,淡水白鲳为82.2 k... 详细信息

本试验是工厂化养鱼实用技术模式研究项目中的一个方面。试验于2002年5月24日至7月25日进行,养殖品种为奥尼罗非鱼和短盖巨脂鲤(亦名淡水白鲳)。初始放鱼量40.0 kg/m3,实验结束时单位水体鱼获量奥尼罗非鱼为78.2 kg/m3,淡水白鲳为82.2 kg/m3。试验期间每两天化验一次,共化验32次,监测8项水质理化指标的变化范围分别为:水温22～30℃、pH值7.36～8.28、溶解氧1.17～8.51 mg/L、氨氮0.79～11.27 mg/L、亚硝酸氮0.551～8.520 mg/L、硝酸氮3.33～42.79 mg/L、磷酸盐磷0.547～9.230 mg/L、碱度257.2～358.2 mg/L。

关键词：水温 pH 溶解氧氨氮亚硝酸氮硝酸氮磷酸盐磷碱度

鱼类迟缓爱德华氏菌肠溶口服疫苗的制备及免疫保护效应研究

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鱼类迟缓爱德华氏菌肠溶口服疫苗的制备及免疫保护效应研究

天津地区盐碱水大口黑鲈棚塘接力高效养殖技术

2017年中国水产学会学术年会

作者：魏俊利薛淑霞孙妍董学旺王雪惠孙金生天津市水生动物疫病预防控制中心天津渤海水产研究所天津师范大学生命科学学院

本文采用海藻酸钠作为载体,采用乳化复沉淀方法包裹迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）全菌制备疫苗微球。制备工艺研究结果表明:3%（m/v）海藻酸钠溶液,4%（m/v）Ca Cl2溶液,水油相比1:2,1%Span80乳化剂,搅拌速度1200rpm为最佳制备... 详细信息

本文采用海藻酸钠作为载体,采用乳化复沉淀方法包裹迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）全菌制备疫苗微球。制备工艺研究结果表明:3%（m/v）海藻酸钠溶液,4%（m/v）Ca Cl2溶液,水油相比1:2,1%Span80乳化剂,搅拌速度1200rpm为最佳制备工艺,微球包埋率达91.04%,微球平均粒径16.51±11.87μm。微球在体外人工模拟胃液和肠液16h释放率分别为0.8%和98.1%。用表达有绿色荧光蛋白的大肠杆菌做示踪标记,口灌免疫褐牙鲆（Pleuronectiformes）,结果表明微球能通过消化道到达后肠,冰冻切片可以看到后肠对荧光微球的吸收。免疫保护效应研究表明,疫苗组在初免后第14天血清效价达到峰值1:512;外周血白细胞吞噬率在初免后第21天达到峰值27.06%。初免第28天后用活菌攻毒,免疫保护率为77.33%。本研究优化了鱼类肠溶口服疫苗的制备工艺,疫苗评价结果表明,该口服疫苗可以有效激活鱼体免疫反应,预防鱼类疾病的发生。

关键词：迟缓爱德华氏菌、口服疫苗、肠溶微球免疫保护效应

来源： cnki会议 cnki会议评论

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科学养鱼 2023年第2期 41-42页

作者：郝俊徐晓丽薄其康王雪惠王娜姚学良张鹏包海岩天津市水产研究所天津300221 全国水产技术推广总站北京100125 天津市北辰区农业发展服务中心天津300400 天津市动物疫病预防控制中心天津300402

大口黑鲈近3年在天津养殖面积逐渐扩大,成鱼售价在每年8、9月达到峰值,进入10月价格迅速下降。为在此期间使大口黑鲈达到上市规格,采用工厂化车间、温棚与室外池塘接力养殖模式,可延长本地区大口黑鲈生长期,缩短了养殖周期,节约养殖成本... 详细信息

大口黑鲈近3年在天津养殖面积逐渐扩大,成鱼售价在每年8、9月达到峰值,进入10月价格迅速下降。为在此期间使大口黑鲈达到上市规格,采用工厂化车间、温棚与室外池塘接力养殖模式,可延长本地区大口黑鲈生长期,缩短了养殖周期,节约养殖成本,提高了养殖效益,实现了利润最大化。现将其技术总结如下,以期为天津及周边盐碱水域养殖业者提供技术参考。

