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氧化应激诱导小鼠海马神经元microRNA表达谱的改变及验证

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氧化应激诱导小鼠海马神经元microRNA表达谱的改变及验证

作者：牛静亚河北医科大学

学位级别：硕士

目的：随着科技和经济的发展，现代社会人口老龄化趋势迅速增长，老年性痴呆(Alzheimer’s Disease, AD)的患病率逐年上升，严重影响老年人的生存质量。AD是最常见的一种神经退行性疾病，以进行性认知功能障碍为特征，主要病理改变为皮... 详细信息

目的：随着科技和经济的发展，现代社会人口老龄化趋势迅速增长，老年性痴呆(Alzheimer’s Disease, AD)的患病率逐年上升，严重影响老年人的生存质量。AD是最常见的一种神经退行性疾病，以进行性认知功能障碍为特征，主要病理改变为皮质神经元数量减少、神经纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)和含有β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)的老年斑(senile plaque, SP)的形成以及部分脑区(海马、新皮质和基底前脑等)神经突出消失等。AD的病因复杂，一般认为由基因突变、老化、外伤等多种因素引起，目前尚无有效的治疗方法，给个人、家庭和社会带来沉重的负担。关于AD的发病机制存在多种学说，包括氧化应激学说、基因突变学说、Aβ级联学说、Tau蛋白假说、线粒体功能障碍和自噬等，其中氧化应激学说备受关注。大量研究证实氧化应激最早参与了AD的病理进程。MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约22个核苷酸的内源性非编码小RNA，通过抑制mRNA的转录后翻译调控蛋白的表达。大量研究表明，miRNAs在脑老化及神经退行性疾病的发生、发展过程中发挥重要作用。但在氧化应激致AD发病早期，miRNAs表达的改变及其对靶分子的调控机制尚不清楚。H2O2是一种稳定的活性氧自由基。本研究以H2O2刺激原代培养的海马神经元制备氧化应激细胞模型，检测氧化应激诱导的miRNAs表达谱的改变。对差异性表达miRNAs进行Real-time PCR验证，并对其靶基因进行生物信息学分析，筛选可能与氧化应激致AD发生有关的miRNAs。为进一步研究miRNAs在AD发病中的作用和调控机制以及开发以miRNAs为靶点的相关药物提供依据。方法：(1)实验动物：封闭群清洁级健康快速老化模型小白鼠(SenescenceAccelerated Mouse, SAM)。(2)实验方法：①海马神经元分离培养：选择孕18-19天的SAMR1小鼠，取出完整的胎鼠海马组织进行分离培养，以5×108cells/L接种至直径35mm的培养皿中(2ml/dish)，用于提取RNA进行基因芯片筛选及Real-time PCR验证;以5×107cells/L接种于96孔板中(200μl/孔)，用于测定细胞活力;以1×108cells/L接种于24孔板中(1ml/孔)，用于测定细胞凋亡、坏死。②海马神经元的鉴定：对生长到第7天的海马神经元进行特异性标志物微管相关蛋白2(Microtubule-associated protein2, MAP-2)免疫荧光染色，鉴定海马神经元。③MTT法测定细胞活力：将生长7天的海马神经元随机分为5组，每组中分别加入0、100μM、200μM、400μM、800μM的HO处理24h，用MTT法测定细胞活力，观察细胞损伤情况，选择合适的HO刺激浓度。④采用TUNEL和PI染色测定细胞凋亡、坏死：将生长了7天的海马神经细胞随机分为2组，其中一组加入正常neurobasel培养液，另一组加入含200μM HO的neurobasel培养液，24h后用TUNEL和PI染色法测定细胞凋亡、坏死。⑤提取细胞总RNA进行miRNAs基因芯片筛查：应用Qiagen公司的MiRNeasy Mini Kit试剂盒提取正常培养和200μMHO刺激6h后的海马神经元总RNA，Nandrop ND-1000分光光度计测定RNA质量，1%琼脂糖凝胶电泳测定RNA纯度，采用Affymetrix miRNA基因表达谱芯片GeneChip miRNA2.0Array进行杂交，检测海马神经元miRNAs的表达谱。⑥miRNAs生物信息学分析：根据基因芯片结果，筛选出倍数变化在1.5倍以上的miRNAs,应用DAVID软件对miRNAs的靶基因进行生物信息学分析。⑦筛选与AD发病有关的miRNAs采用Real-time PCR方法进行验证。⑧统计学方法：所有数据采用x±s表示。用SPSS13.0软件进行数据处理，采用方差分析和独立样本t检验进行统计学分析，以P <0.05为有统计学意义。结果：(1)海马神经元鉴定：微管相关蛋白MAP-2荧光染色，阳性反应物呈绿色荧光，反应物分布于神经元的胞体与树突，轴突和神经胶质细胞均不显色。染色结果显示，培养至第7天的海马神经元胞体饱满，呈椭圆形或多边形，树突发达，相互交错，形成发达的神经纤维网络。(2)细胞活力测定：MTT结果显示，不同浓度的HO刺激海马神经元，细胞活力明显降低(P <0.01)，并且表现出剂量依赖性。(3)TUNEL染色测定细胞凋亡：与正常培养的海马神经元比较，200μM HO刺激24h后细胞凋亡明显增多(P <0.01)。(4)PI染色测定细胞坏死：与正常培养的海马神经元比较，200

