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氨基末端脑利钠肽的原核表达与纯化及稳定性研究

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中华检验医学杂志 2005年第11期28卷 1166-1168页

作者：郑佐娅李卫鹏王红王从珠杭勤赵卫国上海第二医科大学医学检验重点实验室 200023

目的从构建了人氨基末端脑利钠肽(aminoterm inal probrain natriuretic peptide,NTproBNP)基因的表达菌中抽取目的蛋白,并对其进行纯化、鉴定及稳定性的初步研究。方法取表达菌株BL21pGEX4T3NTproBNP,IPTG诱导表达,GSHagarose亲和纯化... 详细信息

目的从构建了人氨基末端脑利钠肽(aminoterm inal probrain natriuretic peptide,NTproBNP)基因的表达菌中抽取目的蛋白,并对其进行纯化、鉴定及稳定性的初步研究。方法取表达菌株BL21pGEX4T3NTproBNP,IPTG诱导表达,GSHagarose亲和纯化目的蛋白,提纯产物进行SDSPAGE电泳和Westernblot鉴定,并采用自动免疫分析仪检测其免疫反应性和稳定性。结果GSTNTproBNP融合蛋白表达水平高,可溶性好。SDSPAGE、免疫测定分析显示其相对分子量为34600,具有较高的特异免疫反应性和稳定性。结论NTproBNP能通过基因工程手段以GST融合蛋白的形式大量获取,在非变性条件下得到的GSTNTproBNP有较好的免疫反应活性和稳定性。

关键词：钠尿肽重组融合蛋白质类

凝血酶调节蛋白植物凝集素样片段的原核表达及抗体制备

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中国免疫学杂志 2004年第10期20卷 700-703页

作者：钱高潮王红郑佐娅王从珠杭勤李卫鹏盛慧明高丰厚李稻王鸿利上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023

目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量... 详细信息

目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量表达形成包涵体 ,将表达蛋白纯化并复性后免疫小鼠 ,3次免疫后得抗体效价为 1∶4 0 0 0 ,经加强免疫后抗体效价达到1∶80 0 0 ;特异性较好。结论 :在天然TM提取纯化困难的情况下。

关键词：凝血酶调节蛋白原核表达抗体制备免疫小鼠免疫后加强免疫抗体特异性植物凝集素复性提取纯化

氨基末端B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体的构建及纯化

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检验医学 2005年第5期20卷 405-408页

作者：李卫鹏郑佐娅王红王从珠杭勤赵卫国上海第二医科大学上海市医学检验重点试验室上海200023

目的克隆人氨基末端B型钠尿肽(NT-proBNP)基因,构建原核表达载体并纯化其表达蛋白。方法用聚合酶链反应(PCR)从正常成人cDNA库中扩增出人NT-proBNP基因,将其克隆进pUCm-T中测定核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体pGEX-4T-3-NT-proB... 详细信息

目的克隆人氨基末端B型钠尿肽(NT-proBNP)基因,构建原核表达载体并纯化其表达蛋白。方法用聚合酶链反应(PCR)从正常成人cDNA库中扩增出人NT-proBNP基因,将其克隆进pUCm-T中测定核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG诱导表达,GSH-agarose亲和纯化该表达蛋白。结果经PCR扩增成功获得228bp的NT-proBNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的23%,用SDS-PAGE和Westernblot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子质量为34600。经亲和纯化后的GST-NT-proBNP的纯度可以达到95%,得率为1.7mg/100ml。结论NT-proBNP基因的克隆、表达和纯化成功,为建立NT-proBNP检测方法奠定了基础。

关键词：氨基末端B型钠尿肽克隆构建纯化

B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体构建及纯化

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蚌埠医学院学报 2007年第1期32卷 14-17页

作者：李卫鹏郑佐娅王红王从珠杭勤赵卫国上海交通大学医学院上海市医学检验重点试验室上海200023

目的:克隆人B型钠尿肽(脑钠素,B-type natriuretic peptide,BNP)基因,纯化其表达蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR技术从正常成人心脏组织cDNA库中扩增出人BNP基因,将其克隆进pUCm-T中并测定核苷酸序列。构建大肠埃希菌分泌性表达载体p... 详细信息

