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使用活化诱导标记法评价HIV-1感染者特异性CD4^(+)T细胞免疫应答的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第1期42卷 23-30页

作者：王倩莹王甜甜王硕彭虹洪坤学邵一鸣李丹中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京102206 泰安市妇幼保健院儿内科泰安271000

目的:建立一种检测HIV-1特异性CD4^(+)T细胞亚群功能的活化诱导标记法(activation-induced markers,AIM),从而更有效地评价HIV-1抗原特异性CD4^(+)T细胞免疫应答水平。方法:选取12例未经抗病毒治疗的HIV-1慢性感染者及6例未感染HIV-1的... 详细信息

目的:建立一种检测HIV-1特异性CD4^(+)T细胞亚群功能的活化诱导标记法(activation-induced markers,AIM),从而更有效地评价HIV-1抗原特异性CD4^(+)T细胞免疫应答水平。方法:选取12例未经抗病毒治疗的HIV-1慢性感染者及6例未感染HIV-1的健康人,分别以基于多色流式细胞术的AIM法和细胞内因子染色法(intracellular cytokine staining,ICS)检测抗原特异性T淋巴细胞功能,并探讨两种方法用于评价HIV-1感染者抗原特异性T细胞免疫应答的能力。结果:AIM法检测HIV-1慢性感染者中HIV-1抗原特异性PD-1^(+)CD25^(+)CD4^(+)T、CD69^(+)CD200^(+)CD4^(+)T、CD69^(+)ICOS^(+)CD4^(+)T细胞阳性的比例为11/12、8/12和7/12,检测CD69^(+)ICOS^(+)CD8^(+)T、CD137^(+)CD69^(+)CD8^(+)T、PD-1^(+)CD25^(+)CD8^(+)、OX40^(+)PD-1^(+)CD8^(+)T细胞阳性的比例为8/12、8/12、7/12、7/12。ICS法检测HIV-1抗原特异性IL-2^(+)CD4^(+)T、IFN-γ^(+)CD4^(+)T、TNF-α^(+)CD4^(+)T细胞阳性的占比为2/12、2/12、0;IFN-γ^(+)CD8^(+)T、TNF-α^(+)CD8^(+)T、IL-2^(+)CD8^(+)T细胞阳性的占比为12/12、10/12、5/12。结论:AIM法在评价CD4^(+)T细胞功能方面更为敏感,可作为ICS法的补充,两种方法联合使用可更全面地评估抗原特异性T淋巴细胞反应。

关键词：流式细胞术活化诱导标记胞内细胞因子染色 CD4^(+)T淋巴细胞

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创新性艾滋病疫苗研究

中华微生物学和免疫学杂志 2013年第1期33卷 19-23页

作者：刘颖洪坤学邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206

人免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）因自然感染无有效保护性免疫和其基因的高变异性，使艾滋病疫苗研制面临着巨大的科学和技术挑战。如何诱导针对HIV感染的保护性免疫应答，特别是广谱性中和抗体和T细胞免疫应答，是... 详细信息

人免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）因自然感染无有效保护性免疫和其基因的高变异性，使艾滋病疫苗研制面临着巨大的科学和技术挑战。如何诱导针对HIV感染的保护性免疫应答，特别是广谱性中和抗体和T细胞免疫应答，是艾滋病疫苗研发需要突破的关键技术。

关键词：艾滋病疫苗保护性免疫应答人免疫缺陷病毒 T细胞免疫应答 HIV感染高变异性自然感染中和抗体

以假病毒为基础的HIV-1中和抗体检测体系的建立以及初步应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第5期28卷 468-472页

作者：种辉辉洪坤学张春涛聂建辉孔维王佑春吉林大学生命科学学院长春130012 中国疾病与预防控制中心性病艾滋病控制中心中国药品生物制品检定所北京100050

目的建立以假病毒为基础的HIV-1中和抗体检测方法，并对其进行初步应用。方法从重组质粒中扩增出gp160基因片段，并克隆到pcDNA3．1质粒上，酶切鉴定得到阳性克隆。将阳性克隆分别和pSG3／Xenv质粒共转染获得假病毒。用假病毒分别检测... 详细信息

