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kdm3a全长及截短质粒构建及其在细胞中的定位探究

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基因组学与应用生物学 2019年第7期38卷 3362-3367页

作者：周宝生王春玉王安琦赵越中国医科大学生命科学学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室染色质生物学研究室沈阳110122 东北育才双语学校高中部沈阳110164

赖氨酸去甲基化酶3A(lysine demethylase 3A,kdm3a)是组蛋白去甲基化酶家族成员之一,通过特异性对组蛋白H3K9甲基化进行去甲基化的作用调控基因转录。目前研究证实kdm3a在肝癌、雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)阳性乳腺癌及前列... 详细信息

赖氨酸去甲基化酶3A(lysine demethylase 3A,kdm3a)是组蛋白去甲基化酶家族成员之一,通过特异性对组蛋白H3K9甲基化进行去甲基化的作用调控基因转录。目前研究证实kdm3a在肝癌、雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)阳性乳腺癌及前列腺癌等肿瘤中发挥促癌作用,但其具体作用机制仍有待更深层次的研究。为深入解析kdm3a在各种肿瘤中的作用及其分子机制,本研究利用分子生物学方法构建了kdm3a基因的全长和截短基因表达质粒,酶切鉴定及测序证实kdm3a全长及截短基因的表达质粒构建成功。在此基础上,再将构建成功的上述多种表达质粒分别转染到HEK293细胞和MCF7细胞中,进行Western blotting和免疫荧光共聚焦实验,进一步对各重组表达质粒在培养的哺乳动物细胞中的蛋白表达及蛋白细胞定位进行初步探究。Western blotting结果显示kdm3a全长基因表达的蛋白约147 kD,其他kdm3a截短基因表达的蛋白均对应其特异性的蛋白条带;免疫荧光共聚焦实验结果显示kdm3a全长质粒以及pN1、pN2、p N3、pΔ截短质粒表达的蛋白分布在细胞核,pC1、pC2截短质粒表达的蛋白分布在细胞质,pC3截短质粒表达的蛋白分别分布于细胞核与细胞质。本实验为后续深入研究kdm3a在肿瘤中的作用及分子机制提供了实验基础。

关键词： kdm3a 重组质粒构建蛋白表达细胞定位

大肠癌组织和细胞中kdm3a的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

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现代肿瘤医学 2023年第13期31卷 2395-2400页

作者：罗志鹏苗志国魏海云江西省肿瘤医院腹部肿瘤外科江西南昌330029

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,kdm3a)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中kdm3a在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT... 详细信息

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,kdm3a)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中kdm3a在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT-PCR技术检验kdm3a在4种大肠癌细胞HT-29、SW480、SW620、DLD-1以及正常人结肠上皮细胞NCM460中的表达水平,筛选出kdm3a表达量低的大肠癌细胞系进行过表达并进行CCK-8增殖实验、Transwell实验及Western blot检测kdm3a过表达对细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果:kdm3a在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织,且kdm3a高表达患者生存率更低。过表达kdm3a可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:高表达的kdm3a可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词： kdm3a 大肠癌增殖侵袭迁移

组蛋白去甲基化酶kdm3a通过调控关节软骨分解代谢与凋亡影响骨关节炎发生发展的作用与机制研究

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组蛋白去甲基化酶KDM3A通过调控关节软骨分解代谢与凋亡影响骨关...

作者：柯昂廷中国医科大学

学位级别：硕士

目的:骨关节炎是一种好发于中老年人的软骨退行性疾病,主要症状为关节疼痛与活动受限。目前全球的骨关节炎患者人数已经突破3亿,并且仍在不断增加。物理治疗以及药物治疗是目前保守治疗的主要方式,其目的是缓解症状、代偿性加强周围肌... 详细信息