关键词：阿尔茨海默病 microRNAs 氧化应激生物信息学分析凋亡

MicroRNAs在阿尔茨海默病发病中的作用

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中国老年学杂志 2014年第4期34卷 1127-1129页

作者：牛静亚张睿许顺江河北医科大学第一医院中心实验室河北石家庄050031

目前,全世界有2 000多万阿尔茨海默病(AD)患者,尚无特效治疗或逆转病情的药物。AD的病因极其复杂,一般认为与遗传、环境及二者相互作用有关,并且发病机制还不十分明确。MicroRNA是一种长度为20~24个核苷酸的5’端带磷酸基团、3’端带羟... 详细信息

目前,全世界有2 000多万阿尔茨海默病(AD)患者,尚无特效治疗或逆转病情的药物。AD的病因极其复杂,一般认为与遗传、环境及二者相互作用有关,并且发病机制还不十分明确。MicroRNA是一种长度为20~24个核苷酸的5’端带磷酸基团、3’端带羟基的内源性非编码小RNA,在生物体内具有重要作用。miRNAs不仅参与生理过程的调控,在疾病的发生以及机体对药物的反应等生命过程中也发挥重要调节作用,可通过多种途径影响疾病的发生、发展与转归。

关键词：老年性痴呆 miRNAs 基因调控

银丁消肿坐浴方熏洗对肛瘘术后创面愈合的影响

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河北中医 2023年第6期45卷 948-951页

作者：牛静亚刘娟尤帅徐会志许顺江河北省第八人民医院重症监护室河北石家庄050024 河北省第八人民医院普外肛肠科河北石家庄050024 河北医科大学第一医院中心实验室河北石家庄050030 河北省脑科学与精神心理疾病重点实验室河北石家庄050030

目的观察银丁消肿坐浴方熏洗对肛瘘术后创面愈合的影响。方法将60例单纯低位肛瘘切除术术后患者按照随机数字表法均分为2组。对照组30例予高锰酸钾溶液外洗坐浴治疗,治疗组30例予银丁消肿坐浴方熏洗治疗,2组均2周为1个疗程,治疗1个疗... 详细信息

目的观察银丁消肿坐浴方熏洗对肛瘘术后创面愈合的影响。方法将60例单纯低位肛瘘切除术术后患者按照随机数字表法均分为2组。对照组30例予高锰酸钾溶液外洗坐浴治疗,治疗组30例予银丁消肿坐浴方熏洗治疗,2组均2周为1个疗程,治疗1个疗程后比较2组临床疗效,比较2组治疗第3、7、14天创面水肿、疼痛、渗液评分,治疗第7天创面肉芽组织毛细血管数,并比较2组创面愈合时间。结果治疗第7、14天,治疗组创面水肿、渗液及疼痛评分均较本组术后第3天降低(P<0.05),且均低于对照组同期(P<0.05)。治疗第14天,对照组创面水肿、渗液及疼痛评分均较本组治疗第3天降低(P<0.05)。治疗组创面愈合时间短于对照组(P<0.05),治疗第7天每个视野中创面肉芽组织毛细血管数多于对照组(P<0.05)。治疗组总有效率93.33%(28/30),对照组总有效率76.67%(23/30),治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。结论银丁消肿坐浴方熏洗能促进肛瘘术后创面愈合。

关键词：直肠瘘伤口愈合手术后医护外治疗法熏洗疗法

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α疱疹病毒UL24蛋白特性与功能研究进展

微生物学报 2024年第1期64卷 30-41页

作者：牛静轶李艺璇叶超西南大学动物医学院动物健康与动物性食品安全国际合作联合实验室重庆400715

α疱疹病毒是一大类具有包膜的双链DNA病毒,具有嗜神经性感染和潜伏感染的特性,对人畜的健康具有较大威胁。α疱疹病毒基因组能够编码多种蛋白,其中UL24是α疱疹病毒重要的毒力基因之一,能够编码一种高度保守的蛋白,在调控病毒感染致病... 详细信息