目的:克隆人B型钠尿肽(脑钠素,B-type natriuretic peptide,BNP)基因,纯化其表达蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR技术从正常成人心脏组织cDNA库中扩增出人BNP基因,将其克隆进pUCm-T中并测定核苷酸序列。构建大肠埃希菌分泌性表达载体pGXE4T-2/BNP,用异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,GSH-agarose亲和纯化表达蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。结果:经PCR扩增成功获得96 bp的BNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的19%,用SDS-PAGE和W estern b lot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子量29 500。经亲和纯化后GST-BNP的纯度可以达到95%,500 m l菌液中得到纯化蛋白9.6 mg。多克隆抗体的效价为1∶32 000。结论:BNP基因的克隆、表达和纯化成功以及多抗的获得,为建立BNP检测方法奠定了基础。

关键词：基因文库人B型钠尿肽克隆分子构建纯化

人凝血因子ⅧcDNA在小鼠体内的转染与表达

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中国实验血液学杂志 2004年第2期12卷 188-193页

作者：康文英王鸿利王红王学锋王从珠傅启华丁秋兰武文漫方怡王振义上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所上海200025 上海市医学检验重点实验室上海200023

本研究观察逆转录病毒载体和聚酰胺胺型 (PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因在小鼠体内的转染和表达 ,并与体外转染方法作比较。应用含B区缺失 ( 76 0aa- 16 39aa)人FⅧcDNA(FⅧBDcDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表... 详细信息

本研究观察逆转录病毒载体和聚酰胺胺型 (PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因在小鼠体内的转染和表达 ,并与体外转染方法作比较。应用含B区缺失 ( 76 0aa- 16 39aa)人FⅧcDNA(FⅧBDcDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表达质粒载体 pLNC FⅧBD包装成为逆转录病毒LNC FⅧBD ,exvivo转染小鼠骨髓基质细胞 ,同时将 pLNC FⅧBD与PAMAM树枝状聚合物按照 1∶15混合以形成复合体PAMAM pLNC FⅧBD进行小鼠invivo转染。分别于注射后第 2 4 ,4 8小时 ,第 1,2 ,3,4周取血 ,分离血浆 ,采用一期法测定人FⅧ活性 (FⅧc) ,ELISA法测定人FⅧ抗原 (FⅧAg) ,并采用Bethesdainhibitorassay测定人FⅧ抗体 ;同时取脏器肝、脾、肺、肾提取RNA ,进行RT PCR ,观察各组织的转录 ,并用苏木素伊红染色法观察各组织的形态学改变。结果表明 ,逆转录病毒转染人FⅧ基因的骨髓基质细胞输入体内后 ,可以在体内继续表达人FⅧ ,并且能有效地分泌至血液中。宿主小鼠体内可检测到的人FⅧ表达持续 3周以上 ,注射后第 2 4小时表达最高水平 ,人FⅧAg平均为 8.6ng/ml,此后人FⅧ抗体逐渐生成 ,人FⅧAg水平渐低 ,于注射后第 4周不再能测出人FⅧAg。注射复合体PAMAM pLNC FⅧBD在体内转染后 ,获得了短暂的人FⅧ生理水平的表达 ,在注射?

关键词：逆转录病毒聚酰胺-胺型树枝状聚合物凝血因子Ⅷ 基因治疗

人凝血因子VIIIcDNA在Balb/c小鼠及C57BL/6J小鼠体内的表达

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人凝血因子VIIIcDNA在Balb/c小鼠及C57BL/6J小鼠体内的表达

第九届全国实验血液学会议

作者：康文英王鸿利王红王学锋王从珠傅启华丁秋兰武文漫方怡王振义上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所

目的观察逆转录病毒载体和聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)在小鼠体内的表达。方法应用含B区缺失(760aa～1639aa)人FⅧcDNA(FⅧlBD cDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表达质粒载体pLNC-FⅧBD包装成为逆转录病毒LN...

目的观察逆转录病毒载体和聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)在小鼠体内的表达。方法应用含B区缺失(760aa～1639aa)人FⅧcDNA(FⅧlBD cDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表达质粒载体pLNC-FⅧBD包装成为逆转录病毒LNC-FⅧBD,而后转化Bal b/c小鼠骨髓基质细胞,将转化后的细胞通过尾静脉输入同种系小鼠体内,每只小鼠输入转化的骨髓基质细胞数为2×10个,这些细胞在体外可产生人FⅦ抗原(F·Ag)为556±80ng/10细胞/24小时,

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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冠心病TM1418位单核苷酸多态性研究

