检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

H5N1亚型禽流感病毒样颗粒的构建及鉴定

中国生物制品学杂志 2013年第2期26卷 145-148,154页

作者：施金荣杨晓明杜慧邱阿明王妮丹黄晓媛武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430060 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的构建同时含有禽流感H5N1疫苗株NIBRG-14的血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种基因的重组杆状病毒,并研究其表达产物的生物学特性。方法利用RT-PCR法从禽流感H5N1疫苗株NIBRG-14中扩增HA、NA及M1基因片段,并同时亚克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBacDual中,构建重组杆状病毒穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒Bacmid-HA-NA-M1a。Westernblot法和血凝试验检测HA、NA及M1蛋白在Sf9细胞中的表达;表达的重组蛋白经超速离心浓缩及蔗糖密度梯度离心纯化后,透射电镜观察病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的形态结构,并通过单向免疫扩散(Single radialimmunodiffusion,SRID)试验检测HA的含量。结果已成功构建了重组杆状病毒,该病毒可同时表达HA、NA及M1蛋白,3种蛋白可自行组装成VLPs,并分泌至细胞培养上清中,血凝效价可达1∶64;重组杆状病毒表达的蛋白形成的VLPs与NIBRG-14标准抗血清形成沉淀环,浓缩及纯化后的重组蛋白HA含量分别为36和27μg/ml;透射电镜观察可见直径约100 nm的典型流感VLPs。结论构建的重组杆状病毒可表达VLPs,为禽流感新型疫苗的研制奠定了基础。

关键词：流感病毒A型,H5N1亚型病毒样颗粒杆状病毒表达系统

跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2007年第6期23卷 610-613,618页

作者：秦娜琳尹丙姣王妮丹朱建华庞艳姜小丹冯玮李卓娅华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系武汉430030

目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获... 详细信息

目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株。采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法检测NF-κB的活性。结果TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性。结论获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生。

关键词：跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序 NF—κB 反向信号 MCF-7细胞

HIV-1 CRF07_BC毒株gp41重组DNA-蛋白疫苗的制备及免疫

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2014年第9期27卷 1113-1117页

作者：王妮丹罗振武孙红岩何彦平邵一鸣郝彦玲中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

目的制备中国HIV-1流行株CRF07_BC膜蛋白gp41重组DNA-蛋白疫苗,并观察其在BALB/c小鼠中的免疫效果。方法从CRF07_BC毒株（CN54）中扩增gp41胞外段,删除抗原决定环loop区（the immune dominant loop region）,引入T569A和I675V两个突变位点,制备含N-端七价重复序列（N-terminal heptad repeat,NHR）、C-端七价重复序列（C-terminal heptad repeat,CHR）和近膜区（membrane proximal external region,MPER）的重组疫苗,以未改造的gp41相应区域为对照免疫原。使用DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强的方式免疫BALB/c小鼠,最后一针免疫后4周,经小鼠眼眶采血,分离血清,检测结合抗体水平、中和抗体水平、线性表位抗体水平。结果 CN54 gp41野生型及改造型重组DNA疫苗质粒和原核蛋白表达质粒经双酶切及测序鉴定均构建正确;CN54 gp41W和CN54 gp41M表达蛋白相对分子质量约在12 000-15 000之间,纯化的重组蛋白可被豚鼠抗gp140阳性血清识别。CN54M组（CN54 gp41改造抗原组）诱导出较高的结合抗体水平,而线性表位抗体水平明显低于CN54W组（CN54 gp41未改造组）,两组均未检测出具有保护性的中和抗体水平。结论 CN54 gp41改造抗原经DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强免疫小鼠,可产生较高的结合抗体,且主要是针对空间构象表位,但不具有中和能力。

关键词：人类免疫缺陷病毒 CRF07_BC gp41 疫苗

TRAF1-DsRed真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的定位

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2007年第5期23卷 491-493,498页

作者：王妮丹王晶潘玉玲秦娜林庞艳朱建华刘涛张述李卓娅华中科技大学同济医学院免疫学系武汉430030

目的构建融合蛋白TRAF1-DsRed的真核表达载体及观察TRAF1在COS-7细胞中的表达及定位。方法采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增TRAF1cDNA,定向克隆至真核表达载体pDsRedC1,经脂质体转染COS-7细胞并以间接免疫荧光检测其在COS-7中表... 详细信息

