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表达重组人源化Ⅲ型胶原蛋白毕赤酵母工程菌的构建

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表达重组人源化Ⅲ型胶原蛋白毕赤酵母工程菌的构建

作者：钱娜娜吉林大学

学位级别：硕士

Ⅲ型胶原蛋白是胶原蛋白超家族的主要成员,由于其形成的纤维直径小,同时具备促进凝血及浅表伤口愈合等多种功能,因而广泛应用于医学美容和医疗器械领域。动物来源的Ⅲ型胶原蛋白存在病毒感染、免疫排斥的安全隐患以及产能不足等多方面... 详细信息

Ⅲ型胶原蛋白是胶原蛋白超家族的主要成员,由于其形成的纤维直径小,同时具备促进凝血及浅表伤口愈合等多种功能,因而广泛应用于医学美容和医疗器械领域。动物来源的Ⅲ型胶原蛋白存在病毒感染、免疫排斥的安全隐患以及产能不足等多方面的问题,因此,基因工程重组胶原蛋白现已成为关注的焦点。然而,国内现有重组Ⅲ型胶原蛋白产品都是胶原蛋白的片段或人为设计的非天然序列的类似物,不仅无法涵盖天然胶原蛋白的全部功能区,更难以达到天然胶原蛋白的结构强度。一些研究在表达时添加亲和纯化标签,虽然有利于纯化,但纯化标签的免疫原性也额外增加了安全风险。鉴于以上问题,本文构建了能够表达全序列人Ⅲ型胶原蛋白的毕赤酵母分泌表达系统,并对纯化得到的全序列胶原蛋白进行了表征,同时构建脯氨酸羟化酶表达载体和宿主,尝试探索可实现胞内羟化修饰的共表达方案。论文的主要研究内容如下:首先,我们选择菊粉酶信号肽(INU)和酵母转化酶信号(INVE)替代α-factor引导目的蛋白的分泌。两种信号肽的编码序列通过基因合成克隆至p PICZ B中得到p PICZ-INU和p PICZ-INVE两个载体,然后将合成的人Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)基因分别连接进两个载体中,得到表达载体p PICZ-INU-COL3A1和p PICZ-INVE-COL3A1。用所得表达载体电转化毕赤酵母X33,随机挑取12个转化子进行摇瓶发酵,在发酵液上清中检测到目的条带。随后,采用质谱法进行肽段覆盖率和N/C-末端氨基酸序列测定对该条带进行鉴定,确证COL3A1在两种信号肽调控下均成功实现分泌表达,并且在p PICZ-INVE-COL3A1的转化子中筛到一株表达量较高的工程菌,将该工程菌命名为INVE-COL3A1,以此工程菌为基础开展后续实验。其次,为了探索能够实现COL3A1羟化修饰的方法,我们将p GAPZ A的筛选标记由博来霉素(Zeocin)替换为杀稻瘟菌素(Blasticidin),所得载体命名为p GAPB。用2A肽连接人脯氨酰4-羟化酶(P4H)的α亚基和β亚基,将其整体的编码基因克隆至p GAPB中,获得表达载体p GAPB-P4H并电转化上一步工作获得的INVE-COL3A1重组菌。随机挑取6个转化子摇瓶发酵,利用甘油和甲醇诱导COL3A1和P4H共表达,对摇瓶发酵上清进行SDS-PAGE检测,结果显示其中一个转化子的COL3A1表达条带比INVE-COL3A1菌株更明显,将其命名为INVE-COL3A1-P4H。随后,通过盐析和离子交换等技术,我们分离纯化了工程菌INVE-COL3A1-P4H表达的COL3A1,其电泳纯度大于80%。质谱法测定肽段覆盖率为86%,N/C端与理论序列均能完全匹配,再结合SDS-PAGE目的条带的分子量大小,我们可以确定表达产物为全序列COL3A1。羟基化分析结果表明,其脯氨酸残基的羟基化位置和丰度远低于天然胶原蛋白。但是Hacat细胞的增殖和迁移结果表明,其生物学活性与市售重组人源化Ⅲ胶原蛋白相当。最后,我们尝试对INVE-COL3A1-P4H工程菌进行高密度发酵,期望通过充足的供氧改善目的蛋白的羟化修饰,并评估工程菌的目的蛋白产量。与摇瓶发酵相比,72 h高密度发酵产物的质谱分析结果表明,COL3A1脯氨酸羟基化修饰位点及丰度未见明显提高,但是SDS-PAGE检测结果显示,本工程菌表达的目的蛋白在培养基中积累量可达2 g/L,初步满足了产业化需求。通过以上工作,我们获得了一株高表达重组人源化Ⅲ型胶原蛋白的工程菌。通过发酵优化和15 L发酵罐小试提升了其表达量,探究了重组胶原蛋白的纯化方法和羟化修饰方案,为重组人Ⅲ型胶原蛋白的工业化生产奠定了基础。

