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黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第7期29卷 29-37页

作者：冯雪刘雅清刘滨马旭冉王敦方杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的:以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法:将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRN... 详细信息

目的:以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法:将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果:与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^(-1)组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P<0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px活力均有增加的趋势,且黄芩汤400 mg·L^(-1)组和SFN组与空白组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);同时,各组细胞HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2蛋白及mRNA的表达量均有明显升高的趋势(P<0.05,P<0.01)。经转染后,与空白组比较,模型组细胞内MDA和ROS的含量升高,而GSH-Px和SOD的活力及HO-1、GST、Keap1和NQO1蛋白及mRNA的表达量均有不同程度地降低(P<0.05,P<0.01),与药物孵育后,与模型组比较,SFN组细胞内SOD活力和SFN组、黄芩汤各给药组GSH-Px活力显著升高(P<0.01),黄芩汤400 mg·L^(-1)组、200 mg·L^(-1)组和SFN组细胞内SOD和GSH-Px活力均有升高的趋势(P<0.01),黄芩汤400 mg·L^(-1)组和SFN组MDA有降低的趋势,且各给药组ROS均有降低(P<0.01);HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2的蛋白及mRNA表达均有不同程度增加(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤可以通过调控Nrf2通路发挥抗氧化应激的作用。

关键词：黄芩汤氧化应激 Caco-2细胞 RNA干扰核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)信号通路

黄芩汤治疗溃疡性结肠炎及相关结肠癌的机制研究进展

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中国实验方剂学杂志 2023年第7期29卷 1-10页

作者：冯雪刘雅清刘滨马旭冉王敦方杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

溃疡性结肠炎是一种病因尚不明确的慢性肠道疾病,主要症状为腹痛、腹泻、黏液脓血便等,并可伴有多种并发症,转化为结肠癌的风险较高。近年来溃疡性结肠炎和相关结肠癌的发病率有上升的趋势,严重影响人体健康和生活质量。手术和免疫抑制... 详细信息

溃疡性结肠炎是一种病因尚不明确的慢性肠道疾病,主要症状为腹痛、腹泻、黏液脓血便等,并可伴有多种并发症,转化为结肠癌的风险较高。近年来溃疡性结肠炎和相关结肠癌的发病率有上升的趋势,严重影响人体健康和生活质量。手术和免疫抑制剂等是现代临床治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌的主要方法,但这些方法均有不同的不良反应,治疗效果不理想。多年来,中医药由于其不良反应小,疗效显著,在治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌方面备受关注。黄芩汤出自《伤寒论》,由黄芩、芍药、甘草和大枣组成,具有清热止利、和中止痛之功效,用于治疗溃疡性结肠炎疗效显著。黄芩汤成分复杂,以多靶点多途径发挥作用。经文献查阅并结合本课题组多年的研究成果,发现黄芩汤治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌的作用机制可能与保护肠黏膜屏障,抑制炎症反应,促进线粒体自噬,抑制氧化应激,调控肠道菌群、细胞周期、基因表达,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡等多种机制相关。现将近年来的研究情况进行较为详尽的综述,以期能够为黄芩汤作用机制的深入研究及临床用药提供理论参考。

关键词：溃疡性结肠炎结肠癌黄芩汤机制

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黄芩汤对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞的抗炎作用

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中国实验方剂学杂志 2023年第7期29卷 20-28页

作者：刘雅清刘滨马旭冉王敦方冯雪杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的:以RAW264.7细胞为炎症模型,探究黄芩汤的抗炎作用机制。方法:制备黄芩汤,筛选对RAW264.7细胞的安全剂量;将RAW264.7细胞接种于24孔板中,先后加入黄芩汤和脂多糖(LPS),分别采用Griess法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定一氧化氮(NO... 详细信息

目的:以RAW264.7细胞为炎症模型,探究黄芩汤的抗炎作用机制。方法:制备黄芩汤,筛选对RAW264.7细胞的安全剂量;将RAW264.7细胞接种于24孔板中,先后加入黄芩汤和脂多糖(LPS),分别采用Griess法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定一氧化氮(NO)和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))的含量;将RAW264.7细胞接种于6孔板中,设空白组、LPS组、LPS+黄芩汤组、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)抑制剂(PDTC)组、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂(SB203580)组、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂(PD98059)组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂(SP600125)组、Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)抑制剂(AG490)组,先后加入相应的抑制剂和黄芩汤,并经LPS刺激后,提取RNA和蛋白,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB p65、p38MAPK、ERK、JNK和JAK mRNA及蛋白的表达水平,探究黄芩汤通过调控NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和JAK/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路发挥抗炎作用的机制。结果:与空白组比较,LPS刺激后,模型组细胞中NO、IL-6、TNF-α、PGE_(2)的浓度明显增加(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,加入黄芩汤后,NO、IL-6、TNF-α、PGE_(2)分泌量有减少趋势(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,模型组细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65 mRNA及总蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,黄芩汤孵育后,炎症细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65总蛋白及mRNA的表达明显降低(P<0.05,P<0.01);同时各抑制剂组细胞内NF-κB p65总蛋白及mRNA表达均有下降趋势(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤能够通过NF-κB、MAPK和JAK/STAT信号通路抑制炎症反应。

