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中国中南部G8P[8]型A组轮状病毒全基因组遗传特征研究

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病毒学报 2024年第1期40卷 27-37页

作者：熊光萍田毅范佳欣唐晓苹董梦洁车如意李伟红唐梅荣周珺刘颂王铭月李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 沧州医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室沧州061001 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 北京市疾病预防控制中心北京100013 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 江西省疾病预防控制中心南昌330046 青岛市疾病预防控制中心青岛266033

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测... 详细信息

G8基因型轮状病毒已在我国出现并迅速增加。本研究拟对采集于中国中南部5岁以下急性胃肠炎患儿的7例G8P[8]型RVA毒株进行全基因组分子特征分析。对轮状病毒特异性扩增结合高通量测序方法对中国中南部14株G8P[8]型RVA毒株进行全基因组测序。利用MEGA11.0、Geneious Prime、Geneious9.0.2和DNASTAR软件对RVA毒株进行全序列及遗传变异和进化分析。7株G8P[8]型RVA的基因分型为G8-P[8]-I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E1-H2,显示为DS-1样基因型。系统进化树结果显示,本研究中国中南部7株G8P[8]分为两大谱系G8-I(13株)和谱系G8-Ⅱ(1株),VP7的最大分支可信度(MCC)树表明,G8的平均进化率估计为1.4×10^(-3)替换/位点/年。G8P[8]基因型RVA在我国包括两个谱系,从该病毒在中国的出现到该病毒在中国的流行传播将经过1~2年,持续的全国RVA监测至关重要。

关键词：轮状病毒 G8P基因型分子特征平均进化率

基于慢病毒包装构建稳定表达Cas9蛋白的Caco-2细胞系

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中国生物制品学杂志 2024年

作者：王铭月刘欣奕张锦华章青王宏孔翔羽孙晓曼庞立丽李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所大连医科大学附属第二医院

目的采用成簇的规律性间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统构建基因敲除细胞文库，以人结肠腺癌细胞Caco-2为研究对象构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系。方法包装重组Cas9慢病毒并感染Caco-2细胞，经杀稻瘟菌素及2次有限稀释法筛选Caco-2/Cas9单克隆细胞，并进行PCR和Western blot鉴定。用同时表达GFP和带有GFP向导RNA(single guide RNA,sgRNA)的慢病毒感染Caco-2/Cas9单克隆细胞，经嘌呤霉素筛选后，采用流式细胞术检测结果计算Caco-2细胞株的敲除效率，CCK-8法检测其细胞增殖活性。结果共获得5株Caco-2/Cas9单克隆细胞系，分别命名为Caco-2/Cas9-2、Caco-2/Cas9-3、Caco-2/Cas9-4、Caco-2/Cas9-5和Caco-2/Cas9-6，均可扩增出392 bp的Cas9基因条带，Cas9蛋白在细胞中稳定表达，敲除效率分别为91.27%、20.30%、24.13%、11.33%、12.27%、8.89%;Caco-2/Cas9-4、Caco-2/Cas9-5、Caco-2/Cas9-6 3株单克隆细胞及未感染Caco-2细胞的增殖活性分别为2.07、1.75、1.46和1.40。Caco-2/Cas9-5、Caco-2/Cas9-6单克隆细胞与未感染Caco-2细胞比较，差异均无统计学意义（t分别为1.92和0.37,P均> 0.05）。结论筛选出1株具有Cas9高酶切活性且细胞增殖活性较未感染Caco-2细胞无显著变化的Caco-2/Cas9单克隆细胞系，即Caco-2/Cas9-6单克隆细胞，为进一步构建高覆盖率敲除细胞文库奠定了基础，也为筛选病毒感染有关基因和其他特定功能基因提供了平台。

关键词： Cas9蛋白 Caco-2细胞基因敲除成簇的规律性间隔短回文重复序列

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轮状病毒受体结合特征研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2022年第6期36卷 748-752页

作者：王铭月孙晓曼李丹地中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起人类和动物急性胃肠炎的重要病原体。结构蛋白VP8*(viral protein 8*,VP8*)位于RV最外层的刺突状VP4的头部,VP8*在受体识别和结合中发挥重要作用。目前对RV受体结合特性的研究主要集中在A组轮状病毒(group ... 详细信息

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起人类和动物急性胃肠炎的重要病原体。结构蛋白VP8*(viral protein 8*,VP8*)位于RV最外层的刺突状VP4的头部,VP8*在受体识别和结合中发挥重要作用。目前对RV受体结合特性的研究主要集中在A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)和C组轮状病毒(group C rotavirus,RVC)。本文对RV的蛋白结构、受体类型以及RVA和RVC受体结合特性及与受体相互作用的结构基础等研究进展进行综述。

