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T细胞表位模型和表达模型对非亲缘造血干细胞移植供受者HLA-DPB1基因错配风险的预测功能评估

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中华医学杂志 2024年第11期104卷 850-856页

作者：齐珺王天菊王满妮尚利侠陈乐王小芳李昱辉徐华马超锋陕西省血液中心西安710061

目的评估T细胞表位(TCE)模型和表达模型对人类白细胞抗原(HLA)相合非亲缘造血干细胞移植(MUD-HSCT)供受者HLA-DPB1基因错配风险的预测功能。方法回顾性分析2016至2019年陕西省血液中心进行HLA高分辨分型确认的MUD-HSCT供受者364例(182对... 详细信息

目的评估T细胞表位(TCE)模型和表达模型对人类白细胞抗原(HLA)相合非亲缘造血干细胞移植(MUD-HSCT)供受者HLA-DPB1基因错配风险的预测功能。方法回顾性分析2016至2019年陕西省血液中心进行HLA高分辨分型确认的MUD-HSCT供受者364例(182对)。182例受者中,男121例,女61例,年龄(26.3±14.2)岁;182例供者中,男148例,女34例,年龄(33.7±7.5)岁。应用聚合酶链反应-测序分型(PCR-SBT)、下一代测序(NGS)技术和基于LABScan^(■)3D平台的聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针技术(PCR-SSO)等进行HLA-A、B、C、DRB1、DQB1、DPB1基因高分辨分型,采用PCR-SBT进行单核苷酸多态性(SNP)分型,运用TCE模型和表达模型评估MUD-HSCT供受者HLA-DPB1基因错配模式和急性移植物抗宿主病(aGVHD)风险。结果检出26种HLA-DPB1等位基因及其3′-UTR rs9277534 SNP基因型,发现并正式命名2个新等位基因HLA-DPB1^(*)1052∶01和HLA-DPB1^(*)1119∶01。HLA-DPB1基因总错配率达90.66%(165/182),TCE模型允许错配占47.80%(87/182),不允许错配占42.86%(78/182);移植物抗宿主(GvH)方向的不允许错配为13.73%(25/182),宿主抗移植物(HvG)方向的不允许错配为29.12%(53/182)。TCE模型中共有73对供受者符合表达模型评估标准,其中TCE允许错配组的受者DP5错配占34.25%(25/73),根据表达模型预测其移植后aGVHD风险为高风险;TCE不允许错配组的受者DP2错配占6.85%(5/73),受者DP5错配占10.86%(8/73),均被预测为aGVHD高风险。两种模型之间的整体一致性为27.27%,不一致性为16.97%。结论TCE模型和表达模型是预测MUD-HSCT供受者HLA-DPB1基因错配风险的有效工具,综合应用两种模型有助于移植风险分层评估。

关键词：人类白细胞抗原 T细胞表位表达水平单核苷酸多态性造血干细胞移植允许错配不允许错配

罕见父源母源HLA-A/C基因座位间同时重组一个家系的遗传学研究

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中华医学遗传学杂志 2024年第7期41卷 853-857页

作者：王天菊王满妮齐珺李昱辉武君华尚利侠陈乐陕西省血液中心HLA组织配型实验室西安710061

目的探讨1个家系中父源和母源人类白细胞抗原单体型HLA-A/C基因座之间的重组情况。方法选取2022年2月因"再生障碍性贫血"拟接受造血干细胞移植的1例患者作为研究对象。采集患者及其父母和胞兄的外周血样,分别采用测序和聚合酶链反应-序... 详细信息

