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兰州百合糖蛋白（LGP）的结构表征与免疫调节活性研究

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兰州百合糖蛋白（LGP）的结构表征与免疫调节活性研究

作者：王铖博西北师范大学

学位级别：硕士

糖蛋白是一种糖类与蛋白质通过共价键结合在一起的生物大分子。糖蛋白种类繁多,广泛存在于自然界的动植物和微生物中,以多种形式存在于生物体内,在机体生命活动中起着复杂而重要的功能。研究表明,糖蛋白具有多种生物学活性,在免疫调节... 详细信息

糖蛋白是一种糖类与蛋白质通过共价键结合在一起的生物大分子。糖蛋白种类繁多,广泛存在于自然界的动植物和微生物中,以多种形式存在于生物体内,在机体生命活动中起着复杂而重要的功能。研究表明,糖蛋白具有多种生物学活性,在免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等方面有着重要的作用。因此,糖蛋白在功能性食品及药物研究等领域有着广阔的开发前景。本文以兰州百合作为研究对象,以超声辅助缓冲溶液提取得到兰州百合糖蛋白组分,对其进行结构表征及理化性质研究,并以小鼠巨噬细胞系RAW 264.7为细胞模型,研究了兰州百合糖蛋白纯化组分在细胞水平的免疫调节活性。论文主要包括以下几个部分:(1)新鲜兰州百合鳞片经一系列预处理后,石油醚回流脱脂,以pH 7.4的0.01 mol/L PBS缓冲溶液提取,盐析分离糖蛋白组分,透析、冷冻干燥得到兰州百合糖蛋白粗品LGP,得率为2.09%;粗品复溶后,使用Sephadex G-200凝胶柱及DEAE-Cellulose 52阴离子交换柱进一步纯化,HPLC和Sephadex G-100进行纯度鉴定,得到了糖蛋白的两个纯化组分LGP-1和LGP-2。(2)对纯化得到的LGP-1和LGP-2进行结构表征及理化性质研究。LGP-1的糖含量和蛋白质含量分别为55.80%和43.04%,LGP-2的糖含量和蛋白质含量分别为62.52%和35.28%;红外光谱(FT-IR)结果表明,LGP-1和LGP-2均具有糖和蛋白质的特征吸收峰;分子量测定结果为,LGP-1的重均分子量(Mw)为3.639×10,而LGP-2则为9.311×10,分散系数LPG-1为1.950,较LGP-2的2.927更小;β-消去反应结果表明,LGP-1和LGP-2均含有O-连接的糖肽键;气相-质谱联用测得LGP-1由甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比为1.07:1.01,LGP-2则由甘露糖、葡萄糖和半乳糖三种单糖组成,其摩尔比为1.04:4.64:5.43;氨基酸组成分析结果表明,LGP-1由16种氨基酸组成,不含有甲硫氨酸,而LGP-2则由15种氨基酸组成,缺少甲硫氨酸和酪氨酸,LGP-1和LGP-2中均含有大量的人体必需氨基酸;圆二色谱图表明,LGP-1与LGP-2的蛋白质主链二级结构均以β-折叠为主;扫描电子显微镜观察发现,LGP-1呈现大小比较均一、表面光滑的球型或椭球型,而LGP-2则呈现出立方体的表观形态,LGP-1的粒径分布在0.3.9μm范围之内,LGP-2的粒径分布在0.6.8μm范围之内。(3)以小鼠巨噬细胞系RAW 264.7研究LGP-1和LPG-2的免疫调节活性。CCK-8实验研究对细胞活力的影响,结果表明,两者均可显著促进RAW 264.7细胞的增殖,且呈现浓度依赖性。Griess法测定NO的释放能力、ELISA法测定TNF-α的分泌,判断LGP对RAW 264.7细胞的免疫调节作用。结果表明,当细胞培养时间为48 h,加样浓度达到100μg/mL时,NO释放量和TNF-α含量达到最大。由此可知,LGP-1和LGP-2均能促进RAW 264.7细胞的增殖,并且能够激活该细胞的免疫功能,由此推测兰州百合糖蛋白组分有着很好的免疫调节活性和抗肿瘤活性。上述兰州百合糖蛋白的结构表征及免疫调节活性的研究,迄今尚未见相同文献报道。

