HIV-1 CRF07_BC毒株gp41重组DNA-蛋白疫苗的制备及免疫

作     者：王妮丹 罗振武 孙红岩 何彦平 邵一鸣 郝彦玲 WANG Ni-dan;LUO Zheng-wu;SUN Hong-yan;HE Yan-ping;SHAO Yi-ming;HAO Yan-ling

作者机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2014年第27卷第9期

页      面：1113-1117页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：十二五重大专项"创新抗病毒重组蛋白和病毒样颗粒(VLP)疫苗孵化基地建设"(2011ZX09401-019) 十二五重大专项"预防性艾滋病疫苗研究"(2012ZX10001008-001-001) 

主　　题：人类免疫缺陷病毒 CRF07_BC gp41 疫苗 

摘      要：目的制备中国HIV-1流行株CRF07_BC膜蛋白gp41重组DNA-蛋白疫苗,并观察其在BALB/c小鼠中的免疫效果。方法从CRF07_BC毒株（CN54）中扩增gp41胞外段,删除抗原决定环loop区（the immune dominant loop region）,引入T569A和I675V两个突变位点,制备含N-端七价重复序列（N-terminal heptad repeat,NHR）、C-端七价重复序列（C-terminal heptad repeat,CHR）和近膜区（membrane proximal external region,MPER）的重组疫苗,以未改造的gp41相应区域为对照免疫原。使用DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强的方式免疫BALB/c小鼠,最后一针免疫后4周,经小鼠眼眶采血,分离血清,检测结合抗体水平、中和抗体水平、线性表位抗体水平。结果 CN54 gp41野生型及改造型重组DNA疫苗质粒和原核蛋白表达质粒经双酶切及测序鉴定均构建正确;CN54 gp41W和CN54 gp41M表达蛋白相对分子质量约在12 000-15 000之间,纯化的重组蛋白可被豚鼠抗gp140阳性血清识别。CN54M组（CN54 gp41改造抗原组）诱导出较高的结合抗体水平,而线性表位抗体水平明显低于CN54W组（CN54 gp41未改造组）,两组均未检测出具有保护性的中和抗体水平。结论 CN54 gp41改造抗原经DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强免疫小鼠,可产生较高的结合抗体,且主要是针对空间构象表位,但不具有中和能力。