关键词：黄芩汤炎症核转录因子-κB(NF-κB)信号通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路 Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路

基于Wnt信号通路研究黄芩汤干预炎症微环境下结肠癌细胞上皮间质转化与细胞周期进程的作用机制

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中草药 2023年第7期54卷 2155-2162页

作者：马旭冉王敦方冯雪刘雅清刘滨杨伟鹏山东中医药大学药物研究院山东济南250355 中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学基础医学院黑龙江哈尔滨150006

目的研究黄芩汤对炎症微环境下结肠癌HT-29细胞上皮间质转化与细胞周期进程的影响。方法使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导淋巴瘤THP-1细胞,取细胞上清液作为条件培养基,将条件培养基加入HT-29细胞培养体系中构建炎症微环境下结... 详细信息

目的研究黄芩汤对炎症微环境下结肠癌HT-29细胞上皮间质转化与细胞周期进程的影响。方法使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导淋巴瘤THP-1细胞,取细胞上清液作为条件培养基,将条件培养基加入HT-29细胞培养体系中构建炎症微环境下结肠癌细胞模型,给予黄芩汤(500、250、125μg/mL)干预后,Transwell法检测细胞迁移与侵袭能力;Western blotting检测海马无翅基因3a(recombinant wingless type MMTV integration site family member 3a,Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、E-cadherin、糖原合酶激酶-3β(glycogen synthasc kinase-3β,GSK-3β)、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达;qRT-PCR检测Wnt3a、β-catenin、E-cadherin、GSK-3β、CDK4和cyclin D1的m RNA表达。结果与对照组比较,黄芩汤组迁移与侵袭的细胞数目均显著减少(P<0.01),细胞中Ecadherin、GSK-3β蛋白和m RNA表达水平均显著升高(P<0.01),CDK4、cyclin D1、Wnt3a、β-catenin蛋白和m RNA表达水平均显著降低(P<0.01),呈剂量相关性。结论黄芩汤能够有效抑制炎症微环境下结肠癌细胞的上皮间质转化异常,其作用机制可能与降低经典Wnt通路中Wnt3a、β-catenin表达,同时促进E-cadherin、GSK-3β表达有关。黄芩汤还可通过有效抑制CDK4、cyclin D1的表达来修复周期检查点,从而调节炎症微环境下结肠癌细胞的细胞周期紊乱。

关键词：黄芩汤结肠癌炎症微环境上皮间质转化细胞周期 Wnt信号通路黄芩苷汉黄芩苷千层纸素A苷甘草素二糖苷

黄芩汤对溃疡性结肠炎大鼠TLR4/MyD88通路调控作用研究

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药学学报 2016年第10期51卷 1558-1563页

作者：王敦方王彦礼王怡薇郭姗姗庄帅星徐航宇李涛杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 国家食品药品监督管理总局高级研修学院北京100073 中国中医科学院医学实验中心北京100700

研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/Myd88通路及下游细胞因子表达的影响,探讨其治疗效果及作用机制。运用复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备细胞免疫反应UC大鼠模型;将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药柳氮磺胺吡啶组(SASP)和... 详细信息

研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠TLR4/Myd88通路及下游细胞因子表达的影响,探讨其治疗效果及作用机制。运用复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备细胞免疫反应UC大鼠模型;将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药柳氮磺胺吡啶组(SASP)和黄芩汤(HQT)高中低剂量组(20、10、5 g·kg^(-1))。治疗3天后,采用Griess法测定血清中NO含量,ELISA法测定血清中炎症介质IL-4、IL-10、IL-17和PGE_2含量;治疗5天后,处死大鼠取结肠,运用免疫组化法检测COX-2、iNOS蛋白的阳性表达,采用Western blot法检测大鼠结肠TLR4、MyD88的蛋白表达。结果显示,模型组血清中NO、IL-17、PGE_2水平,结肠组织TLR4、MyD88蛋白表达量及COX-2、iNOS阳性表达均高于正常组(P<0.05);黄芩汤高剂量组大鼠上述指标均较模型组显著好转(P<0.05)。说明黄芩汤对溃疡性结肠炎的治疗作用可能是通过抑制TLR4/Myd88/NF-κB通路活化,进而下调促炎细胞因子NO、IL-17和PGE_2表达实现的。