目的:骨关节炎是一种好发于中老年人的软骨退行性疾病,主要症状为关节疼痛与活动受限。目前全球的骨关节炎患者人数已经突破3亿,并且仍在不断增加。物理治疗以及药物治疗是目前保守治疗的主要方式,其目的是缓解症状、代偿性加强周围肌肉功能等。人工关节置换术等能改善关节功能,但是给患者带来一定的经济负担,且人工关节存在使用年限等问题。因此,探求骨关节炎发病过程中的关键靶点与相应的治疗举措势在必行。kdm3a是Jumonji C-域组蛋白去甲基化酶的成员之一,可以催化H3K9单甲基化和二甲基化（H3K9me1和H3K9me2）的去除。有研究报道,kdm3a可以抑制细胞的凋亡。同时,kdm3a在关节软骨细胞中对维持软骨稳态发挥重要作用。目前为止,有关kdm3a在骨关节炎进程中的作用及机制尚不清楚。KLF2（Krüppel样因子2）是一种具有转录调控活性的锌指蛋白。KLF2在骨关节炎中表达下降,并可以通过诱导Nrf2的核转位,作用于ARE阅读框,并促进下游一系列抗氧化剂基因（如:HMOX1、NQO1）的表达,抑制软骨细胞的分解代谢、氧化应激与凋亡,最终对关节软骨起到保护作用。然而,在软骨细胞中转录因子KLF2的上游调控机制尚不明确。在本课题中,我们拟系统探究kdm3a在骨性关节炎病理进程中的表达水平变化与其对软骨细胞功能的调控作用,并进一步明确kdm3a通过调控转录因子KLF2的表达发挥其在软骨细胞中的生物功能,为骨关节炎的诊断与治疗提供了新思路。方法:首先,我们探究了 kdm3a在骨关节炎软骨中的表达变化。通过分析转录组数据集GSE114007,初步观察kdm3a在OA软骨与正常软骨组织中的表达水平差异。为进一步验证上述数据集分析结果,课题组通过临床收集的正常软骨组织与OA软骨组织,使用免疫组化进一步检测kdm3a的表达变化。随后我们分别基于DMM与MIA两种不同方式诱导的小鼠OA模型,并通过免疫组化进一步明确kdm3a与OA发生发展的关系。在体外试验中,我们通过不同浓度或不同刺激时间的IL-1β作用于软骨细胞后,使用qPCR与Western blot分别检测kdm3a的mRNA与蛋白表达水平,并用免疫荧光观察kdm3a的细胞定位。其次,我们通过体内与体外实验探究了调控kdm3a表达水平对OA发生发展的作用。动物实验中,我们在关节腔内注射MIA诱导小鼠膝骨关节炎模型,并注射kdm3a抑制剂IOX1。随后进行了免疫组化染色（MMP13、COL2A1）、番红O-固绿染色、HE染色、TUNEL荧光染色,评估抑制kdm3a对关节软骨分解合成代谢、炎症、凋亡的影响。细胞实验中,我们用kdm3a过表达质粒与小干扰RNA分别在细胞层面改变kdm3a的水平,通过Western blot检测分解合成代谢相关蛋白（MMP13、COL2A1）、凋亡相关蛋白（BCL-2、BAX）水平,并用流式细胞术检测活性氧与早期凋亡细胞百分比。最后,我们探究了 kdm3a是否可以通过KLF2影响骨关节炎的进程。我们分析了数据集GSE114007中kdm3a与KLF2的表达相关性,并在细胞实验中过表达或敲减kdm3a,检测KLF2表达水平的改变。并过表达kdm3a后加入KLF2抑制剂GGPP,通过回复实验证实kdm3a在骨关节炎病理进程中与KLF2的上下游级联关系。并检测了在过表达kdm3a且抑制KLF2表达后核Nrf2及HMOX1的表达水平。结果:***3 A在骨关节炎中的表达变化（1）GSE114007数据集骨关节炎软骨中kdm3a的表达量较正常对照软骨下降。（2）骨关节炎患者关节软骨中kdm3a的表达比正常软骨下降。（3）同一骨关节炎患者损伤区软骨的kdm3a表达量较非损伤区下降。（4）与假手术组小鼠相比,在DMM诱导的小鼠OA模型中OARSI评分显著增加,且kdm3a表达水平显著下降。（5）与对照组小鼠相比,在MIA诱导的小鼠OA模型中OARSI评分显著增加,kdm3a表达水平显著下降,且与MIA的剂量负相关。（6）用20ng/ml浓度的IL-1 β作用于SW1353细胞不同时间,随着IL-1 β作用时间的增加,kdm3 A的mRNA与蛋白表达量下降。（7）用不同浓度的IL-1 β作用于SW1353细胞24小时,随着IL-1 β浓度的升高,kdm3a的mRNA与蛋白表达量下降。（8）kdm3a主要定位在细胞核中,且在IL-1 β刺激后kdm3a的表达下降。***3A影响骨关节炎的发生发展（1）在MIA诱导的小鼠骨关节炎模型中,关节腔注射kdm3a抑制剂IOX1可以抑制小鼠关节软骨中COL2A1的表达,并促进MMP13的表达、滑膜炎症与软骨细胞凋亡。且这种作用呈现出与IOX1明确的剂量相关性。（2）在IL-1 β处理后的SW1353细胞中过表达kdm3a可以促进COL2