关键词：重组人源化Ⅲ型胶原蛋白 COL3A1 毕赤酵母分泌表达羟化修饰

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弹丸章动测试技术研究

弹丸章动测试技术研究

作者：纪娜娜西安工业大学

学位级别：硕士

弹丸的章动角是指炮弹、枪弹等在飞行过程中轴线的方向向量与其弹道切向(质心运动方向)的夹角,它是影响武器飞行稳定性的重要因素,也是外弹道测量与分析的重要参数,弹丸章动角的测量对于武器研究以及提高武器打击性能具有重要意义。传... 详细信息

弹丸的章动角是指炮弹、枪弹等在飞行过程中轴线的方向向量与其弹道切向(质心运动方向)的夹角,它是影响武器飞行稳定性的重要因素,也是外弹道测量与分析的重要参数,弹丸章动角的测量对于武器研究以及提高武器打击性能具有重要意义。传统的章动角测量方法都是基于其在某一个平面内的投影角度进行测试,因此误差较大。本文基于双目高速视觉成像原理,应用深度学习理论以及数字图像处理技术研究弹丸章动角测量技术。基于双目视觉测量原理,推导出了弹丸飞行轨迹与弹丸轴线的空间直线方程解算模型,进而给出了弹丸章动角空间解析数学模型;研究了弹丸检测方法,针对丛林、天空背景变换以及虫鸟误入等造成的对弹丸目标检测的影响问题,采用基于SSD目标检测的改进方法完成弹丸目标的检测与位置提取,根据位置信息对背景进行简化。由于SSD网络模型对于高速相机拍摄的弹丸序列帧存在错检与漏检的情况,将SSD网络的骨干网络VGG变为带有残差网络的Resnet50网络,以提升网络的学习能力;为进一步提高弹丸目标的检测精度,在SSD网络六个特征层的基础上加入一个浅层特征层形成七个预测头,进一步提升弹丸目标的检测能力;为提升浅层特征层的检测效率,加入CBAM注意力模块,使网络能够关注浅层特征层的重点信息。针对两台高速相机识别到的弹丸图像,研究了特征匹配算法,为减小匹配的难度,首先进行了弹丸目标的二值化处理。通过对比常用匹配算法,确保弹尖与弹尾匹配的完整性,采用了一种融合SIFT和ORB的改进算法。首先采用SIFT与ORB算法进行特征点检测,然后将匹配到的SIFT特征以及ORB特征都进行BRIEF描述,最后采用汉明距离、最近邻距离比值以及MAGSAC++算法完成最终的匹配。实验结果表明,采用本文改进后的弹丸检测网络模型相比于改进前的检测精度提升了2.75%,采用改进后的匹配算法可以达到实验对弹丸弹尖与弹尾的匹配要求。为验证本文测量方法的可行性以及正确性,在某靶场对某型号火炮的弹丸章动角进行了实弹测试实验。实验共进行了2发实弹射击实验,测试系统均捕获了弹丸飞行图像,并处理解算出了弹丸章动数据。

关键词：章动角双目视觉 SSD 特征匹配

档案袋评价在幼儿美术教育中的应用研究 ——以L幼儿园为例

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档案袋评价在幼儿美术教育中的应用研究 ——以L幼儿园为例

作者：辛娜娜青海师范大学

学位级别：硕士

《深化新时代教育评价改革总体方案》中深刻体现新时代教育评价的方向的变革,即要由原来的“知识评价”转向到“素养评价”。幼儿美术学习关键在于美术创作过程,其最终的目的在于能够通过适当的教育评价来培养幼儿具备良好的美术学习与... 详细信息