关键词：黄芩汤溃疡性结肠炎 TLR4 MyD88 细胞因子

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第22期28卷 7-15页

作者：刘滨刘雅清宋红新马旭冉王敦方冯雪杨伟鹏黑龙江中医药大学哈尔滨150040 中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^(-1)),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55... 详细信息

目的:研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.2 g·kg^(-1)),黄芩汤低、中、高剂量组(4.55、9.1、18.2 g·kg^(-1)),除正常组外均予以2.5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水5 d诱导UC,连续灌胃给药7 d后处死小鼠,取肠系膜淋巴结(MLNs)和结肠组织,流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Th17/Treg、Th1/Th2,流式细胞微球芯片捕获技术检测结肠组织白细胞介素(IL)-2、IL-17A、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10等细胞因子含量,对结肠组织样本进行病理切片观察,并采用免疫组化法检测结肠组织中T细胞表达的T-box(T-bet)、GATA结合蛋白-3(GATA-3)、IL-17A、叉头蛋白P3(FoxP3)的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠结肠组织中转化生长因子-β(TGF-β)的含量。结果:与正常组比较,模型组Th1、Th17细胞数量显著增高,而Th2、Treg细胞数量显著减少,Th1/Th2和Th17/Treg明显升高(P<0.05,P<0.01),小鼠结肠组织中T-bet、GATA-3、IL-17A、FoxP3表达明显升高(P<0.05,P<0.01),细胞因子IL-2、IL-17A、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量明显升高,IL-4、TGF-β、IL-10的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,黄芩汤各剂量组均能逆转Th1/Th2和Th17/Treg细胞的比例失衡(P<0.01);黄芩汤低、中、高剂量组均可明显降低小鼠结肠T-bet、GATA-3的表达(P<0.05,P<0.01),黄芩汤高低剂量组可显著降低IL-17A的表达(P<0.01);黄芩汤高、中剂量组可显著降低细胞因子IL-2、IL-17A、IFN-γ、IL-6、TNF-α的含量,黄芩汤高剂量组还可明显增加TGF-β、IL-10的含量(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩汤可减轻UC小鼠结肠炎症,改善UC小鼠结肠组织损伤,这可能是通过调节Th17/Treg、Th1/Th2细胞平衡及相关细胞因子水平,调节促炎细胞因子的释放水平来实现的。

关键词：黄芩汤溃疡性结肠炎辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)、Th1/Th2细胞平衡

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响及肠黏膜屏障的保护作用机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第7期29卷 11-19页

作者：刘雅清徐航宇王敦方刘滨马旭冉冯雪杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的:研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的药效,并探究黄芩汤在UC中是否能调节肠道菌群,发挥屏障保护作用。方法:雄性Balb/c小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、黄芩汤高(20 g·kg^(-1))、中(10 g·kg^(-1))、低(5 g·kg^(-1))剂... 详细信息

目的:研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的药效,并探究黄芩汤在UC中是否能调节肠道菌群,发挥屏障保护作用。方法:雄性Balb/c小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、黄芩汤高(20 g·kg^(-1))、中(10 g·kg^(-1))、低(5 g·kg^(-1))剂量组、菌群干扰组、菌群干扰模型组、菌群干扰黄芩汤组(黄芩汤,20 g·kg^(-1))。灌胃抗生素(杆菌肽200 mg·kg^(-1)、万古霉素200 mg·kg^(-1))8 d构建菌群干扰模型,自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7 d构建UC模型,黄芩汤给药治疗7 d。实验结束后处死小鼠,取血、结肠及粪便,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中紧密连接蛋白1(Claudin1)、黏蛋白1(MUC1)、咬合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA和蛋白的表达,提取小鼠粪便DNA进行高通量测序分析。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清IL-4、IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.05,P<0.01),IL-10明显降低(P<0.05);与模型组比较,黄芩汤给药组IL-4、IL-6、TNF-α含量下降(P<0.05,P<0.01),IL-10含量显著上升(P<0.01),Claudin1、MUC1、Occludin、ZO-1 mRNA和蛋白表达明显上升(P<0.05,P<0.01)。菌群干扰后,小鼠肠道菌物种多样性及丰度降低,变形菌门(Proteobacteria)增多(P<0.01),厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)减少(P<0.01);DSS诱发UC后,拟杆菌门和柔壁菌门(Tenericutes)明显减少(P<0.05);黄芩汤高、中、低3个剂量组中拟杆菌门、柔壁菌门明显增多(P<0.05,P<0.01),厚壁菌门减少(P<0.05),乳酸菌属(Lactobacillus)、毛螺菌属(Lachnospiraceae NK4A136 group)、大肠埃希菌志贺属(Escherichia-Shigella)、螺杆菌(Helicobacter)的丰度与黄芩汤剂量呈正比。结论:黄芩汤可以抑制UC小鼠的炎症反应,回调失衡的肠道菌群,修复损伤的肠黏膜屏障。

