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白细胞介素8-251基因多态性与胃癌易感性的综合分析

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中华预防医学杂志 2007年第S1期41卷 39-42页

作者：路滟王子盾沈靖徐耀初南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系 210029

目的探讨白介素8-251位点(IL8-251)的基因多态性与胃癌易感性的关系.方法以胃癌组和健康对照组基因型分布的OR值为效应指标,全面检索相关文献,纳入符合人选标准的文献,应用REVMAN 4.2软件对各研究结果进行异质性检验和效应值合并.共纳... 详细信息

目的探讨白介素8-251位点(IL8-251)的基因多态性与胃癌易感性的关系.方法以胃癌组和健康对照组基因型分布的OR值为效应指标,全面检索相关文献,纳入符合人选标准的文献,应用REVMAN 4.2软件对各研究结果进行异质性检验和效应值合并.共纳入文献8篇,纳入数据合并的8项研究累计病例2114例,对照2505例.结果通过对各研究的(AA+AT)/TT结果的异质性检验得X^(2)值为21.48(P=0.003),随机效应模型计算合并的OR值为1.12(95%CI 0.90~1.40),剔除权重较大的研究后进行的敏感性分析显示其余的各研究同质,固定效应模型的合并OR值为1.21(95%CI 1.06~1.39).结论携带IL8-251 A等位基因的个体发生胃癌的风险增加.

关键词：白细胞介素8 胃肿瘤多态现象(遗传学) 综合分析

人类疱疹病毒8型K1基因的克隆及其在内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达

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江苏医药 2011年第1期37卷 4-7页

作者：闵治超王子盾糜远源程伟华立新冯宁翰南京医科大学第一附属医院泌尿外科 210029

目的构建含人类疱疹病毒8型(HHV-8)致瘤基因K1的真核表达质粒,并将其导入内皮细胞(EC)和前列腺癌细胞(PC-3)中进行表达。方法根据GenBank中登记的K1基因核酸序列设计PCR引物,在其5′端及3′端分别引入Xho I和Xba I酶切位点,并在其下游引... 详细信息

目的构建含人类疱疹病毒8型(HHV-8)致瘤基因K1的真核表达质粒,并将其导入内皮细胞(EC)和前列腺癌细胞(PC-3)中进行表达。方法根据GenBank中登记的K1基因核酸序列设计PCR引物,在其5′端及3′端分别引入Xho I和Xba I酶切位点,并在其下游引入Flag标签蛋白序列用于后期K1蛋白表达的检测。以含有K1基因的HHV-8 DNA为模板扩增K1基因,经双酶切纯化后将其克隆入真核表达载体pCI-neo中。重组质粒经核酸测序鉴定后分别瞬时转染EC和PC-3细胞系,于转染后48 h提取细胞RNA及蛋白,分别以RT-PCR和Western blot检测K1基因的转录和表达情况。结果成功构建了含K1基因的重组质粒pCI-K1。核酸序列分析显示,克隆的K1基因全长928 bp,与GenBank中登记的K1基因100%同源,引入的Flag序列完全正确。经pCI-K1转染后的EC及PC-3细胞中均可检测到K1 mRNA转录和蛋白表达。结论重组质粒pCI-K1构建成功,并在EC和PC-3细胞中正确表达。

关键词：人类疱疹病毒8型 K1致瘤基因真核表达前列腺癌

HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列的初寻

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南京医科大学学报（自然科学版） 2011年第5期31卷 595-600页

作者：程伟郝婷婷王子盾朱小飞冯宁翰华立新秦娣卢春南京医科大学第一附属医院泌尿外科江苏南京210029 南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列。方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列... 详细信息

目的:构建卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)ORF50启动子系列截短序列克隆,初步寻找HSV-1作用于KSHV ORF50启动子区中特异性应答位点序列。方法:以KSHV基因组为模板,PCR扩增KSHVORF50启动子系列截短序列,克隆至含有虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的基本载体pGL-3中,构建含ORF50启动子系列截短序列的重组Luciferase报告质粒。系列重组报告质粒经酶切鉴定和序列测定分析后,分别转染单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染后的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),进行Luciferase活性检测,计算并比较相对Luciferase活性单位(Relative luciferase activity unit,RLU)。结果:成功分离、克隆KSHV ORF50启动子系列截短序列;HSV-1感染随后转染重组质粒p50-95、p50-46和p50-17与转染p50-1500、p50-750、p50-375及p50-185相比,Vero细胞中Luciferase活性显著下降。结论:成功构建了含KSHV ORF50启动子系列截短序列的重组Luciferase报告质粒;HSV-1所对应的、能够主导ORF50启动子活性的最小顺式调控区位于-185 bp和-95 bp之间。