关键词： kdm3a 表观遗传 KLF2 骨关节炎分解代谢氧化应激

组蛋白去甲基化酶kdm3a通过MAPK/NF-κB信号通路介导高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞的损伤

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组蛋白去甲基化酶KDM3A通过MAPK/NF-κB信号通路介导高胰岛素诱导...

作者：张博方武汉大学

学位级别：硕士

目的:以往大量的研究表明组蛋白去甲基化酶kdm3a参与了糖尿病高血糖相关的多种心血管并发症,然而,尚不清楚kdm3a是否参与了高胰岛素所引起的心血管损伤的病理生理过程。因此本次研究的目的是探究下调组蛋白去甲基化酶kdm3a的表达是否可... 详细信息

目的:以往大量的研究表明组蛋白去甲基化酶kdm3a参与了糖尿病高血糖相关的多种心血管并发症,然而,尚不清楚kdm3a是否参与了高胰岛素所引起的心血管损伤的病理生理过程。因此本次研究的目的是探究下调组蛋白去甲基化酶kdm3a的表达是否可以缓解高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞功能紊乱并进一步探讨其潜在的机制。方法:从SD大鼠胸主动脉中分离原代血管平滑肌细胞。用含有control-siRNA或kdm3a-siRNA的慢病毒载体转染血管平滑肌细胞72小时,然后在含有浓度为100nm的胰岛素的培养基中培养5天。采用CCK-8法检测血管平滑肌细胞的增殖,transwell小室检测血管平滑肌细胞的迁移,流式细胞学检测测定血管平滑肌细胞的凋亡,DHE荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的水平。使用qRT-PCR检测细胞内白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达,此外,采用 western-blot 检测 kdm3a、MAPKs、NF-κB/p65、Bax 和 Bcl-2 的蛋白表达水平。结果:100nm的胰岛素可以显著促进血管平滑肌细胞的增殖、迁移、凋亡及ROS的生成,并显著上调细胞中1L-6和MCP-1 mRNA的表达。当平滑肌细胞转染含有kdm3a-siRNA的慢病毒后可以显著逆转由高胰岛素诱导的平滑肌细胞中kdm3a表达的升高,同时,抑制kdm3a的表达可以大大缓解高胰岛素诱导的平滑肌细胞的增殖和迁移,并减少细胞内ROS的产生,减少细胞的凋亡以及炎症因子的表达,更为重要的是,下调kdm3a基因的表达可以缓解高胰岛素导致的MAPK家族蛋白的磷酸化水平和NF-κB/p65表达的上调。结论:高浓度的胰岛素可以对血管平滑肌细胞造成损伤并导致其生理功能紊乱,而下调kdm3a基因的表达可以对高胰岛素培养的平滑肌细胞发挥多重保护作用,其潜在的可能机制是抑制MAPKs/NF-κB信号通路的激活。

关键词： kdm3a 血管平滑肌细胞胰岛素 MAPKs/NF-κB

miR-141/200a靶向kdm3a调控膀胱癌细胞葡萄糖代谢及生物学行为的机制研究

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miR-141/200a靶向KDM3A调控膀胱癌细胞葡萄糖代谢及生物学行为的...

