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CRE和AP-1元件参与人hsp90β基因的表达

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基础医学与临床 2000年第3期20卷 28-31页

作者：刘秉胜吴宁华沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了进一步阐明人热休克蛋白90β（hsp90β）基因的表达调控机制，本文对hsp90β基因调控序列中的CRE和AP－1元件进行了研究。构建了含有这两个元件的系列删切报告基因质粒，通过转染Jurkat细胞，检测并分析报告基因的活性。结果表明，... 详细信息

为了进一步阐明人热休克蛋白90β（hsp90β）基因的表达调控机制，本文对hsp90β基因调控序列中的CRE和AP－1元件进行了研究。构建了含有这两个元件的系列删切报告基因质粒，通过转染Jurkat细胞，检测并分析报告基因的活性。结果表明，CRE和AP-1元件均不同程度地参与了hsp90β基因的组成性、PHA激活和热诱导表达。

关键词： CRE元件 AP-1元件 hsp90β基因基因表达

白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节

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基础医学与临床 2001年第4期21卷 333-335页

作者：胡晶晶李宏帆程小款衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ... 详细信息

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL

关键词：白细胞介素2受体α亚基多聚二磷酸腺核糖聚合酶细胞凋亡 T淋巴细胞

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组蛋白赖氨酸甲基化在表观遗传调控中的作用

医学分子生物学杂志 2005年第1期2卷 34-37页

作者：盛德乔(综述) 张业(审阅) 沈珝琲(审阅) 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

组蛋白赖氨酸的甲基化在真核基因表观遗传调控中起着关键作用。迄今已知,在组蛋白H3中有5个赖氨酸(K4、K9、K27、K36、K79)和组蛋白H4中的1个赖氨酸(K20)可被特异的组蛋白赖氨酸甲基转移酶甲基化。这不同位点的甲基化效应是不同的,H3-K9... 详细信息

组蛋白赖氨酸的甲基化在真核基因表观遗传调控中起着关键作用。迄今已知,在组蛋白H3中有5个赖氨酸(K4、K9、K27、K36、K79)和组蛋白H4中的1个赖氨酸(K20)可被特异的组蛋白赖氨酸甲基转移酶甲基化。这不同位点的甲基化效应是不同的,H3-K9、H3-K27、H4-K20甲基化具有抑制效应;H3-K4、H3-K36、H3-K79甲基化具有激活效应,而且组蛋白甲基化与其它组蛋白共价修饰之间以及DNA甲基化之间存在对话。

关键词：组蛋白赖氨酸甲基化组蛋白赖氨酸甲基转移酶表观遗传调控阻遏激活

溴化氰活化琼脂糖免疫吸附剂的简易制备法及其应用

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生理科学进展 1979年第2期 189-192页

作者：沈珝琲王世中甘肃省新医药学研究所中国医学科学院基础医学研究所生化室

用免疫吸附剂纯化抗原、抗体或其它生物大分子是亲和层析法中的重要内容之一。它的依据是抗原(或抗体)可以和它们相应的配体(ligand)——抗体(或抗原)进行专一的结合,而这种结合在一定条件下是可逆的。若将抗原(或抗体)固相化后,就可使... 详细信息

用免疫吸附剂纯化抗原、抗体或其它生物大分子是亲和层析法中的重要内容之一。它的依据是抗原(或抗体)可以和它们相应的配体(ligand)——抗体(或抗原)进行专一的结合,而这种结合在一定条件下是可逆的。若将抗原(或抗体)固相化后,就可使与之接触的溶液中的抗体(或抗原)被结合在固相配体上,从而达到分离提纯的目的。溴化氰活化琼脂糖微球是一种常用的方法,其步骤如下:

关键词：免疫吸附剂沉降体积缓冲液磷酸钾磷酸盐琼脂糖微球抗原

大鼠在冷适应过程中肌肉线粒体氧化磷酸化的变化及其机制的初步探讨

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1964年第1期 97-105页

作者：于树玉沈珝琲王世旗中国医学科学院实验医学研究所生物化学系中国医学科学院实验医学研究所生物化学系北京

(1)本工作对大鼠在冷适应过程中肌肉线粒体氧化磷酸化效能的变化进行了观察,并对产生变化的机制做了初步探讨。(2)大鼠在低温下生活一天,肌肉线粒体的P/O比值下降为对照组的70%左右,随冷冻时期的加长,P/O此值逐渐恢复,至三个月时已与对... 详细信息

(1)本工作对大鼠在冷适应过程中肌肉线粒体氧化磷酸化效能的变化进行了观察,并对产生变化的机制做了初步探讨。(2)大鼠在低温下生活一天,肌肉线粒体的P/O比值下降为对照组的70%左右,随冷冻时期的加长,P/O此值逐渐恢复,至三个月时已与对照组无显著差异。此变化与线粒体的氧摄取量无关。(3)大鼠冷冻一天后,肌肉线粒体ATP酶活性无显著变化。(4)在低温下生活一天的大鼠,肌肉线粒体有膨胀及“老化凝聚”现象;在冷适应过程中又逐渐恢复正常。(6)在冷冻过程中腎上腺及甲状腺先后出现增大现象。(6)本文对肌肉线粒体氧化磷酸化的变化与体温调节的关系以及导致变化的可能机制作了简短的讨论。