关键词：轮状病毒 VP8*蛋白受体结合特征

基于CRISPR/Cas9系统Ⅰ型干扰素受体亚单位1基因敲除的Caco-2细胞系的构建

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中国生物制品学杂志 2023年第2期36卷 145-150,157页

作者：刘欣奕安妮章青王宏孔翔羽王铭月庞立丽段招军甘肃中医药大学公共卫生学院甘肃兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 中国医学科学院医药生物技术研究所北京100050

目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palinmic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)系统在人结肠腺癌细胞Caco-2中敲除Ⅰ型干扰素受体亚单位1(interferon alpha/beta receptor subunit 1,IFNAR1)基因,构建IFNAR1基因敲除Caco-2细胞系。方法利用CRISPR/Cas9技术设计特异性识别IFNAR1基因外显子区的sgRNA(single guide RNA)序列,构建LentiCRISPRv2-IFNAR1-sgRNA重组质粒,慢病毒包装后感染Caco-2细胞,嘌呤霉素抗性筛选,有限稀释法培养单克隆细胞系。通过靶基因测序和Western blot法验证IFNAR1基因敲除情况;通过加入外源性IFNβ检测IFNAR1基因敲除细胞CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)和干扰素刺激基因20(interferon-stimulatd gene 20,ISG20)mRNA水平。结果质粒LentiCRISPRv2-IFNAR1-sgRNA测序结果显示插入位置均位于BsmBⅠ酶切黏性末端。共获得2株IFNAR1基因敲除单克隆细胞株,测序结果显示Caco-2-IFNAR1-KO1的IFNAR1第6个外显子发生5 bp缺失,Caco-2-IFNAR1-KO2的第7个外显子发生18 bp缺失,同时有1 bp增加。与野生型Caco-2细胞相比,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞IFNAR1蛋白未见表达。相比于0 ng/mL IFNβ,在50 ng/mL外源IFNβ刺激下,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞CXCL10基因mRNA水平(t分别为0.566和1.268,P>0.05)和ISG20基因mRNA水平(t分别为1.522和1.733,P>0.05)均无明显升高;与野生型Caco-2细胞相比,在50 ng/mL外源IFNβ刺激下,Caco-2-IFNAR1-KO1和Caco-2-IFNAR1-KO2细胞CXCL10基因mRNA水平(t分别为6.763和6.777,P<0.05)和ISG20基因mRNA水平(t分别为5.664和5.653,P<0.05)均显著降低。结论利用CRISPR/Cas9技术成功获得了IFNAR1基因敲除的Caco-2细胞株,该细胞系依赖Ⅰ型IFN受体(interferon alpha/beta receptor,IFNAR)激活的下游分子被明显抑制,为进一步探讨病毒感染Caco-2细胞后的天然免疫反应及复制包装机制提供了有力的工具。

关键词：人结肠腺癌细胞 CRISPR/Cas9系统 Ⅰ型干扰素受体亚单位1基因基因编辑干扰素β CXC趋化因子配体10 干扰素刺激基因20

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基于频域分析的高速列车侧风倾覆机理

西南交通大学学报 2024年第2期59卷 315-322,342页

作者：王铭李星星李小珍西南交通大学土木工程学院四川成都610031 中国铁路设计集团有限公司天津300308

侧风作用下列车的动态环境以轮轨相互作用为主向,以空气动力作用为主演变,列车的侧风倾覆行为成为威胁列车行车安全性的主要诱因.首先,采用精细化车-轨耦合模型开展列车侧风倾覆的频域特性分析,以明确侧风倾覆响应对列车模型的敏感性;... 详细信息

侧风作用下列车的动态环境以轮轨相互作用为主向,以空气动力作用为主演变,列车的侧风倾覆行为成为威胁列车行车安全性的主要诱因.首先,采用精细化车-轨耦合模型开展列车侧风倾覆的频域特性分析,以明确侧风倾覆响应对列车模型的敏感性;基于考虑模态特性的频域分析框架,推导脉动风及轨道不平顺与列车倾覆动力响应间的传递函数,结合相应参数进行分析,以直观揭示列车的侧风倾覆机理.结果表明:列车倾覆行为受绕车体下心侧滚模态和车体沉浮模态控制影响,其风荷载影响要明显大于轨道不平顺;在轨道不平顺激励下,第一阶模态贡献主要由轨向不平顺引起,第二阶模态贡献主要由高低不平顺引起,在脉动风荷载激励下,其顺风向脉动风分量起主要贡献;车速、风速和风向角的增大都会引起列车动力响应的增大,进而降低列车安全运营时的最大允许风速;失效概率的增大会降低动力响应的极值,进而提高安全运营风速.