作者：苗超豪厦门大学

学位级别：硕士

目的:本文旨在研究分析miR-141、miR-200a与膀胱癌病理分期等临床指标的相关性及评估miR-141、miR-200a预测膀胱癌预后价值。厘清膀胱癌细胞中miR-141和miR-200a对kdm3a的调控作用,初步探究miR-141和miR-200a,kdm3a和下游葡萄糖代谢相... 详细信息

目的:本文旨在研究分析miR-141、miR-200a与膀胱癌病理分期等临床指标的相关性及评估miR-141、miR-200a预测膀胱癌预后价值。厘清膀胱癌细胞中miR-141和miR-200a对kdm3a的调控作用,初步探究miR-141和miR-200a,kdm3a和下游葡萄糖代谢相关基因之间的调控机制,并通过构建细胞模型和动物模型,探究其对膀胱癌细胞生物学行为的影响。方法:1.生物信息学技术预测miR-141和miR-200a可能的靶基因。从TCGA数据库膀胱癌子集中下载膀胱尿路上皮癌患者的miRNA-seq及RNA-seq数据和患者的临床信息,提取膀胱癌miR-141-3p、miR-200a-3p、kdm3a及糖代谢相关基因表达矩阵。将miR-141、miR-200a表达量与临床病理数据、患者预后等进行相关性分析,明确miR-141和miR-200a,kdm3a和下游葡萄糖代谢相关基因的表达变化及相关性。2.在膀胱癌T24细胞株中通过过量表达或抑制miR-141和miR-200a或同时转染kdm3a以回补kdm3a表达,使用实时定量PCR技术和Western Blot检测miR-141、miR-200a、kdm3a、下游葡萄糖转运和代谢相关基因的表达水平变化及调控作用;功能试验检测miR-200a和miR-141对膀胱肿瘤细胞的细胞增殖、细胞侵袭与迁移、和肿瘤体外克隆形成等特性是否产生影响;构建动物模型分析miR-141和miR-200a对膀胱癌细胞在体内成瘤的调控作用。结果:***数据库中膀胱癌组织miR-141-3p和miR-200a-3p高表达,但其表达水平与膀胱癌TNM分期、病理分期、组织学分级及患者预后呈负相关。且miR-141-3p和miR-200a-3p在侵袭性和非侵袭性膀胱癌的鉴别上体现了高敏感性和特异性。miR-141和miR-200a可能靶向作用于kdm3a,且膀胱癌患者kdm3a基因的表达与糖酵解代谢相关基因的表达存在正相关。***-141-3p和miR-200a-3p的过表达显著降低了 T24细胞中kdm3a及糖代谢相关基因(GLUT1、MCT4、PGK1、PKM2、HK2)mRNA 的表达水平,而与kdm3a过表达质粒共转染后这些基因的表达得到了相应的回升。miR-141-3p和miR-200a-3p的过表达显著降低了 T24细胞中kdm3a及糖代谢相关基因(GLUT1、MCT4、PKM2)蛋白的表达水平,回补kdm3a后这些蛋白的表达得到了相应的回复。同时抑制miR-141-3p和miR-200a-3p的表达,kdm3a及糖代谢相关基因(GLUT1、MCT4、PKM2)蛋白的表达水平提高。***8实验显示过表达miR-141、miR-200a的T24细胞增殖能力降低;划痕实验显示过表达miR-141、miR-200a后T24细胞划痕愈合能力减弱;Transwell实验显示过表达miR-141、miR-200a后T24细胞穿膜侵袭能力减弱;克隆形成实验结果表明了过表达miR-141、miR-200a的膀胱癌细胞克隆形成能力减弱。并且在过表达miR-141、miR-200a后同时回补kdm3a基因,细胞增殖、愈合、侵袭、克隆形成能力均得到相应回复。4.在裸鼠中,LV-miR-141和LV-miR-200a感染的细胞肿瘤生长比LV-Ctrl感染的T24细胞慢得多,然而,kdm3a的过表达显著改善了对成瘤性的抑制。结论:***-141、miR-200a的表达随膀胱癌组织恶性程度增高而降低,随着瘤分期及分级的提高,其表达水平逐渐降低。miR-141和miR-200a与患者的预后呈负相关且在鉴别上膀胱浸润性上体现了高敏感性和特异性。它们可能在膀胱癌疾病进展期的发生发展起到重要作用,可以作为膀胱癌潜在的肿瘤学标记物。***-141及miR-200a能靶向抑制kdm3a在膀胱癌细胞中的表达,从而影响着膀胱癌细胞糖代谢,从而减弱膀胱癌细胞的增殖、侵袭、迁移、克隆形成及体内成瘤的能力。

