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磁珠法结合实时定量PCR检测新型冠状病毒灭活疫苗中宿主细胞残留DNA的验证及应用

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中国生物制品学杂志 2022年第6期35卷 711-717页

作者：周艳萍卢佳李茜林凤杰杨安纳孟胜利王泽鋆申硕武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 国家联合疫苗工程技术研究中心湖北武汉430207

目的对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒(简称新冠)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用。方法利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA。... 详细信息

目的对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒(简称新冠)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用。方法利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA。将已知浓度的细胞DNA标准品系列稀释后,根据DNA标准品的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中的rcDNA进行定量分析。对方法进行线性和范围、专属性、准确度、精密度验证,并使用该方法对新冠灭活疫苗(Vero细胞)生产过程样品进行rcDNA及其片段大小检测。结果标准品检测范围为0.0003~30 pg/μL,该方法的标准曲线决定系数(R;)>0.99,扩增效率为90%~110%。质控样品回收率为50%~150%,相对标准偏差(RSD)均小于30%。试验结果的各项参数均符合标准。结论磁珠法可解决rcDNA检测中样品前处理提取DNA的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对新冠疫苗生产过程中的rcDNA进行定量测定。该方法适用于新冠疫苗中rcDNA的检测及疫苗生产过程和成品的质量控制,对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制也具有借鉴意义。

关键词：新型冠状病毒灭活疫苗 Vero细胞宿主细胞残留DNA 实时定量聚合酶链反应磁珠法

新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中β-丙内酯残留气相色谱检测方法的建立、优化及验证

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中国生物制品学杂志 2021年第4期34卷 448-452页

作者：杨安纳王吟杨东升周艳萍涂晶卢佳李茜施金荣王泽鋆申硕武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207

目的建立新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)残留量的气相色谱检测方法,并进行优化及验证。方法气相色谱条件:进样口温度为180℃,分流比为2∶1,载气为氮气,检测器温度为250℃,运行时间为10 min。对柱温条... 详细信息

目的建立新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)残留量的气相色谱检测方法,并进行优化及验证。方法气相色谱条件:进样口温度为180℃,分流比为2∶1,载气为氮气,检测器温度为250℃,运行时间为10 min。对柱温条件(升温程序和等温程序)、流速(1和3 mL/min)和进样量(1和0.2μL)进行优化。同时验证方法的专属性、检测限及定量限、线性范围、重复性、耐用性。采用建立的方法检测新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)生产工艺中灭活和水解过程及疫苗原液中BPL含量的变化。结果最佳检测条件:柱温条件为等温程序,流速为3 m L/min,进样量为0.2μL。BPL对照品溶液与疫苗原液混合液的BPL峰保留时间为2.328 min,与BPL对照品溶液一致,BPL对照品溶液连续6次进样的峰面积和保留时间的RSD均≤4.0%,BPL对照品溶液在不同检测器温度及进样口温度条件下检测的峰面积和保留时间的RSD均≤4.0%,BPL对照品溶液在3.125~500μg/mL浓度范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,回归方程为y=1.3991 x-0.5586,相关系数(r)为0.9999,定量限为2.530μg/mL,检测限为0.843μg/mL。疫苗灭活过程中BPL含量高于定量限,水解后其含量远低于检测限,疫苗原液中未检测到BPL。结论建立了新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)中BPL残留含量的气相色谱检测方法,该方法具有良好的专属性、精密性及耐用性,可用于检测疫苗各生产环节中BPL的含量。

关键词：新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞) β-丙内酯气相色谱法

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山区高速公路竖曲线坡长折减的分析研究

中外公路 2015年第6期35卷 9-13页

作者：王泽云李俊董爱强朱鋆川海南省公路勘察设计院海南海口570206 长安大学公路学院

通过计算分析了凹凸形竖曲线中任意一点的纵坡值,并结合构成凹凸形竖曲线的不同情况进行分析,明确竖曲线坡长折减的条件。在此基础上提出了陡坡对应的最大坡长,并对现有JTG D20-2006《公路路线设计规范》(以下简称《规范》)规定的陡坡... 详细信息

