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锯缘青蟹精氨酸激酶的分离纯化、分子克隆及过敏原性研究

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锯缘青蟹精氨酸激酶的分离纯化、分子克隆及过敏原性研究

作者：沈苑集美大学

学位级别：硕士

食物过敏是人类常见的一种免疫性疾病,随着社会进步和全球化进程的不断发展,食物过敏的发病率越来越高,成为全球关注的食品安全问题。食物过敏主要由食物中蛋白质引起,主要症状有哮喘、荨麻疹等,严重的甚至会危及到生命。水产品是最常... 详细信息

食物过敏是人类常见的一种免疫性疾病,随着社会进步和全球化进程的不断发展,食物过敏的发病率越来越高,成为全球关注的食品安全问题。食物过敏主要由食物中蛋白质引起,主要症状有哮喘、荨麻疹等,严重的甚至会危及到生命。水产品是最常见的过敏食物,水产食品中原肌球蛋白、小清蛋白等作为主要过敏原已得到国内外学者的广泛研究,而对于精氨酸激酶(Arginine Kinase,AK)是否为过敏原,其理化特性及致敏性如何,仍有待于进一步的研究证实。锯缘青蟹(Scylla serrata)肉质鲜美,营养丰富,是我国蟹类增养殖的重要对象,深受我国消费者喜爱,同时其远销日本、东南亚等国家,也是全球的主要经济蟹类。本研究以国内产量丰富的锯缘青蟹为研究对象,从分离纯化、抗体制备、分子克隆、原核表达、过敏原性等方面对精氨酸激酶进行了研究。首先采用70-90 %硫酸铵沉淀及HiTrap Q亲和层析方法,从锯缘青蟹肌浆蛋白中分离得到分子量为40 kDa的天然蛋白(nAK),SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)及2D-PAGE(Two dimensional-PAGE,2D-PAGE)分析结果显示该蛋白的分子量为40 kDa、等电点为6.5,这与虾类精氨酸激酶Pen m 2性质相近。兔抗白虾精氨酸激酶IgG抗体及兔抗锯缘青蟹精氨酸激酶IgG抗体的Western-blot结果表明纯化的锯缘青蟹40kDa蛋白为精氨酸激酶。通过分子生物学技术方法,克隆得到锯缘青蟹精氨酸激酶开放阅读框基因序列。测序结果显示,该开放阅读框基因的序列长度为1071 bp,编码356个氨基酸残基,该序列登录Genbank(GQ:851626)。序列比对结果显示,锯缘青蟹精氨酸激酶基因与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)精氨酸激酶基因的序列同源性高达94 %,与岸蟹(Carcinus maenas)、中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)等甲壳类动物的精氨酸激酶也有较高的同源性(均>90 %)。将克隆得到的锯缘青蟹精氨酸激酶基因与pGEX-4T-3载体连接,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导得到分子量为65 kDa的融合表达蛋白(GST-AK)。2D-PAGE分析显示,经凝血酶酶切后的重组蛋白(rAK)分子量为40 kDa、等电点为6.3,与天然的精氨酸激酶相近。精氨酸激酶的体外重组表达成功,也为今后蟹类过敏原的标准化生产提供了技术基础。进一步通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI TOF-MS)进行肽指纹图谱鉴定,并对鉴定的结果采用Mascot搜索引擎在NCBInr数据库上进行搜索,结果表明纯化的天然蛋白(nAK)与榄绿青蟹(Scylla olivacea)精氨酸激酶匹配分值最高为138,吻合肽段数为为17条,融合表达蛋白(GST-AK)与中国明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的精氨酸激酶匹配分值最高为80,吻合肽段数为为12条,确认纯化的天然蛋白及融合表达的重组蛋白均为精氨酸激酶。应用甲壳类过敏患者血清的免疫印迹分析,结果显示纯化的天然蛋白及融合表达的重组蛋白具有免疫原性,首次证实精氨酸激酶为锯缘青蟹的特异性过敏原。应用体外重组表达融合蛋白的胶体金免疫试纸条分析,结果表明该融合蛋白可用于甲壳类食物过敏诊断试剂的开发与应用。

