人博卡病毒样颗粒的研制及初步应用

作     者：王泽鋆 

作者单位：武汉生物制品研究所 

学位级别：硕士

导师姓名：徐葛林;李天成

授予年度：2010年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：人博卡病毒 杆状病毒表达载体系统 病毒样颗粒 酶联免疫吸附试验 血清流行病学 

摘      要：2005年，瑞典学者首次报道在呼吸道疾病患者鼻咽分泌物中发现人博卡病毒1，随后，人博卡病毒2和人博卡病毒3又分别在急性迟缓型麻痹患儿和腹泻患儿的粪便中被相继发现。人博卡病毒是一类无包膜的单链线状DNA病毒，暂时划归为细小病毒科、细小病毒亚科、博卡病毒属。 由于缺乏有效的体外细胞培养体系和动物模型，人博卡病毒与人类呼吸道或胃肠道疾病的临床关联尚且未知。因此，使用基因工程方法大量制备人博卡病毒抗原，建立相应的血清学检测方法，将有助于解开这些疑问。 本研究使用昆虫细胞和杆状病毒表达载体系统表达人博卡病毒1、2和3衣壳蛋白VP2基因，重组衣壳蛋白VP2部可以自行组装成病毒样颗粒，使用纯化的人博卡病毒样颗粒建立酶联免疫吸附试验，检测200份西安地区健康婴儿、176份北京地区健康人血清中人博卡病毒1、2和3的IgG和IgM水平，以及373份日本福冈地区健康人血清中人博卡病毒1的IgG水平。 电泳及透射电镜结果显示，大量分子量约为60．5kD的蛋白释放入培养上清中，重组蛋白可以自行组装成不含核酸的空心病毒样颗粒，这些病毒样颗粒平均直径为22nm，颗粒密度约为1．31g／ml。人博卡病毒血清流行病学结果显示，婴儿中人博卡病毒1、2和3的IgG阳性率分别为20．0％、14．0％和13．5％;而10岁以上人群中人博卡病毒1、2和3的IgG阳性率升高至75．6％、44．3％和42．0％;但是日本福冈地区人博卡病毒1的IgG阳性率超过80％。与IgG流行趋势相反，婴儿中人博卡病毒的IgM阳性率明显高于成年人群。 昆虫细胞和杆状病毒表达载体系统可以有效表达人博卡病毒1、2和3衣壳蛋白VP2，并自行组装成病毒样颗粒。人博卡病毒在普通人群中广泛流行，成年人群中人博卡病毒的IgG的阳性率很高。