关键词：黄芩汤溃疡性结肠炎肠道菌群肠黏膜屏障

小承气汤、厚朴三物汤及厚朴大黄汤中蒽醌类、木脂素类和黄酮类成分含量测定

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药学学报 2015年第7期50卷 887-892页

作者：陈立李涛王彦礼董宇庄帅星王敦方杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 中国中医科学院医学实验中心北京100700 广安门医院北京100053

建立同时定量小承气汤类方中蒽醌类、木脂素类和黄酮类成分的HPLC分析方法,并应用于小承气汤、厚朴三物汤、厚朴大黄汤的含量测定。用Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱;0.5%乙酸和乙腈为流动相,梯度洗脱;流速1.0 m L... 详细信息

建立同时定量小承气汤类方中蒽醌类、木脂素类和黄酮类成分的HPLC分析方法,并应用于小承气汤、厚朴三物汤、厚朴大黄汤的含量测定。用Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱;0.5%乙酸和乙腈为流动相,梯度洗脱;流速1.0 m L·min-1;柱温30℃;进样量10μL;254 nm和294 nm波长同时检测。结果建立了没食子酸、肉桂酸、番泻苷A、番泻苷B、大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、厚朴酚、和厚朴酚、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新陈皮苷、橙皮素、柚皮素和川陈皮素等18个成分的线性回归方程,方法的回收率为94.28%~99.89%,精密度的RSD值在5%以内,样品16 h内稳定。小承气汤、厚朴三物汤、厚朴大黄汤中蒽醌类、木脂素类和黄酮类成分含量有一定差别,小承气汤中蒽醌类和黄酮类成分含量最多,厚朴三物汤中木脂素类成分最多。本方法专属性、准确度、精密度和重复性良好,可用于小承气汤类方中蒽醌类、木脂素类和黄酮类成分含量测定,也可为其质量控制提供方法学支持。

关键词：小承气汤高效液相色谱法蒽醌木脂素黄酮

四神丸合痛泻要方治疗脾肾阳虚兼肝郁型溃疡性结肠炎的药效及作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第7期30卷 40-48页

作者：刘雅清刘海帆刘滨冯雪张彩娟王敦方朱琳杨伟鹏中国中医科学院中药研究所北京100700 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的:构建病证结合的脾肾阳虚兼肝郁型溃疡性结肠炎大鼠模型,并探究基于补脾柔肝、温肾固肠的治则合用四神丸与痛泻药方的药效与科学内涵。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药美沙拉嗪组、四神丸合痛泻要方(合方)高、... 详细信息

目的:构建病证结合的脾肾阳虚兼肝郁型溃疡性结肠炎大鼠模型,并探究基于补脾柔肝、温肾固肠的治则合用四神丸与痛泻药方的药效与科学内涵。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药美沙拉嗪组、四神丸合痛泻要方(合方)高、中、低剂量组。除正常组外其余各组大鼠每日给予番泻叶水煎剂、氢化可的松,并进行夹尾刺激,持续14 d。第14天刺激完毕后采用三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇混合溶液灌肠,诱导溃疡性结肠炎(UC)模型。造模第15天开始给药,期间持续观察并记录大鼠体质量、精神状态等。第25天开展糖水偏好实验。第28天测量大鼠肛温,并灌胃给予大鼠3%D-木糖溶液10 m L·kg^(-1),1 h后取血测量血清中D-木糖含量。第29天取材,收集血清、结直肠与海马体。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清中胃泌素(GAS)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)、环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)与海马体中5-羟色胺(5-HT)含量。苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的mRNA和蛋白的表达。结果:造模期间,与正常组比较,模型组大鼠体质量明显下降,肛温、血清D-木糖含量下降,GAS含量显著上升(P方高、中、低剂量组均可明显改善上述指标(P方组大鼠IL-4含量显著增加(P方能显著改善大鼠的证候表现,并能改善大鼠结肠部位炎症反应,下调MAPK通路表达。推测四神丸合痛泻要方可能通过抑制MAPK通路治疗脾肾阳虚兼肝郁型溃疡性结肠炎。

关键词：证候脾肾阳虚肝郁溃疡性结肠炎丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)