关键词：锯缘青蟹精氨酸激酶过敏原纯化克隆表达双向电泳质谱分析免疫胶体金层析

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人工智能教育应用的价值敏感设计

电化教育研究 2023年第7期44卷 44-50,74页

作者：沈苑汪琼北京大学教育学院北京100871

人工智能教育应用的伦理风险可能成为阻滞其发展的重要影响因素。文章从伦理价值角度出发,分析了人工智能应用于教育中会出现的典型伦理困境以及教育环境中处理伦理问题的特殊性,建议采用价值敏感设计作为突破上述困境的方案。在面临准... 详细信息

人工智能教育应用的伦理风险可能成为阻滞其发展的重要影响因素。文章从伦理价值角度出发,分析了人工智能应用于教育中会出现的典型伦理困境以及教育环境中处理伦理问题的特殊性,建议采用价值敏感设计作为突破上述困境的方案。在面临准确与透明、隐私与效用、自主与效率、个性与交流等价值冲突造成的伦理困境时,传统的伦理解决方案会在教育环境下面临多重挑战,价值敏感设计作为一种将伦理考量嵌入技术设计的高效方法,坚持人与技术动态交互,要求技术设计彰显利益相关者的价值,采用三方方法论在技术设计前期规避潜在的伦理风险,能够有效推动可信赖的人工智能在教育中的发展。在对人工智能教育应用开展价值敏感设计的过程中,研究者需持中立、开放、敏感的态度,在保持对价值敏感的前提下灵活地选择研究方案,将价值敏感设计扩展到人工智能的全生命周期。

关键词：价值敏感设计人工智能教育应用伦理困境价值冲突

生成式人工智能支持教学决策的实践困境与关键进路

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电化教育研究 2024年第11期45卷 92-99页

作者：沈苑汪琼之江实验室数据枢纽与安全研究中心浙江杭州311121 北京大学教育学院北京100871

教学决策具备较强的道德属性,强调向善性和利他性。随着生成式人工智能被应用于教学,其强大的学习、理解和生成能力使之承担起大量非程序化决策任务。这也引发了关键问题:生成式人工智能是否具备支持教学决策的基本能力?未来的教育会受... 详细信息

教学决策具备较强的道德属性,强调向善性和利他性。随着生成式人工智能被应用于教学,其强大的学习、理解和生成能力使之承担起大量非程序化决策任务。这也引发了关键问题:生成式人工智能是否具备支持教学决策的基本能力?未来的教育会受到什么样的影响?文章通过回顾社会学、心理学、教育学、机器道德领域的既往研究,发现生成式人工智能的介入推动了教学决策从经验主义向人机协作模式的转变,同时揭示出其自主性提升过程中伴随着道德敏感性的不稳定。这可能引发人机间的误会、欺骗、责任推卸等风险,并潜移默化地改变教育场景中的道德图景。为应对这些挑战,文章提出注入具备情境适应性的机器美德、构建教学决策专用的提示词与智能体以及推动前瞻性社会实验等策略,以促进道德机器在教育领域的建设。

关键词：生成式人工智能教学决策道德机器智能教育人机协同

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S公司口服美容功能性食品营销策略研究

S公司口服美容功能性食品营销策略研究

作者：沈苑上海外国语大学

学位级别：硕士

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小学创客教学中交流活动设计与应用研究

小学创客教学中交流活动设计与应用研究

作者：沈苑鲁东大学

学位级别：硕士

近年来,在我国“大众创业、万众创新”的大背景下,教育部相继出台了一系列创客教育的相关政策,各地的中小学积极开展创客教育,创客教育的发展势如破竹。同时,在全球化、信息化的时代背景下,沟通素养越来越成为衡量现代人才的一个重要标... 详细信息

