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不同碳氮比对中华草龟养殖水体生物絮团形成、水质及菌群结构的影响

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南方水产科学 2022年第4期18卷 87-94页

作者：张凯林怡静厉晨阳刘芳玲沈铭浩郑善坚浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省野生动物生物技术与保护利用重点实验室浙江金华321004

为探讨生物絮团技术应用于龟鳖类养殖中的可行性,并确定其最佳添加量,通过调控中华草龟(Chinemys reevesii)养殖水体中的碳氮比(质量比),分析生物絮团形成及其对水质和菌落的影响。实验以添加蔗糖设计碳氮比为10∶1(CN-10)、15∶1(CN-15... 详细信息

为探讨生物絮团技术应用于龟鳖类养殖中的可行性,并确定其最佳添加量,通过调控中华草龟(Chinemys reevesii)养殖水体中的碳氮比(质量比),分析生物絮团形成及其对水质和菌落的影响。实验以添加蔗糖设计碳氮比为10∶1(CN-10)、15∶1(CN-15)、20∶1(CN-20)的实验组和对照组(CG),进行为期40 d的养殖。结果显示,各组生物絮团体积指数(FVI)随碳氮比的增加而增大,在28 d后趋于稳定;碳氮比≥10时氨氮和亚硝酸盐处理效果显著,其中CN-15组40 d后氨氮和亚硝酸盐的去除率分别为76.7%和64.4%。碳氮比为15∶1时能促进龟池生物絮团的形成,并可有效降低水中氨氮、亚硝酸盐水平。对实验组(CN-15)与对照组的生物絮团进行高通量测序,发现2种水体中生物絮团的优势菌门均为变形菌门、拟杆菌门、放线菌门,但各优势菌门占比有所差异。研究表明,添加不同碳氮比可影响中华草龟养殖水体生物絮团的形成、水质和菌群结构。碳氮比为15∶1是形成生物絮团的最适比例,在促进生物絮团形成的同时,对水质也具有较强的调节能力。

关键词：中华草龟生物絮团水质指标高通量测序

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罗氏沼虾温棚水质调控试验

科学养鱼 2019年第7期41卷 26-27页

作者：郑善坚李明沈铭浩徐勇斌浙江师范大学野生动物生物技术与保护利用重点实验室浙江金华321004 金华市水产技术推广站浙江金华321000

罗氏沼虾具有生长快、食性广、肉质营养高以及养殖周期短等优点,是我国优质淡水虾,年产量在15万~20万吨。经过30多年的发展,罗氏沼虾的两段式养殖模式非常成功,即早期低温时在温室大棚培育幼虾.

关键词：罗氏沼虾水质管理亚硝酸盐水质调控

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中华绒螯蟹新品种种质创制的研究进展

水产科学 2023年第4期42卷 742-746页

作者：邢秀梅沈铭浩李杰宁先会张凯尹绍武南京师范大学海洋科学与工程学院江苏省特色水产育种与绿色高效养殖技术工程研究中心江苏南京210023 南京市高淳区青松水产专业合作社江苏南京211300

中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis),属节肢动物门甲壳纲十足目方蟹科绒螯蟹属,又名河蟹、大闸蟹[1]。中华绒螯蟹因含有矿物质元素、脂肪酸、氨基酸、核苷酸和胆固醇等多类营养物质而深受长江流域居民喜爱,其肌肉中蛋白质品质高且肌苷酸的... 详细信息

中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis),属节肢动物门甲壳纲十足目方蟹科绒螯蟹属,又名河蟹、大闸蟹[1]。中华绒螯蟹因含有矿物质元素、脂肪酸、氨基酸、核苷酸和胆固醇等多类营养物质而深受长江流域居民喜爱,其肌肉中蛋白质品质高且肌苷酸的含量丰富,雄蟹性腺中更是包含25种脂肪酸[2]。近年来,我国中华绒螯蟹的种业保护措施较薄弱,加上无序引种和苗种盲目放流,导致种质混杂和退化,严重制约了该产业的绿色发展[3-4]。国外水产选育多以种业企业为主体,投入大、效果显著;国内则以科研单位为主,这样会造成产业集中度低、良种化水平和覆盖率均较低、苗种质量不稳定等一系列问题[5]。