《深化新时代教育评价改革总体方案》中深刻体现新时代教育评价的方向的变革,即要由原来的“知识评价”转向到“素养评价”。幼儿美术学习关键在于美术创作过程,其最终的目的在于能够通过适当的教育评价来培养幼儿具备良好的美术学习与发展的素养,最终推进幼儿身心健康全面发展。档案袋评价以“多元智能理论”和“建构主义理论”为基础,尊重幼儿的主体地位,坚持“以人为本”,遵循幼儿美术发展规律,作为一种质性评价的方式应用到幼儿美术教育中具有适切性。基于此,教师应该怎样更好地创建幼儿美术档案袋、丰富幼儿美术档案袋、优化美术档案袋,并如何科学有效利用档案袋评价这一方式使得幼儿自身美术水平和美术素养得以提升成为当前的关键性问题。本研究的研究对象为X市L幼儿园的中班教师及幼儿,其研究方法主要采用观察法、访谈法和实物分析法进行相关探究。通过在实习过程中观察幼儿园教师在现实的美术教育活动中创建和实施幼儿美术档案袋评价的情况以及幼儿在美术教育活动中的真实表现,分别从“计划、实施、反馈”三阶段进行观察,同时对幼儿园指导教师及相关领导进行访谈,并结合现存的中班幼儿美术档案袋从外观、收集项目、收集材料以及相关文字记录进行实物分析,从而更为深入地了解X市L幼儿园美术档案袋评价的实施现状。本研究通过一系列的观察和访谈以及对于实物的整理、分析发现,L幼儿园中班教师对于幼儿美术档案袋评价的创建实施在各阶段存在以下问题:计划阶段评价标准不够明确,主要表现为:美术档案袋创建目标不明晰、缺乏严格的创建依据;实施阶段评价过程较为形式化,主要表现为:美术档案袋收集内容较为片面、评价主体较为单一、分析过程缺乏针对性、整体过程较为繁杂;反馈阶段评价结果应用不足,主要表现为:美术档案袋评价反馈内容流于表面、反馈效果不够显著。鉴于此,本研究对X市L幼儿园美术档案袋评价在各阶段的有效运用提出以下优化建议:加强美术档案袋评价的计划工作,包括强化教师美术档案袋评价的培训与指导、制定科学的美术档案袋评价标准;推进美术档案袋评价的实施策略,包括强化教师五域融合的观念、重视幼儿美术档案袋评价主体地位、注重幼儿美术教育中的过程性评价、确保美术档案袋评价技术保障支持。

关键词：档案袋评价幼儿美术教育教师评价素养

欧拉-欧拉双流体模型中颗粒黏性对液固散式流态化的影响

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化工学报 2024年第9期75卷 3103-3112页

作者：祝赫张仪齐娜娜张锴华北电力大学热电生产过程污染物监测与控制北京市重点实验室

采用无黏性双流体模型、基于颗粒动理学的双流体模型以及Brandani和Zhang简化双流体模型探究了颗粒黏性对液固散式流化特性的影响规律。经与文献中实验数据和Gibilaro公式计算值对比后发现：3种双流体模型均能较好地预测整体固含率，与... 详细信息

采用无黏性双流体模型、基于颗粒动理学的双流体模型以及Brandani和Zhang简化双流体模型探究了颗粒黏性对液固散式流化特性的影响规律。经与文献中实验数据和Gibilaro公式计算值对比后发现：3种双流体模型均能较好地预测整体固含率，与实验值相对偏差在3%以内，其中无黏性双流体模型和简化双流体模型对固含率预测更符合散式流态化特点；3种双流体模型对时均颗粒轴向速度预测均呈现整体环核结构的固有属性，其中简化双流体模型在较低和较高两组液速工况下预测的相对偏差平均值分别为0.277和1.028；当入口液速突然变化后，收缩过程中简化双流体模型对响应时间预测准确度略高，而膨胀过程中因低浓度区界面不稳定以及膨胀过程中床内颗粒形成的由浓到稀过渡段延长了稳定时间，3种模型预测均与理想过程存在一定偏差，其中液速较低时三者差异不明显，但液速较高时简化双流体模型准确性略高。基于颗粒动理学的双流体模型对动态过程模拟的计算耗时最长。