关键词： KSHV HSV-1 ORF50启动子虫荧光素酶

卡波济肉瘤相关疱疹病毒感染前列腺上皮细胞并激活Wnt信号通路的初探

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南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第2期30卷 150-154页

作者：王子盾冯宁翰华立新王平黄敏周峰秦娣卢春南京医科大学第一附属医院泌尿外科江苏南京210029 南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:研究卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是否能够感染前列腺非致瘤性上皮细胞系RWPE-1及前列腺癌细胞系PC-3,并初步探索其相关信号通路变化。方法:将12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤细胞系BC-3,收集细胞上清(... 详细信息

目的:研究卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是否能够感染前列腺非致瘤性上皮细胞系RWPE-1及前列腺癌细胞系PC-3,并初步探索其相关信号通路变化。方法:将12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤细胞系BC-3,收集细胞上清(含KSHV病毒颗粒),感染RWPE-1及PC-3,观察前列腺细胞的细胞病变效应(CPE)。采用RT-PCR检测KSHV即刻基因ORF50 mRNA转录状况;进一步运用Western blot检查病毒裂解期产物病毒白细胞介素6(vIL-6)的蛋白表达水平;最后采用Western blot法检测被感染细胞胞浆和胞核中β-catenin表达水平。结果:PC-3细胞感染KSHV后未见明显CPE,但RT-PCR和Western blot均在预期位置检测到KSHV基因ORF50和vIL-6的mRNA及其编码的蛋白条带。RWPE-1细胞感染KSHV后可出现明显的CPE,感染后24h可以检测到vIL-6的表达。Wnt通路蛋白β-catenin在感染KSHV的RWPE-1细胞胞浆和胞核均呈上升趋势。结论:KSHV可以感染前列腺细胞系并有可能激活Wnt通路。

关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒前列腺癌感染 Wnt通路

不同颜色育果袋对‘瑞雪’苹果果实品质的影响

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中国农业科学 2023年第4期56卷 729-740页

作者：王子盾王辉冯郁晨张学良闫雷玉刘小杰赵政阳西北农林科技大学园艺学院/陕西省苹果工程技术研究中心

【目的】探究不同颜色育果袋对‘瑞雪’苹果(Malus×domestica Ruixue)果实品质的影响，为生产高品质‘瑞雪’苹果提供理论依据及技术支持。【方法】以5年生‘瑞雪’苹果为试材，于花后70 d分别采用红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫单层木浆... 详细信息

【目的】探究不同颜色育果袋对‘瑞雪’苹果(Malus×domestica Ruixue)果实品质的影响，为生产高品质‘瑞雪’苹果提供理论依据及技术支持。【方法】以5年生‘瑞雪’苹果为试材，于花后70 d分别采用红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫单层木浆纸育果袋进行套袋处理，以单层白色育果袋为对照，于花后190 d统一采收。采用光谱仪测定不同颜色果袋内透射光光谱，测定果皮叶绿素、果实可溶性固形物、总类黄酮含量、果实糖组分及香气物质含量等品质指标，通过相关性分析法探索光质与果实品质之间的相互关系，探讨不同光质对果实品质的影响。【结果】不同颜色育果袋内光质组成主要与果袋颜色有关，其中，与白色果袋对照相比，紫光、红光分别在对应颜色的果袋中透过率均为最高，分别为对照的1.15、1.13倍。不同颜色果袋处理后，果皮的L*和b*值均高于对照白色果袋，而a*值、果点指数、着色指数均低于对照。与其他彩色果袋相比，紫色果袋处理后的果皮叶绿素(0.0548 mg·g-1)、果实总酚(1.325 mg·g-1)、总类黄酮(1.361 mg·g-1)含量显著高于其他颜色果袋(P<0.05)。不同光质环境下，果实的硬度存在显著差异，红色果袋处理后的果实硬度显著低于对照白色果袋，较对照低16.1%。此外，其他果实内在品质测定表明，靛色果袋处理后，能够明显提高果实的风味，其中果实的可溶性固形物含量、可滴定酸含量、糖组分(果糖、山梨醇、总糖含量)及甜度值均呈现不同程度的提高。挥发性香气物质测定表明，蓝色果袋处理能够显著提高苹果的香气物质总量，比白色果袋处理提高了2.89倍。综合以上指标，将光质与各品质指标进行皮尔逊相关性分析，发现果实外观品质的形成与光质组成密切相关，其中，紫光/靛光、橙光、紫光/蓝光值与果皮L*、a*、b*值的相关性系数分别为0.901、0.810和0.854。与果实内在品质形成关系最大的为蓝光，其中叶绿素、总类黄酮、总酚含量、香气物质总含量与蓝光的相关性系数分别为0.947、0.822、0.851、0.757。【结论】紫光和蓝光有利于提高‘瑞雪’果实的外观及内在品质，在‘瑞雪’套袋栽培中可适当提高果袋中紫光、蓝光的透过量，以达到提高果实品质的目的。