目的建立以假病毒为基础的HIV-1中和抗体检测方法，并对其进行初步应用。方法从重组质粒中扩增出gp160基因片段，并克隆到pcDNA3．1质粒上，酶切鉴定得到阳性克隆。将阳性克隆分别和pSG3／Xenv质粒共转染获得假病毒。用假病毒分别检测单克隆抗体和HIV-1抗体阳性血清的中和活性。结果成功地获得了4株假病毒CHB01、CHB02、CHBC03和CHAE04。单克隆抗体4E10可以中和4株假病毒；单克隆抗体2F5不能中和CHBC03假病毒株，但可以中和CHB01、CHB02和CHAE04假病毒株；单克隆抗体IgG1b12可以中和CHBC03、CHB01和CHB02假病毒株，则不能中和CHAE04假病毒株。43份HIV-1抗体阳性血清中针对不同假病毒的中和抗体明显不同。结论所获得的假病毒可以用于中和抗体的检测，但不同假病毒株的中和特性不同。

关键词： HIV-1 中和抗体假病毒

表达HIV-1 gag-polΔ和gp140TM蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及免疫效果研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第2期18卷 150-153页

作者：刘颖吴岚周克明张旭东洪坤学邵一鸣中国疾病预防控制中心性病与艾滋病预防控制中心病毒与免疫室北京100050

目的　构建表达人免疫缺陷病毒Ⅰ型gag polΔ和gp14 0TM基因的非复制型重组腺病毒。方法　首先将HIV 1的gag polΔ和gp14 0TM基因插入穿梭载体 ,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化E coliBJ5 183,获得重组子。转化 2 93细胞后获得重组... 详细信息

目的　构建表达人免疫缺陷病毒Ⅰ型gag polΔ和gp14 0TM基因的非复制型重组腺病毒。方法　首先将HIV 1的gag polΔ和gp14 0TM基因插入穿梭载体 ,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化E coliBJ5 183,获得重组子。转化 2 93细胞后获得重组病毒。重组腺病毒与DNA疫苗联合免疫小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的抗体。结果　获得两株重组腺病毒vAd gag polΔ和vAd gp14 0TM ,能正确表达Gp14 0TM、Gag蛋白以及经剪切加工的P2 4蛋白 ,与DNA疫苗联合免疫小鼠后能产生高滴度的HIV 1特异性的抗体。结论　成功构建了表达HIV 1结构基因的重组腺病毒 ,能有效诱导HIV 1特异性抗体。

关键词：基因表达 HIV-1 gag-polΔ gp140TM蛋白病毒复制缺陷重组腺病毒免疫效果艾滋病基因组转染疫苗

重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒中国株B’亚型Gag蛋白及免疫效果观察

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病毒学报 2002年第1期18卷 9-14页

作者：刘锦彦陶欣洪坤学吴岚刘颖朱家鸿邵一鸣武汉生物制品研究所湖北430060 国家艾滋病参比实验室北京100050

为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因 ,利用痘苗病毒载体构建表达HIV - 1B′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组病毒rVV -RL4 2 gag ,并免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体 ,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B... 详细信息

为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因 ,利用痘苗病毒载体构建表达HIV - 1B′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组病毒rVV -RL4 2 gag ,并免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体 ,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。结果显示 :重组病毒能很好地表达Gag蛋白 ,它具有与 7株单克隆抗体结合的抗体表位 ;电镜下可观察到Gag蛋白形成的颗粒。rVV -RL4 2 gag免疫小鼠后能诱导产生高滴度的特异性抗体和CTL ,抗体具一定的中和活性 ,且检测到与C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。这些结果表明 ,rVV -RL4 2 gag具有良好的免疫原性 ,可进一步构建表达HIVB′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组痘苗病毒作为候选疫苗。

关键词：人免疫缺陷病毒I型 HIV-1 重组痘苗病毒 Gag蛋白细胞毒性T淋巴细胞抗性中和抗性免疫效果

应用PCR-SSP技术对云南拉祜族人HLA-DRB1进行基因分型

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中国医学科学院学报 2002年第4期24卷 389-392页

作者：洪坤学何勤单西云俞建昆林克勤史磊褚嘉佑 National Center for AIDS Prevention and Control beijing100050 The Second Affiliated Hospital Kunming MedicalColledgekunming650118 The Prefecture Hospital of Xishuangbanna jinghong666102 中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所遗传室昆明650118

目的了解云南拉祜族健康人HLA-DRB1基因的遗传多态性。方法应用PCR-SSP技术对110名无亲缘关系的云南拉祜族健康人进行HLA-DRB1基因分型。结果鉴定了拉祜族群体HLA-DRB1位点的16种等位基因,包括DRB1位点目前已知的全部血清学特异性,经检... 详细信息