关键词：流态化计算流体力学流体动力学双流体模型液固两相流颗粒黏性

突发公共卫生事件护士工作压力源量表的编制及信效度检验

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突发公共卫生事件护士工作压力源量表的编制及信效度检验

作者：龚娜娜电子科技大学

学位级别：硕士

目的:（1）探讨护士在突发公共卫生事件期间的工作压力体验及其来源,为编制突发公共卫生事件护士工作压力源量表提供参考依据。（2）编制适合我国的突发公共卫生事件护士工作压力源量表,并进行信效度检验,为护理管理者全面评估突发公共... 详细信息

目的:（1）探讨护士在突发公共卫生事件期间的工作压力体验及其来源,为编制突发公共卫生事件护士工作压力源量表提供参考依据。（2）编制适合我国的突发公共卫生事件护士工作压力源量表,并进行信效度检验,为护理管理者全面评估突发公共卫生事件期间护士工作压力源提供测量工具。方法:严格遵循量表编制程序,以需求-控制模型和资源保护理论为指导,结合文献分析、半结构化访谈构建突发公共卫生事件护士工作压力源量表条目池。通过德尔菲专家咨询,对条目池条目进行筛选,形成量表初稿。在预调查阶段,采用便利抽样法选取参与突发公共卫生事件救援的护士进行问卷调查,采用项目分析法、相关系数法、信度检验法、因子分析法和探索性因子分析法对条目及维度进行筛选。在正式调查阶段,采用便利抽样法选取参与突发公共卫生事件救援的护士进行问卷调查,采用内容效度、结构效度、内部一致性信度等方法对突发公共卫生事件护士工作压力源量表的信效度进行进一步检验,最终形成突发公共卫生事件护士工作压力源量表终稿。结果:（1）在条目池构建阶段,结合文献分析及半结构化访谈结果,经小组讨论后形成了包含5个维度50个条目的量表条目池。（2）在专家咨询阶段,邀请17位相关领域专家进行两轮咨询,形成了包含5个维度45个条目的量表初稿。（3）在预调查阶段,经项目分析和探索性因子分析后形成了包含4个维度27个条目的突发公共卫生事件护士工作压力源量表。（4）在正式调查阶段,信度检验结果显示,量表总体Cronbach'ɑ系数为0.961,各维度Cronbach'ɑ系数在0.888～0.917之间;量表总体的分半信度为0.895,各维度的分半信度为0.853～0.918之间,具有较好的信度。在效度检验方面,量表的I-CVI在0.86～1之间,S-CVI/Ave为0.93;各条目的因子载荷量在0.53～0.88之间,X2/df为2.2350.9,IFI为0.949>0.9,TLI为0.943>0.9,CFI为0.948>0.9;各因素负荷均>0.5,4个潜变量间AVE值的范围在0.537～0.617之间,CR值在0.888～0.918之间,表明量表具有较好的效度。结论:本研究编制的突发公共卫生事件护士工作压力源量表具有较好的科学性和信效度,可用于突发公共卫生事件护士工作压力源评估。

关键词：突发公共卫生事件护士工作压力源量表

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媒介景观视角下抖音三农短视频的呈现研究

媒介景观视角下抖音三农短视频的呈现研究

作者：符娜娜武汉体育学院

学位级别：硕士

随着互联网技术和智能手机的普及,短视频日益成为助力乡村发展的新引擎,越来越多的用户依托短视频平台分享有关乡村生产生活的内容,不仅催生了大批乡村网红也掀起大众对乡村关注的浪潮。而如今三农短视频在持续走红的同时也陷入一种尴... 详细信息