目的构建融合蛋白TRAF1-DsRed的真核表达载体及观察TRAF1在COS-7细胞中的表达及定位。方法采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞中扩增TRAF1cDNA,定向克隆至真核表达载体pDsRedC1,经脂质体转染COS-7细胞并以间接免疫荧光检测其在COS-7中表达。运用罗丹明123染色和激光共聚焦技术观察TRAF-1在COS-7细胞中的定位。结果转染重组子pTRAF1-DsRed的COS-7细胞可见红色荧光蛋白的表达,TRAF1在COS-7细胞中定位于线粒体。结论成功构建pTRAF1-DsRed融合基因并进行真核表达,确定TRAF-1在COS-7细胞中的定位,为进一步研究有关TRAF1的信号传导通路奠定了基础。

关键词：表达载体 TRAF1 细胞定位线粒体

稳定转染TNFα及其突变体的骨肉瘤细胞生物学功能的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国现代医学杂志 2007年第23期17卷 2828-2831页

作者：庞艳王晶李清芬王妮丹朱建华姜小丹冯玮李卓娅华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系湖北武汉430030

目的建立转染2种TNFα基因(野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体)的MG63细胞株,研究所转染细胞的TNFα的生物学效应。方法采用逆转录病毒载体,将2种TNFα基因导入人骨肉瘤细胞MG63中,采用流式细胞术、ELISA和生物学活性检测等方法从蛋白表... 详细信息

目的建立转染2种TNFα基因(野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体)的MG63细胞株,研究所转染细胞的TNFα的生物学效应。方法采用逆转录病毒载体,将2种TNFα基因导入人骨肉瘤细胞MG63中,采用流式细胞术、ELISA和生物学活性检测等方法从蛋白表达及其生物学活性2个方面对转染细胞进行检测鉴定。结果野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体分别在MG63细胞中得到有效表达,并具有生物学活性。结论获得2种稳定表达TNFα的人骨肉瘤细胞株,为进一步研究TNFα的各种生物学行为和探索骨肿瘤的基因治疗奠定基础。

关键词：跨膜型TNFα 分泌型TNFα MG63细胞细胞毒效应

合并带状疱疹病毒感染对HIV-1感染者外周血中HIV-1DNA的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国艾滋病性病 2018年第8期24卷 756-759页

作者：岳永松王妮丹韩扬祝婷谢静吕玮宋晓璟李雁凌李太生中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院感染内科

目的观察艾滋病病毒1型（HIV-1）合并带状疱疹病毒（VZV）感染者,在高效抗反转录病毒治疗（HAART）前后外周血中HIV-1脱氧核糖核酸（DNA）水平的变化。方法选取慢性期HIV-1合并VZV感染者11例作为试验组（VZV＋）,46例未合并VZV感染者作... 详细信息

目的观察艾滋病病毒1型（HIV-1）合并带状疱疹病毒（VZV）感染者,在高效抗反转录病毒治疗（HAART）前后外周血中HIV-1脱氧核糖核酸（DNA）水平的变化。方法选取慢性期HIV-1合并VZV感染者11例作为试验组（VZV＋）,46例未合并VZV感染者作为对照组（VZV-）。对0周和抗病毒治疗48周时感染者外周血进行HIV-1DNA的定量检测。结果基线时,VZV＋组HIV-1DNA水平为（3.40±0.36）Log10拷贝/10^6外周血单个核细胞（PBMCs）,明显高于VZV-组的（3.04±0.44）Log10拷贝/10^6 PBMCs（P=0.014）。抗病毒治疗48周后,VZV＋组HIV-1DNA水平为（3.19±0.33）Log10拷贝/10^6 PBMCs,较基线时未出现明显的下降（P=0.182）;VZV-组HIV-1DNA水平为（2.56±0.46）Log10拷贝/10^6 PBMCs,较基线时明显下降（P〈0.001）,并且显著低于VZV＋组（P〈0.001）。治疗前和治疗后的HIV-1DNA水平均与基线病毒载量呈正相关,与基线CD4细胞计数、辅助性T细胞/抑制性T细胞比例呈负相关。结论 HIV-1合并VZV感染者具有较高的基线HIV-1DNA,并且在有效地抗病毒治疗之后仍然高于未合并VZV感染者。