关键词：苹果 ‘瑞雪’ 光质育果袋果实品质

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不同果袋对瑞雪苹果果皮褐变的影响

果树学报 2023年第9期40卷 1848-1859页

作者：贺颖王辉胡宇冯郁晨王子盾刘振中史涛赵政阳西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 庆城县苹果试验示范站甘肃庆城745199

【目的】探究不同果袋对瑞雪苹果(Malus×domestica‘Ruixue’)果皮褐变及抗氧化物质的影响,为减缓瑞雪苹果果皮褐变并提高瑞雪苹果在陇东地区的经济效益和市场竞争力提供参考。【方法】以6年生瑞雪苹果为试材,于盛花后84 d采用绿色波... 详细信息

【目的】探究不同果袋对瑞雪苹果(Malus×domestica‘Ruixue’)果皮褐变及抗氧化物质的影响,为减缓瑞雪苹果果皮褐变并提高瑞雪苹果在陇东地区的经济效益和市场竞争力提供参考。【方法】以6年生瑞雪苹果为试材,于盛花后84 d采用绿色波点单层袋(G1)、袋口露白绿色波点单层袋(G2)和白色单层袋(G3)进行套袋处理,以普通双层袋为对照,研究不同果袋对瑞雪果皮褐变及抗氧化物质的影响。【结果】相较于对照,G1、G2和G3处理降低了瑞雪果皮褐变率,其褐变率从78.6%分别降至7.0%、6.0%和1.4%。其中对照一至四级褐变指数均为最高,与对照相比,G1和G2出现果皮一级褐变和二级褐变,G3仅出现果皮一级褐变,褐变指数为1.4%,与对照果皮发生褐变现象时间相比,G1和G2推迟了11 d,G3推迟了13 d。对抗氧化物质含量的测定结果表明,与对照相比,G1、G2和G3抗氧化物质含量显著增加,其中G3的含量又显著高于G1和G2。而对照、G1、G2和G3的SOD和POD活性整体依次升高,PPO活性依次降低。【结论】白色单层果袋(G3)显著提高了果皮抗氧化物质含量和抗氧化酶活性,降低了瑞雪果皮褐变率及褐变指数。因此,在瑞雪套袋栽培生产时,推荐使用白色单层果袋(G3)。

关键词：瑞雪苹果果袋透光率果皮褐变抗氧化物质

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优化贴壁法人皮肤成纤维细胞的原代培养

南京医科大学学报（自然科学版） 2014年第1期34卷 124-126页

作者：王林林杜为张健肖峰王子盾李小荣汪道武曹克将南京医科大学第一附属医院心脏科江苏南京210029 南京市胸科医院心脏科江苏南京210029

目的:优化贴壁法原代培养人皮肤成纤维细胞的条件,建立稳定、经济、高效可行的人皮肤成纤维细胞培养方法。方法:采用包皮环切术后皮肤组织,剪成均匀组织块后贴壁,皮肤边缘长出薄层致密细胞团后胰酶消化、传代,并对所培养的细胞进行形态... 详细信息

