基于TLR4/MyD88通路和组学研究黄芩汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制

作     者：王敦方 

作者单位：中国中医科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：杨伟鹏

授予年度：2017年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：黄芩汤 溃疡性结肠炎 基因芯片 代谢组学 

摘      要：1研究背景和目的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是一种直肠和结肠的慢性非特异性炎症性疾病,是炎症性肠病(IBD)的一种。病因病机复杂,迁延难愈,也是发生结肠癌最重要的三个高危因素之一,所以对于UC的治疗和发病相关机理研究至为重要。黄芩汤(HQT)出自《伤寒论》,功效清热止痢,和中止痛,被誉为“万世治痢之祖方,用于治疗湿热下痢,现代广泛应用于UC的治疗。相对于化学药物的单一靶点治疗作用,中药复方成分复杂,具有针对病症多组分、多靶点、多通路的整体治疗作用,在多病因的复杂慢性疾病治疗中具有西药无法比拟的巨大优势和良好前景。在前期研究基础上,本课题围绕HQT对经典炎症TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控作用为出发点,观察HQT的抗炎效果,通过基因芯片技术筛选鉴定UC疾病发生发展相关基因,建立HQT调控UC相关基因表达图谱,并找出关键分子靶标。同时结合代谢组学研究,找出UC发病潜在的分子标志物。最终将基因组学与代谢组学桥接,多靶点多通路解释HQT对UC的治疗机制,为探寻UC发病机制及靶向治疗提供分子依据。2研究方法和结果2.1 HQT对UC大鼠TLR4/MyD88通路调控作用研究运用复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备细胞免疫反应UC大鼠模型;将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药柳氮磺胺吡啶组(SASP)和HQT高中低剂量组(20、10、5g·kg-1)。除正常组外,其余组别均进行造模,造模第三天,开始灌胃给药。治疗3天后,对大鼠眼眶取血,采用Griess法测定血清中NO含量,ELISA法测定血清中炎症因子IL-4、IL-10、IL-17和PGE2含量;治疗5天后,处死大鼠取结肠,运用免疫组化法检测COX-2、iNOS蛋白的阳性表达,采用Western blot法检测大鼠结肠TLR4、MyD88的蛋白表达。结果显示,模型组血清中NO、IL-17、PGE2水平,结肠组织TLR4、MyD88蛋白表达量及COX-2、iNOS阳性表达均高于正常组(P1结合P0.05筛选血清中潜在的生物标志物。与正常组相比,模型组大鼠血清中发现并鉴定出缬氨酸、色氨酸、乳酸、尿素等16个潜在生物标志物。与模型组相比,给予HQT治疗10d后,上述潜在生物标志物有向正常水平回调的趋势。代谢组学分析揭示HQT对UC大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与调节氨基酸代谢、能量代谢和脂代谢等有关。3结论本文通过对TLR4/MyD88/NF-κB经典炎症