关键词：中华绒螯蟹育种方法种质创制研究进展

HIV感染合并肺部感染患者 CD3+CD4+-T细胞表达的研究

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中华医院感染学杂志 2019年第20期29卷 3091-3095,3100页

作者：陈龙达徐勋翁丹丹褚娟芬沈铭浩余姚市市人民医院感染科

目的探讨α干扰素(Interferon-α,IFN-α)、干扰素诱导基因56(Interferon-stimulated gene 56,ISG56)、粘病毒抵抗蛋白A(Myxovirus resistance protein A,MxA)、免疫调控受体程序性死亡分子1(Programmed death-1,PD-1)和T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT)对人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)合并肺部感染患者CD3^+CD4^+-T细胞表达的影响。方法选取2016年12月-2017年12月于余姚市市人民医院就诊的52例HIV合并肺部感染患者作为研究组进行研究,另选择同期48例HIV未合并肺部感染患者作为对照组,检测患者外周血CD3^+CD4^+-T细胞表面的IFN-α、ISG56、MxA、PD-1和TIGIT指标水平情况。结果研究组CD3^+CD4^+-T细胞比例高于对照组(P<0.05);研究组IFN-α、ISG56、MxA分别为(15.82±5.31)、(0.74±0.22)、(0.83±0.14)pg/ml低于对照组(P<0.001);研究组TIGIT和PD-1的CD3^+CD4^+-T细胞分别为(23.61±12.83)%、(51.32±13.74)%高于对照组(P<0.05);研究组TIGIT CD3^+CD4^+-T细胞表面百分数与CD4+-T细胞绝对数呈负相关(P=0.027);与病毒载量呈正相关(P=0.001);研究组PD-1CD3^+CD4^+-T细胞表面百分数与CD4+-T细胞绝对数呈负相关(P=0.026);与病毒载量无相关性(P=0.711)。结论HIV合并肺部感染患者,CD3^+CD4^+-T细胞占比上升,IFN-α、ISG56、MxA降低,TIGIT和PD-1升高,相关指标变化证明当受到感染时机体免疫功能会发生紊乱,且与HIV疾病进展具有一定程度的相关性,具有一定的临床价值。

关键词： α干扰素干扰素诱导基因56 粘病毒抵抗蛋白A 免疫调控受体程序性死亡分子1 T细胞免疫球蛋及免疫酪氨酸样抑制基序人类免疫缺陷病毒 CD3^+CD4^+-T细胞

宽鳍鱲胰岛素样生长因子-Ⅰ的克隆及繁殖期前后表达分析

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水生生物学报 2020年第6期44卷 1182-1190页

作者：沈铭浩朱迦玥吴涛任天惠张哲盼熊黎刘芳玲郑善坚浙江师范大学生化学院金华321004 浙江师范大学野生动物生物技术与保护利用浙江省重点实验室金华321004

为探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对宽鳍鱲(Zacco platypus)繁殖期前后生长性状的影响,开展了宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因序列的克隆及表达定位分析。宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因全长13707 bp,包含5个外显子、4个内含子,其... 详细信息

为探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)对宽鳍鱲(Zacco platypus)繁殖期前后生长性状的影响,开展了宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因序列的克隆及表达定位分析。宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因全长13707 bp,包含5个外显子、4个内含子,其中5个外显子长度分别为222、160、182、36和829 bp;内含子长度分别为1194、7771、254和1879 bp,推测开放阅读框为486 bp,编码161个氨基酸。实时荧光定量PCR(Real-time qPCR,RT-qPCR)结果显示,宽鳍鱲IGF-ⅠmRNA在肝脏组织中的表达水平最高,其次是性腺、脾脏、心脏和脑,在肾脏中表达水平最低。在7—8月,处于繁殖期的性成熟宽鳍鱲性腺中IGF-Ⅰ表达水平显著上升,繁殖期过后回落至最低值。在其他组织中IGF-Ⅰ表达水平在生长发育过程和繁殖期前后波动不大,且雄鱼大多数组织中IGF-Ⅰ基因平均表达水平高于雌鱼。荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)定位显示,宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因基本为胞浆阳性,少数为核阳性,在肝组织中呈全胞质性分布,在性腺组织的精母细胞、卵泡膜及卵泡液中阳性表达。上述结果表明宽鳍鱲IGF-Ⅰ基因表达模式具有性别差异性,推测精巢中IGF-Ⅰ在繁殖期的高表达是宽鳍鱲雄性成体大于雌性成体的原因之一。研究结果为宽鳍鱲的性二态和人工繁育的研究提供参考资料。

