氨基末端B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体的构建及纯化

作     者：李卫鹏 郑佐娅 王红 王从珠 杭勤 赵卫国 LI Weipeng;ZHENG Zuoya;WANG Hong;WANG Congzhu;HANG Qin;ZHAO Weiguo

作者机构：上海第二医科大学上海市医学检验重点试验室上海200023 

出 版 物：《检验医学》 (Laboratory Medicine)

年 卷 期：2005年第20卷第5期

页      面：405-408页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：氨基末端B型钠尿肽 克隆 构建 纯化 

摘      要：目的克隆人氨基末端B型钠尿肽(NT-proBNP)基因,构建原核表达载体并纯化其表达蛋白。方法用聚合酶链反应(PCR)从正常成人cDNA库中扩增出人NT-proBNP基因,将其克隆进pUCm-T中测定核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG诱导表达,GSH-agarose亲和纯化该表达蛋白。结果经PCR扩增成功获得228bp的NT-proBNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的23%,用SDS-PAGE和Westernblot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子质量为34600。经亲和纯化后的GST-NT-proBNP的纯度可以达到95%,得率为1.7mg/100ml。结论NT-proBNP基因的克隆、表达和纯化成功,为建立NT-proBNP检测方法奠定了基础。