目的:优化贴壁法原代培养人皮肤成纤维细胞的条件,建立稳定、经济、高效可行的人皮肤成纤维细胞培养方法。方法:采用包皮环切术后皮肤组织,剪成均匀组织块后贴壁,皮肤边缘长出薄层致密细胞团后胰酶消化、传代,并对所培养的细胞进行形态学观察及细胞免疫荧光鉴定。此方法与酶消化法相对照。结果:优化贴壁法成功率100%,取得组织后2 d沿皮肤边缘均开始生长高密度类圆形细胞层,在1周内可获得高质量、高数量的细胞,传代贴壁后经镜下形态观察及细胞免疫荧光染色确定为皮肤成纤维细胞。结论:较之酶消化法,优化贴壁法细胞存活率高,活性及纯度好。该方法可稳定、经济地获得足够数量的细胞。

关键词：皮肤成纤维细胞优化原代培养

HHV-8 K13基因编码蛋白在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞系中的表达及其对细胞增殖影响的初探

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南京医科大学学报（自然科学版） 2011年第1期31卷 21-25页

作者：糜远源华立新冯宁翰闵治超周峰朱小飞王子盾程伟卢春南京医科大学第一附属医院泌尿外科江苏南京210029 南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029

目的:研究人类疱疹病毒8型(HHV-8)K13(v-FLIP)基因编码蛋白分别在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达及其对上述两种细胞增殖能力的影响。方法:将PEF-K13-Flag-IRES/Puro重组质粒瞬时转染人血管内皮细胞系***926细胞和前列腺癌细胞系... 详细信息

目的:研究人类疱疹病毒8型(HHV-8)K13(v-FLIP)基因编码蛋白分别在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞中的表达及其对上述两种细胞增殖能力的影响。方法:将PEF-K13-Flag-IRES/Puro重组质粒瞬时转染人血管内皮细胞系***926细胞和前列腺癌细胞系PC-3细胞,采用Western blot方法检测K13基因编码蛋白表达情况;分别运用流式细胞术和MTT方法检测K13基因编码蛋白对这两种细胞增殖的影响。结果:HHV-8 K13基因编码蛋白能够在人血管内皮细胞和前列腺癌细胞中表达,流式细胞分析和MTT结果显示,HHV-8 K13基因编码蛋白对上述两种细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:HHV-8 K13基因编码蛋白可以明显抑制人血管内皮细胞和前列腺癌细胞的增殖。

关键词：前列腺癌人类疱疹病毒8型 K13 PC-3 内皮细胞

NLRP3炎症小体参与HSV-1诱导病毒性心肌炎的实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2014年第6期34卷 699-704页

作者：宋宁陈相健王子盾王秀芝徐东杰南京医科大学第一附属医院心血管内科江苏南京210029

目的:观察NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(Nod-like receptor pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)炎症小体是否参与单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1,HSV-1)诱导的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)的病理过程。方法:培养乳鼠心室肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVM),分别以0.01 PFU和0.1 PFU HSV-1感染NRVM,24 h后通过光学显微镜观察细胞形态学改变,实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)测定NLRP3炎症小体及其下游通路的mRNA表达水平,免疫荧光(immunofluorescence,IF)显示半胱天冬酶(cysteinyl aspartate-specific proteases,Caspase)-1的表达,全自动生化仪测定细胞上清肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase-MB,CK-MB)的含量以及酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清白细胞介素(interleukin,IL)-18的浓度。结果:HSV-1感染心肌细胞模型组出现细胞病变现象(cytopathic effect,CPE),培养细胞上清细胞损伤标志物CK-MB明显增高(P<0.05),qRT-PCR测定模型组NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA相对表达量较对照组高5倍以上,IF显示Caspase-1在HSV-1干预后的NRVM胞质内表达明显增高,培养细胞上清IL-18浓度较对照组增高(P<0.05)。结论:NLRP3炎症小体及下游通路在HSV-1诱导的VMC细胞模型中被激活,参与其病理过程,为治疗病毒性心肌炎提供可能的新靶点。

关键词： NLRP3炎症小体单纯疱疹病毒1型病毒性心肌炎乳鼠心室肌细胞