目的了解云南拉祜族健康人HLA-DRB1基因的遗传多态性。方法应用PCR-SSP技术对110名无亲缘关系的云南拉祜族健康人进行HLA-DRB1基因分型。结果鉴定了拉祜族群体HLA-DRB1位点的16种等位基因,包括DRB1位点目前已知的全部血清学特异性,经检验DRB1位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.75)。结论提供了一套比较完整准确的云南拉祜族群体DRB1等位基因的基因频率,对群体遗传和疾病关联研究具有参考意义。

关键词： PCR-SSP技术云南拉祜族人 HLA-DRB1 基因分型群体遗传学

使用多重巢式PCR对我国HIV-1主要流行株亚型鉴定方法的建立

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第1期18卷 83-87页

作者：魏民梁浩陈健平陈钊关琪邢辉冯毅洪坤学邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒免疫室北京100050 广西医科大学公共卫生学院流行病教研室沈阳医学院附属中心医院

目的　建立一套新的亚型鉴定方法 ,仅仅使用巢式PCR ,一次扩增 ,即可对我国HIV 1主要流行株B、C和CRF0 1 AE进行亚型鉴定。方法　从HIV阳性样本中提取核酸 ,使用能覆盖HIV 1型M组gag区的引物进行第一轮扩增 ,第二轮扩增则使用分别检测... 详细信息

目的　建立一套新的亚型鉴定方法 ,仅仅使用巢式PCR ,一次扩增 ,即可对我国HIV 1主要流行株B、C和CRF0 1 AE进行亚型鉴定。方法　从HIV阳性样本中提取核酸 ,使用能覆盖HIV 1型M组gag区的引物进行第一轮扩增 ,第二轮扩增则使用分别检测B、C、CRF0 1 AE亚型的三套特异性引物进行扩增 ,三套引物放在同一个反应管中。反应产物经琼脂糖电泳后观察 ,不同亚型的位置不同 ,以此来判断亚型。另外设计一套引物 ,专门检测我国重组株CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。所有样品均经过基因测序、系统进化树分析 ,以进行结果验证。结果　在检测的 119份样品中 ,经基因测序和系统进化树分析证实B亚型样品 4 3份 (欧美B 11份 ,泰国B 32份 ) ,C、CRF0 1 AE、A和D亚型样品分别为 5 4份、17份、3份和 2份。其中C亚型的样品 ,有 5 2份属于CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。而经过上述多重巢式PCR方法检测到的B亚型样品为 35份 (81 4 % ) ,C亚型 4 6份 (85 2 % )和CRF0 1 AE 13份(76 5 % )。另外 ,检测CRF0 7 BC和CRF0 8 BC重组株的引物特异性地检测到 4 3份 (82 7% )样品。上述结果与基因分析结果吻合 ,各个亚型之间无交叉 ,一种亚型的特异性引物只对该亚型有反应 ,而对其他亚型无反应 ,特异性达到 10 0 %。虽然有时会有非特异扩增带。

关键词：多重巢式PCR 中国 HIV-1 亚型鉴定艾滋病毒

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云南汉族和傣族中G6PD基因突变的检测

云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 337-338页

作者：杨昭庆褚嘉佑许绍斌洪坤学卫灿东中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650107

HIV-1广谱中和抗体分离鉴定和中和表位特异性研究进展

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中华实验和临床病毒学杂志 2021年第2期35卷 224-228页

作者：汪立杰马丽英洪坤学中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京102206

HIV/AIDS在世界上广泛流行,抗逆转录病毒药物尚无法彻底根除HIV感染,开发新的治疗和预防方法仍然至关重要。不断分离到的广谱中和抗体(bnAb),在抗HIV-1感染和治疗方面的应用日益突出,也为新疫苗的设计带来曙光。本文对近年来bnAb的分离... 详细信息

HIV/AIDS在世界上广泛流行,抗逆转录病毒药物尚无法彻底根除HIV感染,开发新的治疗和预防方法仍然至关重要。不断分离到的广谱中和抗体(bnAb),在抗HIV-1感染和治疗方面的应用日益突出,也为新疫苗的设计带来曙光。本文对近年来bnAb的分离鉴定的技术及中和表位特征研究进展进行简要综述。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 单克隆抗体中和表位