通过计算分析了凹凸形竖曲线中任意一点的纵坡值,并结合构成凹凸形竖曲线的不同情况进行分析,明确竖曲线坡长折减的条件。在此基础上提出了陡坡对应的最大坡长,并对现有JTG D20-2006《公路路线设计规范》(以下简称《规范》)规定的陡坡对应的最大坡长值进行理论修正。

关键词：山区高速公路竖曲线纵坡最大坡长

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“一案双查”实践中的问题与对策

廉政文化研究 2017年第2期8卷 28-32页

作者：王江波蔡鋆泽中共泉州市委党校理论研究室福建泉州362000 中共泉州市纪委驻泉州市中级人民法院纪检组福建泉州362000

"一案双查"是问责的实施机制,其工作效率与质量直接影响问责工作的准确性、科学性与权威性,也倒逼"一岗双责"和"两个责任"的具体落实。各地对"一案双查"进行了大量有益探索,但在实践中也面临适用情形不一、责任界定困难、救济措施缺失... 详细信息

"一案双查"是问责的实施机制,其工作效率与质量直接影响问责工作的准确性、科学性与权威性,也倒逼"一岗双责"和"两个责任"的具体落实。各地对"一案双查"进行了大量有益探索,但在实践中也面临适用情形不一、责任界定困难、救济措施缺失、实施动力不足等问题,影响了问责的严肃性。应尽快出台操作性较强的规范性文件,对"一案双查"制度的主体、客体和程序等作出明确规定,为实施《问责条例》提供有力的制度支撑。

关键词： “一案双查” 实践困境问责

湖北襄阳2016-2017年埃可病毒11型流行株基因特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第2期41卷 133-142页

作者：魏真妮钱莎莎童叶青徐长征卢佳郭靖王文辉周艳萍王泽鋆孟胜利陈晓琦官旭华申硕武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室国家联合疫苗工程技术研究中心430207 湖北省疾病预防控制中心武汉43007

目的对2016—2017年中国湖北襄阳地区分离的埃可病毒11型(Echovirus 11,Echo11)基于VP1基因进行分子进化特征分析。方法采集2016—2017年中国湖北襄阳地区手足口病患儿肛拭子或咽拭子标本,应用real-time RT-PCR技术对肠道病毒阳性样本... 详细信息

目的对2016—2017年中国湖北襄阳地区分离的埃可病毒11型(Echovirus 11,Echo11)基于VP1基因进行分子进化特征分析。方法采集2016—2017年中国湖北襄阳地区手足口病患儿肛拭子或咽拭子标本,应用real-time RT-PCR技术对肠道病毒阳性样本进行筛选,对肛拭子或咽拭子样本进行病毒分离。采用常规RT-PCR方法对在人横纹肌瘤细胞上分离的Echo11病毒襄阳流行株VP1区和3株代表株全长基因扩增并进行序列分析,使用DNAStar7.0软件包中的MegAlign、MEGA6.0中的Data和Phylogeny软件对核苷酸和氨基酸序列同源性、突变位点进行分析和构建系统进化树等。使用SimPlot软件进行重组分析,对3株代表株全长序列和GenBank中下载的核苷酸序列进行BootScan扫描,生成相似性图。结果本研究从3494份手足口病患儿样本中共分离出Echo11病毒11株,占比0.31%。11株Echo11流行株的VP1基因同源性比较高。核酸序列和氨基酸序列同源性分别为98.4%~100.0%和98.3%~100.0%。11株Echo11襄阳流行株与Echo11原型株(Echo11/Gregory,X80059)核酸序列和氨基酸序列同源性分别为73.9%~74.8%和87.7%~88.7%。襄阳地区流行的Echo11毒株均属于D进化分支,与中国大陆部分地区2013年以来的流行株亲缘关系相近。襄阳流行株和2010年Echo1河南流行株和2015年的Echo6湖北流行株在多个区域有较高的相似度,说明襄阳流行株基因组的多个区域可能发生了重组。结论襄阳地区流行的Echo11毒株均属于D进化分支,2016—2017年襄阳地区流行的Echo11是重组株。