关键词：兰州百合糖蛋白分离纯化结构表征免疫调节活性

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空间计量经济视角下区域经济增长探析

经济研究导刊 2018年第2期 40-42页

作者：王铖博南京师范大学数学科学学院南京210000

我国经济社会发展水平不断提高,经济体制变化后区域内经济发展的作用显现越来越明显,区域经济发展作用于空间经济发展的效果越来越突出。引入拓展模型可知,空间位置能够对区域内经济体制发展产生相应作用,区域经济类型受到空间位置的影... 详细信息

我国经济社会发展水平不断提高,经济体制变化后区域内经济发展的作用显现越来越明显,区域经济发展作用于空间经济发展的效果越来越突出。引入拓展模型可知,空间位置能够对区域内经济体制发展产生相应作用,区域经济类型受到空间位置的影响而产生变化。针对该问题引入空间计量经济,为经济管理提供科学化的分析模式,能够从空间计量经济视角出发为区域内经济增长提供重要指导。为探讨空间计量经济视角下区域经济的增长,首先对空间计量经济学理论进行阐述分析,进而探讨基于空间计量经济视角下的区域经济增长特点,并对我国经济区空间计量进行分析和横向比较,以助于明确区域经济增长的未来发展方向。

关键词：空间计量经济增长区域经济

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甘遂中的新三萜及其抗氧化活性

中草药 2022年第8期53卷 2269-2273页

作者：马丽王嘉霖柴甜王铖博孟宪华杨军丽中国科学院兰州化学物理研究所中国科学院西北特色植物资源化学重点实验室甘肃省天然药物重点实验室甘肃兰州730000 中国科学院大学北京100049 西北民族大学甘肃兰州730030

目的对甘遂Euphorbia kansui块根中的三萜化学成分和抗氧化活性进行研究。方法采用多种柱色谱法进行分离纯化,并运用谱学分析鉴定化合物的结构。通过CCK-8法,对分离的化合物在SH-SY5Y细胞中的抗氧化活性进行了筛选。结果从甘遂块根... 详细信息

目的对甘遂Euphorbia kansui块根中的三萜化学成分和抗氧化活性进行研究。方法采用多种柱色谱法进行分离纯化,并运用谱学分析鉴定化合物的结构。通过CCK-8法,对分离的化合物在SH-SY5Y细胞中的抗氧化活性进行了筛选。结果从甘遂块根甲醇提取物中分离鉴定出5个三萜,其中包括3个大戟烷型,分别为大戟-8,24-二烯-3β-醇-7,11-二酮(1)、(24R)-大戟-8,25-二烯-3β,24-二醇(2)、大戟二烯醇(3);2个羊毛脂烷型三萜,3β,11β-二羟基羊毛脂-8,24-二烯-7-酮(4)、3β,7β-二羟基羊毛脂-8,24-二烯-11-酮(5)。结论化合物5为新化合物,为羊毛脂烷型三萜,命名为甘遂羊毛脂酮A;化合物1和4为首次从该植物中分离得到;化合物2和5在SH-SY5Y细胞中具有一定的抗氧化能力和潜在的神经保护活性。

关键词：甘遂三萜大戟烷型三萜羊毛脂烷型三萜甘遂羊毛脂酮A 大戟二烯醇抗氧化活性神经保护活性

不同取代度蕨麻硒多糖的制备、表征及体外抗氧化活性

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食品工业科技 2019年第12期40卷 191-198页

作者：慕星星石继鹏王铖博赵澜赵海红张继西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070 甘肃省特色植物有效成分制品工程技术研究中心甘肃兰州730070

硒多糖具有抗金属中毒、抗氧化、抗病毒等多种作用,其结构与活性密切相关。本文以从我国传统藏药蕨麻中提取的蕨麻多糖为前体物,通过单因素和响应面设计来优化工艺并调控条件制备出不同取代度的蕨麻硒多糖,使用尺寸排除色谱-激光光散射... 详细信息

硒多糖具有抗金属中毒、抗氧化、抗病毒等多种作用,其结构与活性密切相关。本文以从我国传统藏药蕨麻中提取的蕨麻多糖为前体物,通过单因素和响应面设计来优化工艺并调控条件制备出不同取代度的蕨麻硒多糖,使用尺寸排除色谱-激光光散射联用仪、紫外光谱仪、红外光谱仪、热重分析仪、扫描电镜对产物结构进行表征,最后评估了不同取代度蕨麻硒多糖的体外抗氧化活性。结果表明:蕨麻硒多糖的最佳硒化时间为134.84 min,温度78.39℃,催化剂量49.37 mg,投料比PAP∶H2SeO3=1∶0.81,此条件下产物的硒含量可达到8518.81μg/g;制备出的五种取代度的蕨麻硒多糖结构中均含有Se=O键和Se-O键,即实现了蕨麻多糖的硒化;取代度越高的蕨麻硒多糖的分子量越小、热稳定性越低、空间结构越松散,蕨麻硒多糖对O-2·、·OH和DPPH·的清除能力明显且随硒取代度的增加而增强。