目的探讨1个家系中父源和母源人类白细胞抗原单体型HLA-A/C基因座之间的重组情况。方法选取2022年2月因"再生障碍性贫血"拟接受造血干细胞移植的1例患者作为研究对象。采集患者及其父母和胞兄的外周血样,分别采用测序和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针技术对HLA-A/C/B/DRB1/DQB1位点进行高分辨基因分型,通过家系分析确定个体的HLA单体型。通过检测短串联重复序列位点确定家系成员之间的亲缘关系,再用二代测序技术对HLA-A/C/B/DRB1/DRB345/DQA1/DQB1/DPA1/DPB1等11个位点进行高分辨分型,再次确认HLA的重组位点。结果短串联重复序列位点结果证实家系成员之间存在亲缘关系。父源HLA单体型HLA-A*24:02 A*33:03/C*14:03之间发生重组,母源HLA单体型HLA-A*01:01 A*03:01/C*08:02之间发生重组,产生的新单体型被完整地遗传给子代。结论发现并证实了1个陕西汉族人群父源和母源HLA-A/C基因座位间同时发生重组的家系,为深入研究HLA的重组机制提供依据。

关键词：人类白细胞抗原单体型基因重组

新等位基因HLA-DRB1*12:02:10的序列分析及确认

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中国组织工程研究 2022年第30期26卷 4857-4861页

作者：武君华王天菊王满妮徐华齐珺尚利侠陈乐陕西省血液中心西安市中心血站白细胞研究室陕西省西安市710061

背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)个体遗传学差异的本质是在编码其抗原产物的基因水平上,各种诱导因素下所产生的新等位基因,在人群中的频率分布、抗原的血型血清学检测和生物学功能等均有待进一步研究。目的:HLA新等... 详细信息

背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)个体遗传学差异的本质是在编码其抗原产物的基因水平上,各种诱导因素下所产生的新等位基因,在人群中的频率分布、抗原的血型血清学检测和生物学功能等均有待进一步研究。目的:HLA新等位基因HLA-DRB1*12:02:10的确认及序列分析。方法:采用多聚酶链式反应-基于测序的分型技术(PCR-SBT)、单链测序和下一代测序(NGS)方法对常规检测中HLA-DRB1位点无匹配结果的移植配型样本进行确证实验,并运用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针技术(PCR-SSO)进行对照实验。结果与结论:①实验发现先证者的HLA-DRB1位点在第3外显子582位置发生了T>G碱基突变,造成第3外显子194位密码子由CCT>CCG,为同义突变,未造成氨基酸改变;②实验最终确定了HLA-DRB1位点新的HLA等位基因,并被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*12:02:10。

关键词：人类白细胞抗原测序新等位基因家系调查确认命名

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同型半胱氨酸转甲基酶的提纯和活性测定

同型半胱氨酸转甲基酶的提纯和活性测定

作者：王天菊中南大学

学位级别：硕士

目的1.对含有同型半胱氨酸转甲基酶外源性基因的大肠埃希氏菌培养、收集含有同型半胱氨酸转甲基酶的母液。2.分离提纯同型半胱氨酸转甲基酶。3.判断提纯的同型半胱氨酸转甲基酶是否有活性,初步确定其活性的大小。方法1.将含有同型半胱... 详细信息

目的1.对含有同型半胱氨酸转甲基酶外源性基因的大肠埃希氏菌培养、收集含有同型半胱氨酸转甲基酶的母液。2.分离提纯同型半胱氨酸转甲基酶。3.判断提纯的同型半胱氨酸转甲基酶是否有活性,初步确定其活性的大小。方法1.将含有同型半胱氨酸转甲基酶外源性基因的大肠埃希氏菌接种至血平板,37℃培养过夜后接种于含氨苄青霉素的LB培养液中,37℃在摇床上培养至对数中期,加入IPTG诱导8小时之后离心弃上清留沉淀。用缓冲液混匀沉淀后用电动搅拌机5000转／分钟以破坏细菌,冰浴匀浆2分钟,15000g离心15分钟,弃沉淀取上清。上清液经过Sephadex CL-6B层析柱,DEAE Sepharose Fast Flow层析柱,Sephadex G-75层析柱之后得到提纯的同型半胱氨酸转甲基酶。2.用Western Blot和考马斯亮蓝染色验证层析后的蛋白峰是否含有同型半胱氨酸转甲基酶,根据Mark的条带大概判断其kD值。3.用金斯尔G系列同型半胱氨酸检测试剂盒测定20份血清的同型半胱氨酸浓度,再用提纯的同型半胱氨酸转甲基酶与谷氨酸脱氢酶组成的混合液替换试剂2,重新检测相同的20份血清同型半胱氨酸的浓度,根据两种试剂盒检测的数值来判断提纯的同型半胱氨酸转甲基酶是否有活性以及活性的大小。结果1.将提纯后的酶做Western Blot验证,证明是所需要的同型半胱氨酸转甲基酶。2.与Western Blot和考马斯亮蓝染色上Mark的条带相比较,同型半胱氨酸转甲基酶单体的分子量为45kD。3.利用原试剂盒和替换试剂2后的试剂盒分别测定相同的20份标本,对两组数据进行统计,用配对t检验,原试剂盒测定的均数为16.48±3.47,标准误为0.77;试剂2替换后的测定的均数为17.19±4.10,标准误为0.92。原试剂盒和试剂2替换之后的试剂盒测定值的相关系数为0.92,两种方法相关系数假设检验的P值0.05,无统计学意义,说明替换前后两种试剂盒检测同型半胱氨酸无差异。结论1.成功提纯出了同型半胱氨酸转甲基酶,并建立了一整套提纯同型半胱氨酸转甲基酶的方案,可供科研、生产使用。2.提纯同型半胱氨酸转甲基酶单体为45kD。3.提纯的同型半胱氨酸转甲基酶有活性,可用于同型半胱氨酸浓度的检测。