关键词：埃可病毒11型 VP1 进化分析肠道病毒重组

微波热解生物质强化分离废旧锂离子电池中锂的基础研究

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微波热解生物质强化分离废旧锂离子电池中锂的基础研究

作者：赵鋆泽昆明理工大学

学位级别：硕士

锂离子电池由于其优良的电化学性能受到了科研界和商业界的追捧,随之而来的大量报废锂离子电池成为了新的城市矿山。废旧锂离子电池中含有大量毒害物质以及有价金属元素,过去的几十年里落后的处理方式不断地危害着人类与环境的健康。相... 详细信息

锂离子电池由于其优良的电化学性能受到了科研界和商业界的追捧,随之而来的大量报废锂离子电池成为了新的城市矿山。废旧锂离子电池中含有大量毒害物质以及有价金属元素,过去的几十年里落后的处理方式不断地危害着人类与环境的健康。相反,高效环保地回收并提取废旧锂离子电池中的有价成分将会给人们带来巨大的环境利益和经济利益。本文首次将微波场的加热作用引入到了锂离子电池回收工艺中,系统地测定分析了废旧锂离子电池正极物质以及正极物质与还原剂的混合物料的介电特性,并研究了微波焙烧过程中物料体系的热力学、物相变化等;本文首次借助生物质热解强化三元锂离子电池正极材料分解、还原,并探究了热解停留温度、生物质含量、焙烧温度以及焙烧时间对金属锂浸出率的影响;同时,基于晶格塌陷模型,揭示了焙烧过程生物质热解与正极物质分解过程的偶合反应机制。最后利用Coats-Redfern模型研究了微波加热下生物质热解以还原锂离子电池正极物质过程中的动力学。主要研究结果如下:(1)研究发现废旧锂离子电池正极物质具有较高的相对介电常数和损耗角正切值,是良好的吸波材料。常温下,生物质还原剂的加入会略微降低正极粉末的介电性能,而传统的无烟煤还原剂的加入会略微增加正极粉末的介电性能。正极物质、混合粉末A(正极物质+生物质)、混合粉末B(正极物质+无烟煤)的热损耗能力分别在堆积密度为1.33 g/cm、1.4g/cm、1.219 g/cm时达到最大值;温度对混合粉末的介电性具有明显的影响,预还原阶段正极粉末与混合粉末B的介电性能优于混合粉末A,而还原焙烧阶段由于生物炭的产生混合粉末A的吸波效果得到了提高。(2)微波焙烧作用下,混合粉末A与混合粉末B中的正极物质分别在300℃与530℃下开始分解,相比于传统的无烟煤还原剂,生物质与正极粉末的还原反应具有更低的温度且产生的LiCO具有较好的晶型;正极物质的分解和生物碳的燃烧反应可以构成偶合反应,从而将镍钴锰酸锂的分解温度低到300℃。金属氧化物的还原与LiCO的生成可以构成一系列偶合反应,从而促进LiCO的形成。最后用格塌陷模型描述了正极物质在焙烧过程结构的塌陷与新物质的成键过程。(3)不同升温速率下的混合粉末A的热重数据与Coats-Redfern一级反应动力学方程的拟合效果很好,说明微波加热下果壳粉末与正极物质的反应过程受化学反应控制。对不同升温速率下的预还原阶段与还原焙烧阶段的热重数据进行拟合,发现在20K/min时拟合得到的活化能值最小,因此在升温速率为20K/min的条件下两个阶段的主反应最易进行;对不同生物质含量下的预还原阶段与还原焙烧阶段的热重数据进行拟合,发现预还原阶段的活化能基本集中在350 kJ/mol,而还原焙烧阶段,当生物质含量为20%时活化能最小,此时反应最易进行。(4)当热解停留温度为500℃,生物质含量为24%,还原焙烧温度为750℃以及还原焙烧时间为25min时,锂的浸出率达到最大值为93.4%。

关键词：锂离子电池回收微波加热生物质热解还原焙烧

基于VAR模型的人口结构与商品住房价格关系的实证研究——以杭州市为例

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基于VAR模型的人口结构与商品住房价格关系的实证研究——以杭州...