关键词：养殖业者养殖成本大口黑鲈养殖周期盐碱水高效养殖技术养殖模式利润最大化

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牙鲆肠道益生菌的分离筛选及益生效果评价

天津农业科学 2023年第8期29卷 36-43页

作者：王雪惠王祯辉董学旺郝俊耿绪云孙金生天津市水产研究所天津300221 天津市海发珍品实业发展有限公司天津300452 天津市动物疫病预防控制中心天津300402 天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室天津300387

为获得安全有效的牙鲆益生菌,从牙鲆(Paralichthys olivaceus)肠道分离到94株菌,经溶血性、消化酶活力测试筛选出3株候选菌:Y1、Y5、I66,进行16S rDNA分子鉴定,分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloid... 详细信息

为获得安全有效的牙鲆益生菌,从牙鲆(Paralichthys olivaceus)肠道分离到94株菌,经溶血性、消化酶活力测试筛选出3株候选菌:Y1、Y5、I66,进行16S rDNA分子鉴定,分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloidophilus)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。经安全性检验后,开展为期4周的投喂试验,分别将3株菌以1×10^(8) CFU·g^(-1)添加到饲料中投喂牙鲆,为3个试验组,同时设对照组(C),定期检测各组鱼血液先天免疫指标。结果发现,与对照组相比,试验组鱼淋巴细胞吞噬百分比显著升高(P<0.05),血清碱性磷酸酶(AKP)和溶菌酶(LYZ)活性显著升高(P<0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)活性极显著升高(P<0.01)。投喂相应饲料4周,腹腔注射溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)攻毒,试验组鱼死亡延迟,累积死亡率显著低于对照组(P<0.05)。综上,Y1、Y5和I66是牙鲆安全有效的益生菌,能促进先天免疫,提高抗病力,具有推广应用优势和潜力。

关键词：牙鲆益生菌酶活先天免疫抗病力

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天津地区盐碱水南美白对虾健康养殖技术

科学养鱼 2022年第12期 35-37页

作者：郝俊徐晓丽薄其康王雪惠王娜姚学良张鹏包海岩杨婧天津市水产研究所天津300221 全国水产技术推广总站北京100125 天津市北辰区农业发展服务中心天津300400 天津市动物疫病预防控制中心天津300402 天津市农村社会事业发展服务中心天津300384

天津地区盐碱化水域面积大,盐碱化程度比较高,盐碱水作为养殖用水的历史比较悠久,积累了大量盐碱水养殖生产经验。其中盐碱水养殖南美白对虾,经过20余年的实践,形成了适宜本地区的盐碱水养殖模式与养殖技术,现将其总结为盐碱水南美白对... 详细信息

天津地区盐碱化水域面积大,盐碱化程度比较高,盐碱水作为养殖用水的历史比较悠久,积累了大量盐碱水养殖生产经验。其中盐碱水养殖南美白对虾,经过20余年的实践,形成了适宜本地区的盐碱水养殖模式与养殖技术,现将其总结为盐碱水南美白对虾健康养殖技术,以期为天津及周边类似盐碱水域养殖从业者提供技术参考。

关键词：盐碱水盐碱化程度南美白对虾养殖用水养殖模式健康养殖技术水域面积天津地区

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溃疡性结肠炎活动期疗效预测模型构建研究

北京中医药大学学报 2023年第4期46卷 528-535页

作者：王雪惠陈韵如郑酉友王新月孙慧怡王建云李军祥宋振梅刘芳卜志军刘建平刘兆兰北京中医药大学循证医学中心北京100029 北京中医药大学第三附属医院北京中医药大学东直门医院北京中医药大学东方医院中日友好医院

目的基于五味苦参肠溶胶囊治疗溃疡性结肠炎的患者数据,探讨中医药疗效预测模型构建的可行性及其方法要点。方法选择五味苦参肠溶胶囊Ⅲ期临床试验的试验组(五味苦参肠溶胶囊)作为研究对象,经过8周试验后,数据资料完整的患者共274例。... 详细信息