关键词：宽鳍鱲胰岛素样生长因子-Ⅰ 克隆序列分析表达模式

低氧胁迫和恢复对杂交黄颡鱼“黄优1号”肠道组织的影响

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水生生物学报 2022年第11期46卷 1598-1608页

作者：程景颢李谣沈铭浩杨智茹张伟健张凯王涛张国松尹绍武南京师范大学海洋科学与工程学院江苏省特色水产育种与绿色高效养殖技术工程研究中心南京210023 菏泽学院山东省“十三五”高校生理生化及应用重点实验室菏泽274015

为探究低氧胁迫和恢复对杂交黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)“黄优1号”肠道组织的影响,研究运用酶活测定、HE染色、qRT-PCR、TUNEL检测及16S rRNA测序技术等方法,分析低氧胁迫[(1.0±0.1)mg/L]和恢复下[(7.0±0.5)mg/L]该鱼肠道氧化... 详细信息

为探究低氧胁迫和恢复对杂交黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)“黄优1号”肠道组织的影响,研究运用酶活测定、HE染色、qRT-PCR、TUNEL检测及16S rRNA测序技术等方法,分析低氧胁迫[(1.0±0.1)mg/L]和恢复下[(7.0±0.5)mg/L]该鱼肠道氧化应激指标、组织结构形态、细胞凋亡及微生物组成变化。结果显示:(1)在低氧胁迫下肠道中抗氧化酶活性(SOD、CAT、GSH-Px)、能量代谢酶活性(LDH)、丙二醛(MDA)和脂质过氧化物(LPO)含量显著升高,恢复溶氧后氧化应激反应也比较剧烈。(2)低氧胁迫阶段,肠道组织受损现象逐渐加剧,杯状细胞肿胀、黏膜层被侵蚀,恢复溶氧24h后,缺氧引起的生理变化并未得到明显改善。(3)肠道组织细胞凋亡程度随着低氧时间的延长而加剧,凋亡相关基因(bax、caspase9和p53)的表达量显著升高,bcl-2基因的表达量则减少。(4)低氧胁迫阶段肠道微生物相对丰度降低,低氧胁迫72h的处理组中以厚壁菌门(Firmicutes)(47.8%)和拟杆菌门(Bacteroidetes)(40.6%)的丰度最为优势,恢复溶氧后肠道菌群数量有所增加;KEGG功能预测显示,多数肠道微生物与代谢通路相关。研究结果可为解析低氧和恢复下杂交黄颡鱼“黄优1号”肠道组织内环境稳态调控机制提供理论依据。

关键词：低氧肠道氧化应激细胞凋亡微生物组成杂交黄颡鱼“黄优1号”

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光倒刺鲃皮肤粘液对多子小瓜虫的抑制作用及其机理

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光倒刺鲃皮肤粘液对多子小瓜虫的抑制作用及其机理

养殖鲢鱼维罗纳气单胞菌的分离、鉴定和致病性研究

浙江省动物学会第十三次会员代表大会暨学术研讨会

作者：胡霭臻沈铭浩林宇郑善坚郑荣泉浙江师范大学野生动物保护与利用技术中心浙江师范大学野生动物生物技术与保护利用浙江省重点实验室浙江师范大学生化学院

对不易感染多子小瓜虫的光倒刺鲃、健康草鱼和患病草鱼的体表粘液酶活性、粘液浓度、氨基酸组分、蛋白表达量进行研究。发现健康草鱼体表粘液的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性均为最高,光倒刺鲃均为最低,发病草鱼介于两者中间。AKP和ACP在... 详细信息