作者：陈鋆泽浙江财经大学

学位级别：硕士

我国的住房市场经历了从城镇福利分房与配给制到市场化的过程。随着社会经济的发展,市场中对住房旺盛的需求以及金融资本的流入使得住房市场进入了一个空前的繁盛期。习近平总书记在党的十九大报告中明确指出,要认清楚住房的定位是以居... 详细信息

我国的住房市场经历了从城镇福利分房与配给制到市场化的过程。随着社会经济的发展,市场中对住房旺盛的需求以及金融资本的流入使得住房市场进入了一个空前的繁盛期。习近平总书记在党的十九大报告中明确指出,要认清楚住房的定位是以居住为根本,杜绝市场中出现房价被越炒越高的现象。目前,我国人口开始进入老龄化阶段,城镇化的进程也在日益推进,人口结构发生了天翻地覆的改变。因此,在人口结构变化发生重大转变的时期,如何实现在住房市场上的“软着陆”,其与住房价格间存在着何种互动机制,在前人研究的基础上,本文对这一问题进行了深入探讨。本文以杭州市为例,从人口结构的三个方面:自然结构、社会经济结构以及地域结构,选取了性别比、抚养比、劳动力资源比重、家庭规模、收入结构、从业人员产业结构、人口净迁移率、非农业人口比重八个变量,研究其与杭州市住房市场的内在关联。首先,本文对相关概念进行了界定,并在理论分析的基础上提出了相应的假设,通过收集1994015年杭州市人口结构与住房价格的相关数据,建立VAR模型对各个假设进行了检验。最后,本文得出了各个变量的脉冲响应函数图,并通过方差分解得出了各因素对住房价格的解释程度。实证结果表明,杭州市住房价格的变化与抚养比、劳动力资源比重、家庭规模、收入结构、人口净迁移、非农业人口比重有关,而与性别比、从业人员产业结构无关。从人口自然结构层面上看,其本身对杭州市住房价格的变动解释力度并不强,长期来看社会中抚养比对于住房价格的波动要强于劳动力资源比重;从人口社会经济结构层面上看,家庭规模是影响杭州市住房价格的主要因素,收入结构在短期内会对住房价格造成较大影响,但不是主要影响因素;从人口地域结构层面上看,长期来看非农业人口比重是影响杭州市住房价格的主要因素,人口净迁移对住房价格的影响具有时滞性。最后,基于实证的结论与分析,本文为杭州市未来商品住房市场的发展提出了相关政策建议:(1)增加住房建设种类,完善基础配套,调整新建住房的单位面积;(2)坚决反对住房市场中的投机行为,建立廉租房和社会保障房新机制;(3)建立外来人口的综合管理模式,完善流动人口预警机制;(4)根据当地社会经济发展水平,控制人口城镇化速度,避免顾此失彼;(5)加强人口数据库的建设工作,重视人口因素与住房市场的内在联系,发挥政府“看得见的手”的引导作用。

关键词：人口结构 VAR模型商品住房价格

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股票流动性对企业突破式创新的影响

股票流动性对企业突破式创新的影响

作者：王婧鋆山西财经大学

学位级别：硕士

自党的十八大以来我国已经顺利进入创新性国家行列,全国高新技术企业数量由4.9万家增长到33万多家。但长期以来,我国企业仍主要通过学习和引进发达国家先进技术,对其进行改造升级、再利用的渐进式创新为主,关键核心技术“卡脖子”问题... 详细信息