目的基于五味苦参肠溶胶囊治疗溃疡性结肠炎的患者数据,探讨中医药疗效预测模型构建的可行性及其方法要点。方法选择五味苦参肠溶胶囊Ⅲ期临床试验的试验组(五味苦参肠溶胶囊)作为研究对象,经过8周试验后,数据资料完整的患者共274例。统计分析软件使用R语言4.1.0,纳入全部待筛选变量构建多因素Logistic回归模型,筛选P<0.05的变量纳入最终模型;绘制列线图;采用Bootstrap法重复抽样1000次对模型进行内部验证,计算C指数并绘制校准图,评价模型的区分度及校准度;并进行Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和外部验证,对模型进行总体评价。结果筛选出溃疡性结肠炎完全缓解的促进因素为:患者(15~65岁)接受治疗时年龄小(OR=0.96,95%CI:0.94~0.99,P=0.002)、非慢性持续型(与初发型比,OR=0.36,95%CI:0.18~0.74,P=0.005)、镜下无出血(OR=0.42,95%CI:0.22~0.82,P=0.011)、红细胞沉降率降低(OR=0.97,95%CI:0.95~0.99,P=0.006)。使用上述变量构建最终模型,并绘制列线图,校正后的C指数为0.735(95%CI:0.672~0.797),模型区分度尚可;绘制校准图可见校准曲线与标准线大致贴合,模型校准度尚可。对模型进行Hosmer-Lemeshow拟合优度检验(χ^(2)=7.07,P=0.53),模型拟合良好。对模型进行外部检证,C指数及置信区间为0.54(95%CI:0.44~0.65)。结论利用随机对照试验的数据进行预测模型构建具有一定可行性;根据本研究的数据所建立的预测模型,经过大样本验证后,有可能为临床监测和针对性治疗提供有效的测评工具。

关键词：溃疡性结肠炎五味苦参肠溶胶囊列线图 Bootstrap法

鱼类迟缓爱德华氏菌肠溶口服疫苗的制备及免疫保护效应研究

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天津农学院学报 2024年第2期31卷 51-55页

作者：魏俊利薛淑霞孙妍王雪惠董学旺孙金生天津市动物疫病预防控制中心天津300402 天津师范大学生命科学学院天津300387 天津市水产研究所天津300221

本文采用海藻酸钠作为载体,采用乳化复沉淀方法包裹迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)全菌制备疫苗微球。制备工艺研究结果表明:3%(m/v)海藻酸钠溶液,4%(m/v)CaCl_(2)溶液,水油相比1∶2,乳化剂Span801%,搅拌速度1200 r/min为最佳制备... 详细信息

本文采用海藻酸钠作为载体,采用乳化复沉淀方法包裹迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)全菌制备疫苗微球。制备工艺研究结果表明:3%(m/v)海藻酸钠溶液,4%(m/v)CaCl_(2)溶液,水油相比1∶2,乳化剂Span801%,搅拌速度1200 r/min为最佳制备工艺,微球包埋率达91.04%,微球平均粒径(16.51±11.87)μm。通过人工胃肠液对疫苗微球的耐受性进行分析,微球在体外人工模拟胃液和肠液中16h释放率分别为0.8%和98.1%。用表达有绿色荧光蛋白的大肠杆菌做示踪标记,口灌免疫半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther),疫苗能耐受胃的酸性环境影响,通过前消化道到达后肠。免疫保护效应研究表明,口腔灌注疫苗后,出现特异性和非特异性免疫应答,疫苗组在初免后第14天血清效价达到峰值1∶322;外周血白细胞吞噬率在初免后第14天达到峰值27.06%,吞噬指数在初免后第14天达到峰值1.65。初免后第28天用迟缓爱德华氏菌活菌攻毒,对照组死亡率58.82%,疫苗组死亡率13.33%,免疫保护率为77.33%。本研究优化了鱼类肠溶口服疫苗的制备工艺,疫苗免疫评价结果表明,该口服疫苗可以有效激活鱼体免疫反应,预防鱼类疾病发生。

关键词：迟缓爱德华氏菌口服疫苗肠溶微球免疫保护效应