使用多重巢式PCR对我国HIV-1主要流行株亚型鉴定方法的建立

作     者：魏民 梁浩 陈健平 陈钊 关琪 邢辉 冯毅 洪坤学 邵一鸣 

作者机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒免疫室北京100050 广西医科大学公共卫生学院流行病教研室 沈阳医学院附属中心医院 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2004年第18卷第1期

页      面：83-87页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家杰出青年资金项目 (3 992 5 0 3 0 ) 九七三国家重点基础研究项目资助 (G19990 5 410 7) 

主　　题：多重巢式PCR 中国 HIV-1 亚型 鉴定 艾滋病毒 

摘      要：目的 建立一套新的亚型鉴定方法 ,仅仅使用巢式PCR ,一次扩增 ,即可对我国HIV 1主要流行株B、C和CRF0 1 AE进行亚型鉴定。方法 从HIV阳性样本中提取核酸 ,使用能覆盖HIV 1型M组gag区的引物进行第一轮扩增 ,第二轮扩增则使用分别检测B、C、CRF0 1 AE亚型的三套特异性引物进行扩增 ,三套引物放在同一个反应管中。反应产物经琼脂糖电泳后观察 ,不同亚型的位置不同 ,以此来判断亚型。另外设计一套引物 ,专门检测我国重组株CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。所有样品均经过基因测序、系统进化树分析 ,以进行结果验证。结果 在检测的 119份样品中 ,经基因测序和系统进化树分析证实B亚型样品 4 3份 (欧美B 11份 ,泰国B 32份 ) ,C、CRF0 1 AE、A和D亚型样品分别为 5 4份、17份、3份和 2份。其中C亚型的样品 ,有 5 2份属于CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。而经过上述多重巢式PCR方法检测到的B亚型样品为 35份 (81 4 % ) ,C亚型 4 6份 (85 2 % )和CRF0 1 AE 13份(76 5 % )。另外 ,检测CRF0 7 BC和CRF0 8 BC重组株的引物特异性地检测到 4 3份 (82 7% )样品。上述结果与基因分析结果吻合 ,各个亚型之间无交叉 ,一种亚型的特异性引物只对该亚型有反应 ,而对其他亚型无反应 ,特异性达到 10 0 %。虽然有时会有非特异扩增带 。