关键词：蕨麻硒多糖取代度制备表征活性

刺槐豆胶/瓜尔豆胶复合体系的流变学性质研究

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食品工业科技 2017年第14期38卷 40-45页

作者：郭杰郭肖张朝阳王铖博慕星星张继兰州职业技术学院甘肃兰州730070 西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070 甘肃省特色植物有效成分制品工程技术研究中心甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050

研究刺槐豆胶(LBG)/瓜尔豆胶(GG)复合体系的流变学性质,并采用流变学的模型进行拟合分析。实验表明:BG/GG复合体系为非牛顿流体,流动曲线服从Carreau模型,随着LBG比例的增大,其粘度越小,非牛顿性越不明显,触变性越低。LBG与GG复配对粘... 详细信息

研究刺槐豆胶(LBG)/瓜尔豆胶(GG)复合体系的流变学性质,并采用流变学的模型进行拟合分析。实验表明:BG/GG复合体系为非牛顿流体,流动曲线服从Carreau模型,随着LBG比例的增大,其粘度越小,非牛顿性越不明显,触变性越低。LBG与GG复配对粘度的影响可产生协同作用,LBG/GG=1∶9时,复合体系粘度最大。在频率扫描范围内,LBG/GG复合体系同时具有粘性和弹性,随不同的角频率处理展现不同的动态粘弹性行为,LBG/GG=1∶9时,复合体系的动弹粘弹性最大。

关键词：刺槐豆胶瓜尔豆胶流动性触变性动态黏弹性协同作用

具有抗菌性能的载药复合微纳米纤维的制备及其结构和性能表征

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高分子通报 2020年第4期 37-43页

作者：陈乐乐丁玲王铖博滕桂香农金旺邱婷张继西北师范大学生命科学学院兰州730070 甘肃特色植物有效成分制品工程技术研究中心兰州730070

利用静电纺丝技术制备了一种具有抗菌性能的氧化锌(ZnO)/聚乳酸(PLA)/聚己内酯(PCL)载药微纳米纤维膜,并通过扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)分别对复合膜的表面形态、元素组成和化学结构进行表征。通... 详细信息

利用静电纺丝技术制备了一种具有抗菌性能的氧化锌(ZnO)/聚乳酸(PLA)/聚己内酯(PCL)载药微纳米纤维膜,并通过扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)分别对复合膜的表面形态、元素组成和化学结构进行表征。通过抗菌实验评价了复合膜的抗菌性能,用紫外分光光度计测试复合膜在体外的药物释放行为。结果显示,以物理共混的方式将ZnO和氢溴酸高乌甲素(LAH)成功载入复合微纳米纤维;与PLA/PCL复合微纳米纤维膜相比,ZnO/PLA/PCL复合微纳米纤维膜表现出更好的抗菌效率。当ZnO含量为10%(wt)时,复合微纳米纤维膜具有最佳的抗菌性能;药物释放性能结果表明,ZnO/PLA/PCL复合微纳米纤维膜具有良好的药物缓释性能。

关键词：静电纺丝微纳米纤维氧化锌聚乳酸聚己内酯

陕甘花楸果实多糖的结构表征及抗氧化活性研究

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广西植物 2019年第11期39卷 1527-1533页

作者：王铖博陈乐乐焦彩珍石继鹏慕星星张继西北师范大学生命科学学院兰州730070 甘肃特色植物有效成分制品工程技术研究中心兰州730070

陕甘花楸(Sorbus koehneana)是我国西北地区特有的灌木之一,主要被用于观赏和制作家具,但对其有效成分的研究却鲜见报道,从而限制了陕甘花楸产业的进一步开发和利用。该研究以陕甘花楸果实为原料,经石油醚脱脂后,采用超声辅助水提醇沉... 详细信息