随着互联网技术和智能手机的普及,短视频日益成为助力乡村发展的新引擎,越来越多的用户依托短视频平台分享有关乡村生产生活的内容,不仅催生了大批乡村网红也掀起大众对乡村关注的浪潮。而如今三农短视频在持续走红的同时也陷入一种尴尬的境地之中,一方面它以平民化的视角激活乡村的可见性,成为大众走近乡村社会的窗口。另一方面不断屈从于表象化,遮蔽乡村本真性,建造与现实生活相去甚远的拟态图景。基于此本文以抖音三农短视频2023年涨粉最快的50位博主年度点赞量最高的5条视频作为研究样本,结合媒介景观理论通过内容分析法、文本分析法、参与式观察法,探寻三农短视频所呈现的媒介景观。研究发现共呈现出三种类型的景观,首先是乡村呈现出三重不一样的景象主要包括田园牧歌式的雅致乡村、返璞归真的朴素乡村以及落后俗气的土味乡村;其次随着新时代农村建设三农短视频中农民人物形象也越来越立体多样,主要包括时尚精致会打扮的弄潮儿、多才多艺的全能王以及一些凄惨无助的可怜人形象;最后从视觉消费、身体消费、情感消费三方面阐释当前三农短视频中所呈现的消费景观。对景观类型剖析完成之后厘清其形成的原因,技术飞速更新迭代和受众攀升的视觉欲望为消费主义入侵提供了有利条件,商业资本打着视觉审美享受与放松的旗号,在景观的掩饰下形成了以利益取向为核心的生产链条,于是内容生产上不断迎合和取悦受众,加之创作者强烈的个体表现欲便导致乡村成为附属元素,为媒介景观提供合理侵占乡村真实的手段。文章表明短视频天然的商业属性会使得媒介景观渐渐异化,将会对三农短视频整体生态环境造成消极影响,因此这需要用户根植于社会现实、平台不断完善监管、政府则加强宣传引导,只有三方合力纠偏才能促进三农短视频平稳落地,真正成为助力乡村发展的新农具。

关键词：媒介景观抖音三农短视频

共同体语境下易地搬迁多民族互嵌社区构建逻辑研究——以云南省M搬迁安置社区为例

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广西民族大学学报(哲学社会科学版) 2024年第4期 84-95页

作者：郑娜娜叶淑淇南京大学社会学院南京邮电大学社会与人口学院

易地搬迁民族互嵌社区是国家治理的重要单位，也是基层铸牢中华民族共同体意识的重要场域。云南省M搬迁安置社区作为当前全国跨县安置脱贫群众最多的易地搬迁安置社区，含盖汉族、回族、彝族、苗族等19个民族，其在具体实践过程中不断... 详细信息

易地搬迁民族互嵌社区是国家治理的重要单位，也是基层铸牢中华民族共同体意识的重要场域。云南省M搬迁安置社区作为当前全国跨县安置脱贫群众最多的易地搬迁安置社区，含盖汉族、回族、彝族、苗族等19个民族，其在具体实践过程中不断探索着民族互嵌社区治理的内在逻辑与实践模式，并试图建构民族互嵌社区与中华民族共同体建设的联结路径。在易地搬迁安置社区中，民族互嵌与中华民族共同体建设具有紧密的联结逻辑，各民族搬迁群众在空间互嵌、经济互嵌、文化互嵌、心理互嵌、社会关系互嵌的过程中不断构筑着生活共同体、利益共同体、精神共同体、治理共同体和情感共同体。易地搬迁安置社区通过培育社区共同体意识，最终在各民族全方位互嵌中推进中华民族共同体的多维建设，以民族团结进步助力实现各民族共同富裕。

关键词：易地搬迁民族互嵌社区治理铸牢中华民族共同体意识

整合性神经肌肉训练对9-11岁女生恰恰舞技术质量的影响研究

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整合性神经肌肉训练对9-11岁女生恰恰舞技术质量的影响研究

作者：祁娜娜广州体育学院

学位级别：硕士

数字普惠金融与区域经济韧性——基于创新创业水平的中介效应检验

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商业经济研究 2024年第2期 189-192页

作者：黄娜娜广西师范大学创新创业学院广西桂林541004

本文基于2012-2022年数字普惠金融指数与区域经济韧性指数的面板数据,构建多元回归模型,对数字普惠金融对区域经济韧性的影响进行实证检验。实证分析结果表明,数字普惠金融对区域经济韧性发展具有显著正向促进影响,并且创新创业水平在... 详细信息

本文基于2012-2022年数字普惠金融指数与区域经济韧性指数的面板数据,构建多元回归模型,对数字普惠金融对区域经济韧性的影响进行实证检验。实证分析结果表明,数字普惠金融对区域经济韧性发展具有显著正向促进影响,并且创新创业水平在影响过程中发挥中介作用。按照地理位置进行异质性分析结果显示,中部地区数字普惠金融对区域经济韧性的影响比东部地区更为显著,并且西部地区模型与其他两个地区相比影响效果较弱。本文结合现阶段数字普惠金融与区域经济韧性的研究成果提出建议,为区域经济未来的长远发展提供参考依据。

关键词：数字普惠金融区域经济韧性创新创业水平中介效应