关键词：同型半胱氨酸转甲基酶纯化层析蛋白浓度活性

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同型半胱氨酸转甲基酶的制备及纯化

广东医学 2011年第19期32卷 2505-2507页

作者：杨一芬王天菊卿之驹中南大学湘雅二医院检验科长沙410011

目的建立同型半胱氨酸转甲基酶(BHMT)的制备及纯化方法,为临床应用提供基础。方法采用大肠埃希菌表达体系获得BHMT蛋白,然后应用Sephadex CL-6B、DEAE Sepharose Fast Flow、Sephadex G-75层析柱纯化BHMT,并行Western blot验证。分别用... 详细信息

目的建立同型半胱氨酸转甲基酶(BHMT)的制备及纯化方法,为临床应用提供基础。方法采用大肠埃希菌表达体系获得BHMT蛋白,然后应用Sephadex CL-6B、DEAE Sepharose Fast Flow、Sephadex G-75层析柱纯化BHMT,并行Western blot验证。分别用商品化同型半胱氨酸试剂盒和提纯的BHMT测定20份血清的同型半胱氨酸浓度,初步判断纯化的BHMT活性。结果 (1)BHMT在大肠埃希菌体系中成功表达,并经Sepha-dex CL-6B、DEAE Sepharose Fast Flow、Sephadex G-75层析柱纯化后在Western blot上显示为单一条带,分子量为45 kD。(2)采用纯化的BHMT检测20例标本,与商品化试剂盒检测结果差异无统计学意义[(17.19±4.10)μmol/L vs(16.48±3.48)μmol/L,P>0.05],且结果呈高度正相关(r=0.92,P<0.05)。结论建立的BHMT的制备及纯化方法切实可行,有望应用于同型半胱氨酸浓度的检测。

关键词：同型半胱氨酸转甲基酶同型半胱氨酸层析法

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幼龄金柑园套作生姜栽培技术

农村百事通 2014年第7期 34-36页

作者：王天菊广西玉林市农业科学研究所 537000

金柑俗称金橘，幼苗种植3～6年才能投产创收。发展金柑园一次性投资较火。姜属于浅根系作物，根系分布在土壤上层30厘米以内的耕作层内，喜肥吸水，耐阴而不耐强光。

关键词：金橘柑园幼龄技术栽培生姜套作根系分布

割手密蛋白磷酸酶基因SsPP2C1的克隆及表达分析

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分子植物育种 2019年第8期17卷 2502-2508页

作者：王天菊王先宏杨清辉云南农业大学甘蔗研究所昆明650201

2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2C)是植物体内脱落酸ABA信号传导关键负调控酶,在植物耐非生物胁迫中发挥着重要的作用。为探讨抗旱割手密材料中蛋白磷酸酶基因的序列及其表达特征,利用转录组测序数据,结合RT-PCR技术,克隆出编码割手密P... 详细信息