陕甘花楸(Sorbus koehneana)是我国西北地区特有的灌木之一,主要被用于观赏和制作家具,但对其有效成分的研究却鲜见报道,从而限制了陕甘花楸产业的进一步开发和利用。该研究以陕甘花楸果实为原料,经石油醚脱脂后,采用超声辅助水提醇沉法提取、Sevag法脱蛋白,得到了较纯的花楸果实多糖(SSP),并对其进行结构表征和抗氧化活性研究。结果表明:(1)经苯酚-硫酸法测得多糖纯度为65.8%;FT-IR检测官能团,发现在3420 cm-1、2929 cm-1和1733 cm-1处存在多糖的典型吸收峰;用SEC-LLS测得重均分子量(Mw)为1.739×105,数均分子量(Mn)为5.052×104,多分散系数为3.443,表明分子量分布较为均一;经三氟乙酸酸解、糖腈衍生化等处理及气相-质谱联用法测定SSP的单糖组成,表明SSP由甘露糖、葡萄糖和未知单糖等3种单糖组成,摩尔比为2.2∶1.4∶6.4。(2)体外抗氧化活性实验表明:SSP具有很好的DPPH清除活性、超氧阴离子清除活性以及较强的还原力;当SSP浓度为2 mg·mL-1时,SSP对DPPH自由基的清除能力相当于BHT的96%,对超氧阴离子自由基清除能力为Vc的76.07%,还原能力等价于Vc的92%。以上表明该多糖可以用于抗衰老和抗炎等方面,是一种优良的天然抗氧化剂,为花楸资源的进一步开发利用提供了更为广阔的前景。

关键词：陕甘花楸多糖提取纯化结构表征抗氧化活性

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辣椒籽中脂肪酸和微量元素的测定

生物学通报 2018年第5期53卷 57-60页

作者：张朝阳丁保平王铖博王珊珊姚健张继西北师范大学生命科学学院甘肃兰州730070 甘肃特色植物有效成分制品工程技术研究中心甘肃兰州730070

分析和测定辣椒籽中微量元素和脂肪酸的含量。用石油醚作溶剂在索氏提取器中提取辣椒籽的脂肪酸,用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行分析,按峰面积归一化法并通过数据库处理,求出脂肪酸成分的百分含量。经硝酸-高氯酸体系消解,应用火焰... 详细信息

分析和测定辣椒籽中微量元素和脂肪酸的含量。用石油醚作溶剂在索氏提取器中提取辣椒籽的脂肪酸,用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行分析,按峰面积归一化法并通过数据库处理,求出脂肪酸成分的百分含量。经硝酸-高氯酸体系消解,应用火焰原子吸收光谱法测定辣椒籽中5种微量元素的含量。结果表明:辣椒籽中脂肪酸中主要成分为12-甲基-十三烷酸(0.93%)、棕榈酸(13.01%)、亚麻酸(10.42%)、亚油酸(43.80%)和油酸(18.66%),占检出总量的89.52%;对辣椒皮和辣椒籽中Zn、Cu、Ca、Fe、Mn 5种元素进行检测,得出5种微量元素在辣椒籽中的含量均高于辣椒皮中的含量,辣椒籽中含有丰富的微量元素。因此,辣椒籽是一种值得综合利用的副产品资源。

关键词：辣椒籽脂肪酸微量元素气相色谱-质谱联用法

兰州百合糖蛋白LGP-2的提取纯化及结构表征研究

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生物学通报 2019年第4期54卷 43-46页

作者：王铖博慕星星石继鹏陈佩佩张继西北师范大学生命科学学院

以兰州百合为原料,采用PBS缓冲溶液提取兰州百合糖蛋白,经Sephadex G-200和DEAE—Cellulose 52柱层析纯化得到2个组分:LGP-1和LGP-2。以LGP-2为研究对象,对其进行结构表征研究。傅里叶红外光谱表现出糖和蛋白质的特征吸收峰,糖链中存在... 详细信息

以兰州百合为原料,采用PBS缓冲溶液提取兰州百合糖蛋白,经Sephadex G-200和DEAE—Cellulose 52柱层析纯化得到2个组分:LGP-1和LGP-2。以LGP-2为研究对象,对其进行结构表征研究。傅里叶红外光谱表现出糖和蛋白质的特征吸收峰,糖链中存在吡喃糖构型和β-糖苷键;体积排阻色谱测定其重均分子量为9.311×10^4;β-消去反应结果则说明LGP-2含有O-连接的糖肽键;圆二色性光谱结果表明其主链二级结构以β-折叠为主。

关键词：兰州百合糖蛋白结构表征