关键词：风效应高速列车侧风倾覆危险性频域分析解析模型

“式”的语义演变与修辞构式“X式Y”的形成

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语文研究 2024年第3期 42-48页

作者：王铭宇澳门大学人文学院中国澳门999078

文章利用19世纪中期至20世纪中期中日大规模历时语料库,考察“X式”与“X式Y”在这一个世纪的历时演进,梳理还原“式”语义演变的具体路径和动因,以及“式”的演变之于修辞构式“X式Y”形成的关键性作用。文章认为,受语言接触的影响,“... 详细信息

文章利用19世纪中期至20世纪中期中日大规模历时语料库,考察“X式”与“X式Y”在这一个世纪的历时演进,梳理还原“式”语义演变的具体路径和动因,以及“式”的演变之于修辞构式“X式Y”形成的关键性作用。文章认为,受语言接触的影响,“式样”义的“式”语义发生了词汇性演变。其语义演变路径有二:一为“式”在特定语境中经由语用推理获得了抽象的“形式、方式、方法”义,二为“式”借用了日语的“类型”义。原本具有客观分类命名功能的“X式Y”,在“式”和“Y”均抽象化后,发生了主观化,形成具有主观评价功能的“X式Y”修辞构式。

关键词： X式Y 修辞构式语义演变主观化语言接触

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所谓“地方性”,所谓“世界性”

开放时代 2024年第1期 81-89,M0005页

作者：王铭铭北京大学社会学系

本文叙述了作者对“地方性知识”概念在伦敦和北京学界流传转化的经历,揭示了该概念如何与西方学界的普遍主义和特殊主义理论争辩相交缠,又如何在中国学界的文化论和权力论中得到运用。作者指出,学术概念的流传转化并非“知识进步史”... 详细信息

本文叙述了作者对“地方性知识”概念在伦敦和北京学界流传转化的经历,揭示了该概念如何与西方学界的普遍主义和特殊主义理论争辩相交缠,又如何在中国学界的文化论和权力论中得到运用。作者指出,学术概念的流传转化并非“知识进步史”可以解释,旧概念以新面目出现,与学人之间的相互关系及他们用以处理问题的不同方式相关。在新时代,“地方性知识”概念及其反思仍引发新求索。作者致力于研究不同文化的“世界思想”“地方性”的世界意涵、特殊性与普遍性的辩证法。这些求索与“地方性知识”概念相关,出自对该概念所代表的解释之学及过去数十年中出现的“后解释”之学的反思,有助于克服文化齐平主义和特殊-普遍二元对立主义的偏差。

关键词：地方性知识文化权力普遍性世界性

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“人类新史”何以可能？

读书 2024年第1期 41-50页

作者：王铭铭

让·雅克·卢梭在其杰作《论人类不平等的起源和基础》中称，最初的人生活在“自然状态”下，无不平等现象存在，人们对不平等没什么感受。随着文明的到来，不平等出现了。文明先表现为人的能力的开发和思想的进步，接着表现为私有制和...

让·雅克·卢梭在其杰作《论人类不平等的起源和基础》中称，最初的人生活在“自然状态”下，无不平等现象存在，人们对不平等没什么感受。随着文明的到来，不平等出现了。文明先表现为人的能力的开发和思想的进步，接着表现为私有制和法律的建立，前者使不平等成为可能，后者使之稳定和合法。

关键词：

供应及需求中断下农产品批发商弹性供应链设计研究

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系统工程理论与实践 2024年第2期44卷 595-611页

作者：李珠月赵培忻山东大学管理学院济南250000

以批发市场为核心的农产品供应链是我国农产品流通的主渠道,在保障城市供应、维持农产品供应方面发挥重要的作用.一些批发市场关停、供应中断等会严重影响批发商的正常经营,因此,如何为批发商设计应对此类中断风险的供应链愈发重要.目... 详细信息

以批发市场为核心的农产品供应链是我国农产品流通的主渠道,在保障城市供应、维持农产品供应方面发挥重要的作用.一些批发市场关停、供应中断等会严重影响批发商的正常经营,因此,如何为批发商设计应对此类中断风险的供应链愈发重要.目前针对农产品批发市场的研究较少,一般的供应链设计问题较难反映批发商的采购特点及其面临的中断风险.基于此,本文以供应链利润最大化为目标,根据批发商的经营过程提出了多源采购、加固供应商、后备供应商、后备需求方弹性策略,构建了同时考虑供应需求中断、产品分级、折扣定价、易腐特性的农产品批发商弹性供应链模型,为批发商选择供应商和分销中心,并确定采购数量和运输方案.本文采用蒙特卡罗抽样和k-medoids聚类生成供应及需求中断场景,并对不同定价方案、需求变化、弹性策略、设施中断、中断强度下的农产品供应链设计结果进行敏感性分析,为批发商的科学决策提供参考.

关键词：批发商供应链设计供应商选择供应链中断弹性策略

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