关键词：氧化磷酸化作用甲状腺氧化磷酸化粒子肉内分泌腺大鼠冷适应线粒体粒线体

精氨酸甲基转移酶CARM1 shRNA慢病毒表达质粒的构建及稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系的建立

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医学研究杂志 2014年第7期43卷 38-43页

作者：冯炯杨光辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系 100005

目的构建慢病毒表达小鼠CARM1基因shRNA的质粒,观察其在小鼠畸胎瘤P19细胞中对CARM1的表达抑制效率。验证CARM1 shRNA慢病毒表达质粒,进一步筛选得到稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系。方法设计并且合成针对小鼠CARM1 mRNA不同部位的... 详细信息

目的构建慢病毒表达小鼠CARM1基因shRNA的质粒,观察其在小鼠畸胎瘤P19细胞中对CARM1的表达抑制效率。验证CARM1 shRNA慢病毒表达质粒,进一步筛选得到稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系。方法设计并且合成针对小鼠CARM1 mRNA不同部位的4组shRNA序列,以AgeⅠ和EcoRⅠ克隆入pLKO.1慢病毒载体中,得到含shRNA的慢病毒表达质粒。氨苄青霉素筛选后,DNA测序鉴定结果。鉴定正确的质粒大量制备后,与慢病毒包装辅助质粒psPAX2、pMD2.G共同转染HEK293T细胞,包装得到具有感染能力的慢病毒。将含病毒的培养基上清感染P19细胞后,经嘌呤霉素筛选获得CARM1稳定敲低的P19细胞系,并用Western blot法和实时荧光定量PCR进行鉴定。结果测序鉴定表明4组CARM1 shRNA慢病毒表达质粒构建成功。Western blot法检测和实时荧光定量PCR分析结果显示4组CARM1 shRNA慢病毒表达载体中的2组可有效地抑制小鼠畸胎瘤P19细胞中CARM1基因的表达,即pLKO.1/CARM1 shRNA2、pLKO.1/CARM1 shRNA3有明显的抑制效果。结论成功构建了针对CARM1基因的shRNA的慢病毒表达质粒并筛选得到稳定敲低CARM1表达的P19细胞系,为进一步研究CARM1基因的功能奠定了基础。

关键词： CARM1 shRNA 慢病毒小鼠畸胎瘤P19细胞

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隔离子与肿瘤

国外医学（肿瘤学分册） 2003年第4期30卷 256-258页

作者：王宁沈珝琲吴宁华中国协和医科大学基础医学院国家医学分子生物学重点实验室北京100005

肿瘤的发生与基因表达调控的紊乱密切相关 ,从基因或染色质水平研究肿瘤的发生机制是当今肿瘤基础研究领域的一大热点。隔离子作为染色质水平基因调控的一个重要组件 ,对其认识的不断深化可以为研究细胞发育分化过程以及癌细胞中多种异... 详细信息

肿瘤的发生与基因表达调控的紊乱密切相关 ,从基因或染色质水平研究肿瘤的发生机制是当今肿瘤基础研究领域的一大热点。隔离子作为染色质水平基因调控的一个重要组件 ,对其认识的不断深化可以为研究细胞发育分化过程以及癌细胞中多种异常紊乱现象的机制提供线索。

关键词：肿瘤隔离子基因表达 DNA甲基化染色质

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近红外双荧光系统在磷酸酯酶筛选中的应用

医学研究杂志 2014年第5期43卷 52-54页

作者：杨昕霆阎海霞沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的应用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统筛选去甲基化酶KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶。方法使用磷酸酯酶干扰质粒转染HEK293T细胞,使用磷酸化的KDM3A抗体对细胞进行杂交,近红外荧光染料DRAQ5标记细胞核,利用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光... 详细信息

目的应用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统筛选去甲基化酶KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶。方法使用磷酸酯酶干扰质粒转染HEK293T细胞,使用磷酸化的KDM3A抗体对细胞进行杂交,近红外荧光染料DRAQ5标记细胞核,利用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统对细胞进行荧光扫描,荧光强度的比值可代表细胞内相对KDM3A磷酸化水平,进而筛选出相关的磷酸酯酶。结果磷酸酯酶广谱抑制剂冈崎酸OA处理转染后的细胞,近红外双荧光扫描系统可以检测到KDM3A的磷酸化,初步筛选出4个可能参与KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶亚基。结论近红外双荧光系统可以应用于磷酸酯酶的初步筛选。

关键词：奥德赛近红外双荧光扫描系统 KDM3A 磷酸酯酶

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p300乙酰化修饰Lin28蛋白

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