2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2C)是植物体内脱落酸ABA信号传导关键负调控酶,在植物耐非生物胁迫中发挥着重要的作用。为探讨抗旱割手密材料中蛋白磷酸酶基因的序列及其表达特征,利用转录组测序数据,结合RT-PCR技术,克隆出编码割手密PP2C蛋白的基因,命名为SsPP2C1,其核苷酸序列编码区长855 bp,编码284个氨基酸残基,这些残基中包括了与二价金属离子结合的MED、DGH、DG和D结构域。系统发生分析结果表明,该氨基酸与谷子Sipp2c亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析结果表明在干旱协迫条件下,SsPP2C1基因主要在割手密的叶片中表达,在根和茎中的表达量相对较低;该基因在割手密伸长期表达量最高,成熟期次之,苗期最小;随着胁迫时间的延长,该基因的表达量显著升高,在胁迫6 d时达到最大值,为对照的4 940.27倍,随后显著下降,表明SsPP2c1基因与割手密抗旱性存在紧密关联。

关键词：割手密蛋白磷酸酶PP2C 基因克隆表达特征

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陕西地区汉族人群KIR 基因多态性的研究

临床输血与检验 2023年第2期25卷 225-230页

作者：王天菊尚利侠徐华武君华陈乐王满妮王小芳齐珺陕西省血液中心西安市中心血站陕西省西安市710061

目的研究陕西地区汉族人群自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性及基因型特点。方法随机抽取474名陕西地区造血干细胞无偿捐献者外周血,KIR基因分型采用聚合酶链式反应-序列特异性引物扩增技术;基因型参照等位基因频率网络数据... 详细信息

目的研究陕西地区汉族人群自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性及基因型特点。方法随机抽取474名陕西地区造血干细胞无偿捐献者外周血,KIR基因分型采用聚合酶链式反应-序列特异性引物扩增技术;基因型参照等位基因频率网络数据库(AFND)中的命名序号。结果陕西地区汉族人群中,存在于所有个体的基因有KIR 3DP 1、3DL 2、3DL 3、2DL 3和2DL 4。KIR 2DS 4、3DL 1、2DL 1、2DP 1、2DS 3、2DL 2、2DS 2、2DS 5、2DS 1、3DS 1、2DL 5基因频率分别为67.51%、96.20%、98.52%、99.37%、15.61%、20.89%、25.74%、29.32%、37.55%、37.76%、40.30%。共发现44种KIR基因型,其中以ID号为1、195、2、10、79最为常见,其频率分别为29.96%、13.08%、8.02%、5.91%、5.48%。结论陕西地区汉族人群KIR基因和基因型与中国汉族人群KIR分布有一些共同特点,同时有自身的分布特征。

关键词：杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性基因型

小儿退热栓治疗小儿感冒发热的疗效和安全性研究

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临床医药文献电子杂志 2018年第30期5卷 15-15页

作者：王天菊贵州省三都县妇幼保健院

目的探究小儿退热栓治疗小儿感冒发热的临床疗效和安全性。方法抽选我院2017年1月;017年12月收治的98例感冒发热患儿作为本次临床研究资料,通过随机分组将患儿划分为对照组和观察组,其中49例对照组患儿采用双黄连口服液进行治疗,49观察... 详细信息

目的探究小儿退热栓治疗小儿感冒发热的临床疗效和安全性。方法抽选我院2017年1月;017年12月收治的98例感冒发热患儿作为本次临床研究资料,通过随机分组将患儿划分为对照组和观察组,其中49例对照组患儿采用双黄连口服液进行治疗,49观察组在此基础上,联合使用小儿退热栓进行治疗。结果单纯使用双黄连口服液药物治疗的49例对照组患儿治疗总有效率为87.76%,不良反应率14.28%,而在此基础上联合使用小儿退热栓治疗的49观察组患儿治疗总有效率为95.92%,不良反应率为8.16%。结论小儿退热栓治疗小儿感冒发热的疗效十分显著,值得在临床之中加以推广。

关键词：小儿退热栓治疗小儿感冒发热疗效安全性研究