对不易感染多子小瓜虫的光倒刺鲃、健康草鱼和患病草鱼的体表粘液酶活性、粘液浓度、氨基酸组分、蛋白表达量进行研究。发现健康草鱼体表粘液的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性均为最高,光倒刺鲃均为最低,发病草鱼介于两者中间。AKP和ACP在蛋白酶的去磷化过程中起着非常重要的作用,他们不仅参与一些营养物质的消化吸收和运输,还是生物体内解毒系统的重要组成部分。经SPSS分析,健康草鱼与发病草鱼的酸性磷酸酶活性差异不显著,其余五对指标均有显著差异。发病草鱼体表粘液浓度低于健康草鱼,光倒刺鲃体表粘液浓度低于健康草鱼。18种酸水解氨基酸组分含量测定结果表明:发病草鱼的谷氨酸、赖氨酸、组氨酸含量升高,甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸含量降低,光倒刺鲃与健康草鱼无明显差异。发病草鱼感染小瓜虫后皮肤溃烂,大量病菌突破第一道防线感染鱼体,谷氨酸,组氨酸含量增加以应对威胁。36种游离氨基酸组分含量测定结果表明:发病草鱼的牛磺酸、酪氨酸含量升高,尿素、磷乙醇胺、丝氨酸含量降低,光倒刺鲃与健康草鱼相比尿素、磷乙醇胺含量低,牛磺酸、谷氨酸含量高。牛磺酸对内脏有保护功能,谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中参与许多重要化学反应。这两种氨基酸对多子小瓜虫病可能有直接或间接的抑制作用。SDS-PAGE结果表明在70KD和25KD处光倒刺鲃蛋白表达量明显高于健康草鱼。

关键词：光倒刺鳃皮肤粘液多子小瓜虫抑制作用

来源： cnki会议评论

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养殖鲢鱼维罗纳气单胞菌的分离、鉴定和致病性研究

重组酶介导链替换核酸扩增技术在棘胸蛙虹彩病毒快速检测中的应用

2018年（第十三届）浙江渔业科技论坛

作者：沈铭浩吴涛任天惠周颖胡霭臻郑善坚浙江师范大学野生动物保护与利用技术中心浙江师范大学野生动物生物技术与保护利用浙江省重点实验室浙江师范大学生化学院

2018年7月金华某养殖场中鲢鱼出现大量发病,病鱼表现为体表溃烂,肛门红肿,解剖死亡个体肠道发红充血,肝、脾、肾严重溃烂。用营养琼脂从病鱼分离到菌株JH0728:革兰氏阴性短杆菌,无荚膜、无芽胞、具极生鞭毛。对JH0728进行16S rRNA基因... 详细信息

2018年7月金华某养殖场中鲢鱼出现大量发病,病鱼表现为体表溃烂,肛门红肿,解剖死亡个体肠道发红充血,肝、脾、肾严重溃烂。用营养琼脂从病鱼分离到菌株JH0728:革兰氏阴性短杆菌,无荚膜、无芽胞、具极生鞭毛。对JH0728进行16S rRNA基因分析及系统进化树构建,发现与其序列同源性较高的前10为菌株均为维罗纳气单胞菌(Aeromonas veronii),同源性在99%以上。VITEK32鉴定为维罗纳气单胞菌,确认JH0728为维罗纳气单胞菌。采用健康鲢鱼分析了JH0728的致病力,表明JH0728腹腔注射可使健康鲢鱼发病死亡,死亡鲢鱼可出现自然发病症状,半致死浓度(LD50)为4.36×10CFU/ml。本试验分离的维罗纳气单胞菌对小鼠有致病性,能引起小鼠发病并部分死亡。上述结果表明维罗纳气单胞菌对鲢鱼有很强毒力。综合以上试验结果,确定维罗纳气单胞菌是引起本次金华鲢鱼暴发性疾病的病原。分离菌对恩诺沙星、庆大霉素、链霉素、氟苯尼考、卡那霉素、阿奇霉素、强力霉素敏感,对头孢拉定、四环素、土霉素、红霉素、利福平、青霉素耐药。

关键词：鲢鱼维罗纳气单胞菌鉴定致病性

来源： cnki会议评论

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重组酶介导链替换核酸扩增技术在棘胸蛙虹彩病毒快速检测中的应用