α疱疹病毒是一大类具有包膜的双链DNA病毒,具有嗜神经性感染和潜伏感染的特性,对人畜的健康具有较大威胁。α疱疹病毒基因组能够编码多种蛋白,其中UL24是α疱疹病毒重要的毒力基因之一,能够编码一种高度保守的蛋白,在调控病毒感染致病方面具有重要的生物学作用。本文主要对UL24基因及其编码蛋白基本特性,UL24蛋白在α疱疹病毒的组装和复制、感染和致病以及抑制宿主天然免疫3个方面的调控功能进行了梳理,为深入理解α疱疹病毒蛋白的功能,以及进一步防控α疱疹病毒感染提供理论参考。

关键词： α疱疹病毒 UL24蛋白生物学功能

新媒介技术环境下新闻从业者职业身份认同的挑战与应对

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湖南大学学报（社会科学版） 2024年第3期38卷 153-160页

作者：牛静毕璐健华中科技大学新闻与信息传播学院湖北武汉430074

新媒介技术环境下,新闻从业者职业身份认同面临着种种问题与挑战。社交媒体出现后,公共与私人的界限被打破,新闻从业者的职业身份与个人身份界限模糊,他们被迫重新思考用何种方式在社交媒体上表现自己的身份,如何以专业或个人的方式展... 详细信息

新媒介技术环境下,新闻从业者职业身份认同面临着种种问题与挑战。社交媒体出现后,公共与私人的界限被打破,新闻从业者的职业身份与个人身份界限模糊,他们被迫重新思考用何种方式在社交媒体上表现自己的身份,如何以专业或个人的方式展现自己。与此同时,媒体组织的管理更为专业化,新闻从业者被视为特殊的“雇员”,处于从属的、有组织的“组织员工”与“专业人员”的双重身份中,他们需要在媒体组织的结构性约束中工作,时常面对组织惯例与职业原则之间的冲突。此外,人工智能技术的发展改变了新闻生产模式,新闻从业者需要重新审视自身的职业身份。面对这些问题,新闻从业者需要继续维持新闻专业理念,强化专业意识,同时积极寻求群体心理认同,强化情感归属,利用新技术提升其工作的专业性等,以此来重塑职业身份认同。

关键词：新闻从业者职业身份认同身份冲突专业主义

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紫檀芪对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及机制

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中国药房 2023年第16期34卷 1967-1971页

作者：刘亚坤李刚颜娟徐会志吴彦江尤帅牛静亚李洪健张丙贵河北中医药大学研究生学院石家庄050200 石家庄市中医院肛肠科石家庄050011 河北北方学院附属第一医院药学部河北张家口075000 河北省第八人民医院普外肛肠科石家庄050024

目的探究紫檀芪(PTE)对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及机制。方法取10只SD大鼠为对照组,其余大鼠以饲喂高脂高糖饲料+腹腔注射链脲佐菌素+剪去背部标记区域皮肤及皮下组织建立糖尿病性皮肤溃疡模型后,随机分为模型组、PTE低... 详细信息

目的探究紫檀芪(PTE)对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及机制。方法取10只SD大鼠为对照组,其余大鼠以饲喂高脂高糖饲料+腹腔注射链脲佐菌素+剪去背部标记区域皮肤及皮下组织建立糖尿病性皮肤溃疡模型后,随机分为模型组、PTE低剂量组(40mg/kg)、PTE高剂量组(80mg/kg)和PTE高剂量+PP2组(80mg/kg的PTE+2mg/kg的SRC抑制剂PP2),每组10只。于建模后第2天,各药物组大鼠腹腔注射相应药液,对照组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水,每天1次,连续14d。测算各组大鼠给药第7、14天的创面愈合率,检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)含量,观察创面肉芽组织的病理变化并检测创面肉芽组织中SRC/促分裂原活化的蛋白激酶激酶(MEK)/胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠的创面愈合率、血清中VEGF含量和创面肉芽组织中SRC、MEK1/2、ERK1/2的磷酸化水平均显著降低(P<0.05),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均显著升高(P<0.05),创面肉芽组织中有明显的炎症细胞浸润,新生血管减少;与模型组比较,PTE低、高剂量组大鼠上述指标均显著改善(P<0.05),创面肉芽组织的病理损伤均明显改善;PP2显著逆转了高剂量PTE对上述指标的改善作用(P<0.05)。结论PTE能促进糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠的创面愈合,其作用机制可能与激活SRC/MEK/ERK信号通路有关。