近年来,在我国“大众创业、万众创新”的大背景下,教育部相继出台了一系列创客教育的相关政策,各地的中小学积极开展创客教育,创客教育的发展势如破竹。同时,在全球化、信息化的时代背景下,沟通素养越来越成为衡量现代人才的一个重要标准,成为了21世纪人才必备的核心素养之一。创客教育强调“造物”和“分享”,分享离不开沟通,沟通离不开交流活动。交流活动是创客教学不可或缺的一个重要组成部分,但从目前的创客教育情况来看,小学创客教学中的交流活动流于形式,这实际上违背了创客教育的本质,导致创客教学的效果并不理想。由此,本研究基于沟通素养设计小学创客教学交流活动和策略,以期提高创客教学效果。本文在梳理了创客教育、课堂交流活动两方面的相关文献后发现,大部分的研究者关注创客教育本质、创客教育发展、创客课程设计及创客教育的模式和方法等方面,较少涉及具体的创客教育应用实践,而专门针对小学创客教学中交流活动的研究少之又少。因此,本研究通过调查法,分析目前小学创客教学交流活动存在的问题、产生的原因以及影响因素,并基于沟通素养设计小学创客教学交流活动及其支持策略,然后通过三轮行动研究完善设计的交流活动和策略。研究者在第一轮严格按照设计的活动和策略开展教学实践,在观察者观察的基础上,研究者反思其中出现的问题;然后开展第二轮行动研究,针对第一轮行动研究中暴露出的问题对设计的交流活动和策略加以优化、改进,并通过第二轮教学实践的实施、观察、反思,验证策略的可操作性和有效性;之后,研究者在前两轮研究结果的基础上,完善、定型基于沟通素养的小学创客教学交流活动及促进交流活动更好实施的支持策略。最后,通过准实验研究来验证设计的小学创客教学交流活动和策略的应用效果。通过研究,研究者得出以下结论:第一,设计了基于沟通素养的小学创客教学交流活动;第二,构建了基于沟通素养的小学创客教学交流活动的支持策略,有助于交流活动的顺利开展;第三,在教学实践中应用基于沟通素养的小学创客教学交流活动及策略,并取得良好效果,该活动和策略的有效性得到验证。

关键词：创客教育沟通素养交流活动教学支持策略

人工智能在教育中应用的伦理考量——从教育视角解读欧盟《可信赖的人工智能伦理准则》

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北京大学教育评论 2019年第4期17卷 18-34,184页

作者：沈苑汪琼北京大学教育学院

随着人工智能教育产品日渐普及,教育领域所面临的伦理挑战不容忽视。欧盟于2019年4月出台的《可信赖的人工智能伦理准则》阐释了可信赖的人工智能伦理框架及建议的实现路径。基于此文件提出的伦理框架维度,结合AI教育应用已出现的伦理... 详细信息

随着人工智能教育产品日渐普及,教育领域所面临的伦理挑战不容忽视。欧盟于2019年4月出台的《可信赖的人工智能伦理准则》阐释了可信赖的人工智能伦理框架及建议的实现路径。基于此文件提出的伦理框架维度,结合AI教育应用已出现的伦理争议案例及相关研究发现,本文从"人的能动性与监督""技术稳健性与安全性""隐私与数据管理""社会与环境福祉""多样性、非歧视性与公平性""透明性"和"问责制度"这七方面分析了面对AI教育应用伦理困境时可采用的防范对策,如伦理嵌入设计、包容性测试等技术手段和建立多层责任分配制度、完善认证系统等非技术手段,为智能教育产品从开发、部署到使用全过程做到"可信赖"提供了参考。

关键词：人工智能教育伦理智能教育产品

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人工智能教育应用的偏见风险分析与治理

电化教育研究 2021年第8期42卷 12-18页

作者：沈苑汪琼北京大学教育学院北京100871

在倡导教育包容与公平的时代背景下,教育面临着以个性化、自适应为特征的智能技术所带来的偏见风险。在智能教育产品的研发过程中,潜在的设计偏见、数据偏见和算法偏见会使教育领域面临多重风险,如教育活动的公平性受阻、教育系统内部... 详细信息