关键词：艾滋病病毒1型脱氧核糖核酸高效抗反转录病毒疗法带状疱疹病毒合并感染

HIV-1 CRF07_BC gp41重组抗原在不同体系表达效率的比较

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国热带医学 2014年第4期14卷 392-395页

作者：王妮丹罗振武郝彦玲孙红岩何彦平邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

目的获得HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原表达效率最佳的体系。方法采用基因工程技术将gp41重组蛋白基因分别构建到pThioHis A,pThioHis A-1(不含标签),PBV220,PGEX-6p-1原核表达载体。转化大肠杆菌BL21和Rosetta两种宿主菌,通过IPTG诱导... 详细信息

目的获得HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原表达效率最佳的体系。方法采用基因工程技术将gp41重组蛋白基因分别构建到pThioHis A,pThioHis A-1(不含标签),PBV220,PGEX-6p-1原核表达载体。转化大肠杆菌BL21和Rosetta两种宿主菌,通过IPTG诱导表达并经WB鉴定。结果 4种原核表达质粒构建完成,蛋白成功表达。PGEX-6p-1表达量明显高于pThioHis A载体;而无标签载体组中,PBV220表达量优于pThioHis A-1。BL21和Rosetta宿主菌对表达体系无影响。结论 HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原在大肠杆菌中以包涵体形式存在,构建在PGEX-6p-1和PBV220载体上gp41重组蛋白表达效率较高,为gp41疫苗的研究和血清学检测提供充足的抗原。

关键词： HIV-1 CRF07_BC株 gp41重组抗原表达

商业健康保险对家庭风险金融资产配置影响的实证研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

统计与决策 2025年 156-161页

作者：董捷董书丹北京工商大学经济学院

随着中国经济发展和家庭资产的积累，金融资产在家庭资产中的占比逐渐上升。商业健康保险作为重要工具，在家庭配置风险金融资产的过程中发挥关键性作用。文章基于2019年中国家庭金融调查（CHFS）数据，研究商业健康保险的持有对家庭风... 详细信息

随着中国经济发展和家庭资产的积累，金融资产在家庭资产中的占比逐渐上升。商业健康保险作为重要工具，在家庭配置风险金融资产的过程中发挥关键性作用。文章基于2019年中国家庭金融调查（CHFS）数据，研究商业健康保险的持有对家庭风险金融资产配置的影响。在控制人口统计特征、家庭经济情况等因素的基础上，利用Probit模型和Tobit模型进行研究，结果表明：持有商业健康保险会显著提高家庭参与风险金融市场的可能性，增加家庭风险金融资产配置的占比。进一步分析发现，这一影响主要通过预防性储蓄这一中介变量来实现。此外，异质性分析结果表明，商业健康保险对城镇地区、中西部地区和高收入家庭参与风险金融市场以及提高风险金融资产配置占比具有更显著的促进效应。

关键词：商业健康保险风险金融资产预防性储蓄倾向得分匹配(PSM) 健康风险

数字时代优质农产品内容营销对消费者社交参与的影响

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

吉林大学社会科学学报 2025年第1期 179-192+239页

作者：黄怡丹杨术华侨大学工商管理学院

农产品“质优销难”一直是困扰生产者的棘手问题，而优秀的营销内容是激发消费者购买欲望、提升品牌影响力、促进销量增长的关键。近年来，用户生成内容凭借其真实性和互动性，逐渐成为商家进行口碑营销、提升产品销量的重要途径。文章... 详细信息

农产品“质优销难”一直是困扰生产者的棘手问题，而优秀的营销内容是激发消费者购买欲望、提升品牌影响力、促进销量增长的关键。近年来，用户生成内容凭借其真实性和互动性，逐渐成为商家进行口碑营销、提升产品销量的重要途径。文章基于社交平台数据，将优质农产品分为初级植物农产品、初级动物农产品、加工农产品三类，采用文本挖掘方法识别出具有推荐属性的文本内容，将内容营销主体分为商家和用户两类，结合对营销内容主客观性的测量，考察该类内容对消费者社交参与的影响机制。结果表明，消费者对加工农产品社交参与的积极性显著大于初级农产品；用户生成内容相比于商家生成内容会有更积极的社交参与度。农产品类别与内容营销主体的交互作用会对消费者社交参与产生显著影响，对于加工农产品而言，用户生成内容相比于商家生成内容有更积极的社交参与度；营销内容主客观性对此交互作用存在边界，客观性营销内容弱化了不同农产品类别在社交参与度上的影响差异。因此，应积极引导优质农产品企业注重内容营销的差异化策略，鼓励农产品营销主体与消费者互动，共同促进优质农产品的推广和销售，助力乡村振兴。

关键词：用户生成内容优质农产品内容营销消费者社交参与