近红外双荧光系统在磷酸酯酶筛选中的应用

作     者：杨昕霆 阎海霞 沈珝琲 张业 

作者机构：中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 

出 版 物：《医学研究杂志》 (Journal of Medical Research)

年 卷 期：2014年第43卷第5期

页      面：52-54页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：教育部博士点基金资助项目(20111106110024) 

主　　题：奥德赛近红外双荧光扫描系统 KDM3A 磷酸酯酶 

摘      要：目的应用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统筛选去甲基化酶KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶。方法使用磷酸酯酶干扰质粒转染HEK293T细胞,使用磷酸化的KDM3A抗体对细胞进行杂交,近红外荧光染料DRAQ5标记细胞核,利用奥德赛(Odyssey)近红外双荧光系统对细胞进行荧光扫描,荧光强度的比值可代表细胞内相对KDM3A磷酸化水平,进而筛选出相关的磷酸酯酶。结果磷酸酯酶广谱抑制剂冈崎酸OA处理转染后的细胞,近红外双荧光扫描系统可以检测到KDM3A的磷酸化,初步筛选出4个可能参与KDM3A去磷酸化的磷酸酯酶亚基。结论近红外双荧光系统可以应用于磷酸酯酶的初步筛选。