自党的十八大以来我国已经顺利进入创新性国家行列,全国高新技术企业数量由4.9万家增长到33万多家。但长期以来,我国企业仍主要通过学习和引进发达国家先进技术,对其进行改造升级、再利用的渐进式创新为主,关键核心技术“卡脖子”问题仍旧存在。在这复杂多变的国内外环境下如何鼓励企业打破原有创新模式,激励企业“另辟蹊径”开拓新的发展领域,成为学者们普遍关注的问题。而资本市场作为企业进行外部融资,获取有效需求资金的重要市场,经济的不断发展带来资本市场的日益成熟的同时,我们应该考虑如何提升资本市场配置效率,让资金流向能够为社会创造出更多实际价值的企业,从而为企业突破式创新注入“新鲜血液”,不断推动我国的企业实现由技术引进,到技术模仿再到自主创新的质的飞跃。这一资本市场与公司创新相结合的话题有待进一步研究。因此,本文通过梳理总结前人的研究成果,结合发声-退出机制、管理者学习理论以及代理问题进行理论分析,选取我国符合条件的上市公司作为研究样本,研究股票流动性对企业创新及企业突破式创新的影响,紧接着就企业所有权和行业差异进行异质性分析,同时将机构投资者持股比例纳入研究框架中来研究股票流动性对企业突破式创新的作用路径,从而形成较为完整的研究框架体系。研究结果表明:股票流动性对企业创新具有正向促进作用,但却显著抑制了企业突破式创新,这可能是由于在高股票流动性下,一方面信息的高度透明以及股东的监管作用对企业管理者的短视行为起到了一定的抑制作用,使得管理者通过增加创新来回应各方的监督;但同时流动性的不断提高,使得股东能够自由买卖股票,股东出于追求自身利益最大化的考虑,任何负面信息的产生都会带来股价的波动,甚至产生崩盘风险,因此管理者会选择减少更为“激进”的突破式创新,寻求平稳发展。本文在稳健性检验中采用更换变量、引入PSM-DID模型来排除内生性、选择性误差等对实验结果的影响,得到的实验结果具有稳健性。此外,作用机制中引入了机构投资者持股比例这一变量,在两者的作用路径中发挥了部分中介作用,表明机构投资者持股比例的增加对企业管理者具有一定警示作用,使其出于对稳定股价等因素考量,进而降低企业突破式创新。本文的研究结果对上市公司治理、资本市场发展具有实际意义。本文的主要创新点在于:第一,聚焦企业突破式创新,延展股票流动性与企业创新之间的相关研究内容;第二,检验机构投资者持股比例这一中介机制的存在性,拓展了股票流动性与企业突破式创新的作用路径;第三,构建技术接近度、已知领域等指标,改进了对突破式创新的衡量方法。

关键词：股票流动性创新机构投资者产权性质

浓缩生长因子在口腔组织再生工程中的应用研究新进展

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中国医学科学院学报 2023年第3期45卷 500-505页

作者：陆英王似鋆邹多宏绍兴文理学院附属医院口腔科浙江绍兴312000 上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心、上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔外科上海200011

组织再生工程是治疗口腔软硬组织缺损的重要手段,生长因子作为组织再生工程的三要素之一,是获得理想的组织再生效果的必要条件。浓缩生长因子(CGF)是在富血小板血浆和富血小板纤维蛋白的制取基础上改变离心速度制备的新一代血液提取物,... 详细信息

组织再生工程是治疗口腔软硬组织缺损的重要手段,生长因子作为组织再生工程的三要素之一,是获得理想的组织再生效果的必要条件。浓缩生长因子(CGF)是在富血小板血浆和富血小板纤维蛋白的制取基础上改变离心速度制备的新一代血液提取物,内含丰富的生长因子和呈三维网架结构的纤维蛋白基质,能激活血管新生并促进组织的再生愈合,目前已被广泛应用于口腔软硬组织的修复与再生。本文将对CGF的制取、组成及其在口腔骨组织、口腔种植、牙周组织以及牙髓组织再生中的应用研究进展进行综述。

关键词：浓缩生长因子口腔组织修复与再生