在倡导教育包容与公平的时代背景下,教育面临着以个性化、自适应为特征的智能技术所带来的偏见风险。在智能教育产品的研发过程中,潜在的设计偏见、数据偏见和算法偏见会使教育领域面临多重风险,如教育活动的公平性受阻、教育系统内部的歧视加剧、教育中的多元化特质消解和学生思想窄化。学校、科技公司、监管机构等组织应当携手共进,提前侦测偏见风险并加强治理,包括:提升研发团队的教育理解和多元眼光,让师生成为产品的合作创造者,加强偏见检测和道德评估过程,建立可解释、可审查、可纠正的系统优化机制,开展面向师生的人工智能素养教育,确立人工智能在教育中的应用范围和伦理规范,从而争取实现人机良性互动,打造多元包容的智能教育环境。

关键词：人工智能教育应用人工智能伦理教育包容算法偏见数据偏见

小学体验式德育活动的设计与实施研究 ——以上海市L小学为例

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小学体验式德育活动的设计与实施研究 ——以上海市L小学为例

作者：沈苑上海师范大学

学位级别：硕士

立德树人是教育的根本任务,学校德育活动是落实立德树人根本任务的重要载体。尽管德育活动历经多次改革,逐步走向科学化和生活化,但仍存在忽视学生主体需求、活动目标模糊、活动内容空洞、活动形式单一等问题。体验式德育作为新时期学... 详细信息

立德树人是教育的根本任务,学校德育活动是落实立德树人根本任务的重要载体。尽管德育活动历经多次改革,逐步走向科学化和生活化,但仍存在忽视学生主体需求、活动目标模糊、活动内容空洞、活动形式单一等问题。体验式德育作为新时期学校德育工作的一项有益尝试,充分尊重学生主体性,通过制定分层活动目标、创设回归生活情境和运用多样化活动形式,使学生于体验中深化道德认知、获得道德情感、生成道德行为,最终内化为稳定的道德品质,为解决德育活动诸多问题提供了有益思路。因此,开展体验式德育活动实践的研究,对提升德育活动实效性,培养学生德性意义重大。本研究以L小学为案例学校,分析体验式德育活动的设计与实施。作为上海市优质小学,L校于2010年启动体验式德育计划,基于生活德育和体验学习理论,依托真实生活情境,通过开展身心亲历的体验式德育活动,尊重、满足、引导学生的成长需要。学校德育工作成绩突出,先后获得全国少先队红旗大队、市级行为规范示范校等荣誉称号,其体验式德育活动现已成为区级德育品牌。研究以L校体验式德育活动为切入口,运用深度访谈、参与式观察等资料收集方法,开展案例研究。通过描述体验式德育活动设计和实施的现实样态,剖析学校体验式德育活动的特点,总结经验成效与不足,在此基础上提出改进建议。研究发现,L校体验式德育活动秉持“关注成长体验,提升生命质量”的德育理念,遵循“学生主体性、内容生活性、体验全面性”的设计原则,形成横向上以学生小学五年将经历的成长典型事件为线索,纵向上涉及民族精神、传统文化、行为规范、珍爱生命四个主题指向五个年段,螺旋式上升的“篱笆型”体验式德育活动体系。在改变学生风貌、优化办学水平、促进家庭教育发展方面取得显著成效。与此同时,研究发现L校在体验式德育活动的设计与实施中,存在一些有待改进之处,表现为德育活动中教师的主观能动性有待提高、学生的生成未得到充分重视、学校环境有待进一步完善。针对上述问题,笔者认为可以从以下三个方面予以改进:其一,依托资源共享、德育名师工作室和教师激励机制,进一步推进学校德育工作全员化;其二,运用师生对话、生生对话、生本对话的途径,进一步重视德育活动中学生的生成性;其三,通过提炼学校文化内核,规划校园环境建设,进一步提升学校环境的育人功能。

关键词：体验式德育德育活动设计与实施

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不平凡的约克先生