关键词：紫檀芪糖尿病性皮肤溃疡创面愈合 SRC/促分裂原活化的蛋白激酶激酶/胞外信号调节激酶信号通路

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气相色谱法测定聚异丁烯丁二酸酐中游离酸酐

化学分析计量 2024年第3期33卷 65-69,87页

作者：牛静静王世平杜亚珍新乡市瑞丰新材料股份有限公司河南新乡453000

建立气相色谱法测定聚异丁烯丁二酸酐中马来酸酐含量的方法。样品用有机溶剂萃取后进色谱柱分离。色谱柱采用HP-FFAP极性毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25μm),载气为高纯氮气,分流比为1∶40,进样口温度为240℃,采用程序升温方式,初始温度... 详细信息

建立气相色谱法测定聚异丁烯丁二酸酐中马来酸酐含量的方法。样品用有机溶剂萃取后进色谱柱分离。色谱柱采用HP-FFAP极性毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25μm),载气为高纯氮气,分流比为1∶40,进样口温度为240℃,采用程序升温方式,初始温度为50℃,以10℃/min的速率升温至230℃,保持10 min,氢火焰离子化检测器温度为260℃。马来酸酐的质量分数在0~0.40%范围内与色谱峰面积线性良好,相关系数大于0.999。样品加标回收率为96.72%~99.35%,测定结果的相对标准偏差为1.172%~1.949%(n=6)。该方法操作简便、快捷、准确度高,可以满足实际生产需求。

关键词：聚异丁烯丁二酸酐马来酸酐气相色谱法无灰分散剂

硫代磷酸三苯酯中单质硫的高效液相色谱分析研究

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分析仪器 2024年第2期 85-88页

作者：王世平牛静静杜亚珍新乡市瑞丰新材料股份有限公司新乡453000

采用高效液相色谱法测定了硫代磷酸三苯酯中单质硫的含量。利用高效液相色谱外标法对试样进行分离、检测,获得了最佳色谱条件。试验结果表明,最佳色谱条件:采用C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm×5μm)和甲醇的流动相,流速为1.0mL/min,紫外检... 详细信息

采用高效液相色谱法测定了硫代磷酸三苯酯中单质硫的含量。利用高效液相色谱外标法对试样进行分离、检测,获得了最佳色谱条件。试验结果表明,最佳色谱条件:采用C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm×5μm)和甲醇的流动相,流速为1.0mL/min,紫外检测器,检测波长为254nm,柱温为40℃,等度洗脱,进样量为10μL。方法的加标回收率为97%~100%,相对标准偏差(n=5)小于2%,具有操作简便、快捷、准确度高的特点。

关键词：硫代磷酸三苯酯单质硫高效液相色谱法

舒芬太尼联合布托啡诺与舒芬太尼联合地佐辛用于单孔胸腔镜肺叶切除术后镇痛的效果比较

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肿瘤研究与临床 2024年第6期36卷 454-458页

作者：牛静康金秀刘娜山西省肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院山西医院、山西医科大学附属肿瘤医院麻醉科太原030013 山西省肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院山西医院、山西医科大学附属肿瘤医院宁养院太原030013

目的探讨舒芬太尼联合布托啡诺与联合地佐辛用于单孔胸腔镜肺叶切除术后镇痛的效果。方法前瞻性随机对照研究。前瞻性选取2023年10月至12月山西省肿瘤医院行单孔胸腔镜肺叶切除手术患者72例,按随机数字表法分为A组和B组,每组36例。A组... 详细信息

目的探讨舒芬太尼联合布托啡诺与联合地佐辛用于单孔胸腔镜肺叶切除术后镇痛的效果。方法前瞻性随机对照研究。前瞻性选取2023年10月至12月山西省肿瘤医院行单孔胸腔镜肺叶切除手术患者72例,按随机数字表法分为A组和B组,每组36例。A组采用舒芬太尼联合地佐辛进行术后镇痛;B组采用舒芬太尼联合布托啡诺进行术后镇痛。比较两组术后不同时间点疼痛视觉模拟(VAS)评分、Ramasy镇静评分、生命体征监测指标、术后不良反应和拔除胸腔闭式引流管的时间。结果A组男性20例(55.6%),女性16例(44.4%),年龄(58±10)岁;B组男性16例(44.4%),女性20例(55.6%),年龄(56±11)岁;两组性别、年龄、体质量质数、美国麻醉医师协会分级、手术时间差异均无统计学意义(均P>0.05)。两组术后2、6、10 h的VAS评分比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);12、24、48 h B组VAS评分均低于A组,差异均有统计学意义(均P0.05)。两组患者术后不良反应发生率均为16.67%(6/36)。结论舒芬太尼联合布托啡诺用于单孔胸腔镜肺叶切除术后镇痛效果较舒芬太尼联合地佐辛好,可能有助于加速患者术后康复。

关键词：胸腔镜外科手术镇痛布托啡诺地佐辛舒芬太尼