中华血液学杂志 2003年第9期24卷 497-497页

作者：钱高潮郑佐娅殷兆芳康文英王从珠王红李稻王鸿利上海第二医科大学医学检验重点实验室 200023 上海市第九人民医院心内科

我们在少量正常标本的测序中发现在上海汉族人群中凝血酶调节蛋白（thrombomodulin, TM）基因1418位存在C／T多态性，且基因型频率与文献报道的白种人和黑种人基因型分布存在差异。我们旨在通过较大样本的测定来证实这一发现，并探讨其... 详细信息

我们在少量正常标本的测序中发现在上海汉族人群中凝血酶调节蛋白（thrombomodulin, TM）基因1418位存在C／T多态性，且基因型频率与文献报道的白种人和黑种人基因型分布存在差异。我们旨在通过较大样本的测定来证实这一发现，并探讨其与冠心病（CHD）的关系。

关键词：冠心病凝血酶调节蛋白单核苷酸多态性基因多态性聚合酶链反应

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一种适应于直流微电网的全桥LLC变换器

现代电子技术 2025年第2期 29-34页

作者：国梦珠陈思郑贞钰郭永玉三峡大学电气与新能源学院

针对传统的光伏并网隔离型变换器的变压器体积大、损耗高和半导体器件电压应力高等问题，提出一种基于LLC谐振变换器的高增益DC-DC变换器。该变换器满足了输入输出之间电气隔离的要求，将全桥LLC谐振变换器与开关电容相结合，有效地提... 详细信息

针对传统的光伏并网隔离型变换器的变压器体积大、损耗高和半导体器件电压应力高等问题，提出一种基于LLC谐振变换器的高增益DC-DC变换器。该变换器满足了输入输出之间电气隔离的要求，将全桥LLC谐振变换器与开关电容相结合，有效地提高了变换器的增益，减少了变压器的体积和损耗，降低了半导体器件的电压应力，实现了开关管的零电压开通和二极管的零电流关断，有效地降低了开关损耗。首先对所提变换器的工作原理进行详细分析；其次用基波分析法分析其基本特性，并进行半导体器件电压、电流应力计算及电路的参数设计；最后搭建一台了800 W的实验样机，经过实验验证，该变换器实现了开关管的ZVS开通，二极管的ZCS关断；减小了变压器的体积和铜耗；转换效率最高可达94.9%。二次侧二极管的电压应力为输出电压的1 2，是全桥整流的0.5倍、半桥整流的0.25倍，且平均电流相同，有利于器件的选型，更适用于直流微电网的应用，证明了理论分析的准确性。

关键词：直流微电网 LLC谐振变换器 DC-DC变换器高增益电压应力开关电容基波分析法

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内热针疗法治疗早中期膝关节骨关节炎44例

中国针灸 2025年第01期 27-30页

作者：连佳伟赖喆蓥许建峰林瑞珠宁夏医科大学总医院康复医学科宁夏医科大学第一临床医学院银川市中医医院宁夏少数民族医药现代化教育部重点实验室宁夏医科大学总医院中医骨伤科

目的：观察内热针疗法治疗早中期膝关节骨关节炎（KOA）的临床疗效，并探究其对软骨厚度的影响。方法：招募44例早中期KOA患者采用内热针疗法治疗，穴取阿是穴（多位于髌下脂肪垫、髌韧带两侧、股四头肌肌腱处、内外侧副韧带附着处），... 详细信息

目的：观察内热针疗法治疗早中期膝关节骨关节炎（KOA）的临床疗效，并探究其对软骨厚度的影响。方法：招募44例早中期KOA患者采用内热针疗法治疗，穴取阿是穴（多位于髌下脂肪垫、髌韧带两侧、股四头肌肌腱处、内外侧副韧带附着处），每周1次，共治疗4周。比较患者治疗前后及治疗结束后3个月（随访）疼痛视觉模拟量表（VAS）评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数（WOMAC）评分、30 s椅立测试（30sCST）次数、股骨髁间软骨厚度及膝关节超声评分，并评定临床疗效。结果：与治疗前比较，患者治疗后VAS、WOMAC、膝关节超声评分降低（P<0.05）,30s CST次数增加（P<0.05）；随访时VAS、WOMAC评分降低（P<0.05）,30s CST次数和股骨髁间软骨厚度增加（P<0.05）。治疗后总有效率为93.2%(41/44)，随访时总有效率为95.5%(42/44)。结论：内热针治疗早中期KOA患者疗效较好，可减轻疼痛、改善关节功能，并有助于延缓软骨退变和疾病进展。

关键词：膝关节骨关节炎,早中期针刺内热针疗法软骨退变肌骨超声

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