关键词：膀胱癌 miR-141-3p miR-200a-3p kdm3a 糖代谢

MiR-30a调控心脏成纤维细胞kdm3a的表达抑制缺氧诱导心肌纤维化的机制研究

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MiR-30a调控心脏成纤维细胞KDM3A的表达抑制缺氧诱导心肌纤维化的...

作者：朱志伦南京医科大学

学位级别：硕士

背景赖氨酸特异性去甲基酶3A（kdm3a）是一个重要的表观遗传标记,有研究证实kdm3a通过催化组蛋白去甲基化修饰调节靶基因的表达,参与了左心室肥厚和心肌纤维化。MiRNA属于一类单链非编码小RNA,所含核苷酸量为18-25个,使特定基因沉默的... 详细信息

背景赖氨酸特异性去甲基酶3A（kdm3a）是一个重要的表观遗传标记,有研究证实kdm3a通过催化组蛋白去甲基化修饰调节靶基因的表达,参与了左心室肥厚和心肌纤维化。MiRNA属于一类单链非编码小RNA,所含核苷酸量为18-25个,使特定基因沉默的方式可为降解靶mRNA或抑制翻译。研究证实,在心肌梗死（MI）后心肌纤维化过程中,miR-30a发挥一定作用。作为表观遗传的重要内容,miRNA及组蛋白修饰能相互调控、共同影响疾病的发生发展,其相互作用在心血管疾病中也得到证实。靶基因预测发现,miR-30a与kdm3a存在结合位点,提示kdm3a可能是miR-30a的靶基因之一,miR-30a可能通过调控kdm3a的表达抑制心肌纤维化。目的本研究通过缺氧预处理心脏成纤维细胞,体外模拟MI过程,研究miR-30a与kdm3a及基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）、转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）、Ⅲ型胶原（Col Ⅲ）等纤维化指标表达间的联系,为进一步探讨miR-30a在抑制心肌纤维化方面的作用机制提供依据。方法将大鼠心脏成纤维细胞（RCF）随机分为5组:空白对照组、缺氧组、缺氧+miR-30a 模拟物（mimics）组、缺氧+miR-30a mimics+miR-30a 抗小核糖核酸寡核苷酸（AMO）组、缺氧+miR-30a阴性对照（NC）组,通过实时荧光定量 PCR 法检测心肌 miR-30a 以及 kdm3a、TGF-β1、Col Ⅰ、Col Ⅲ、TIMP1 mRNA表达情况,蛋白印迹法检测kdm3a、TGF-β1的蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,缺氧条件下培养的大鼠心脏成纤维细胞kdm3a、TGF-β1、Col Ⅰ、Col Ⅲ、TIMP1 表达显著升高（P＜0.05）,miR-30a 表达显著降低（P＜0.05）。与缺氧和缺氧+miR-30aNC组相比,缺氧+miR-30a mimics组过表达 miR-30a 后 kdm3a、TGF-β1、Col Ⅰ、Col Ⅲ、TIMP1 表达显著下降（P＜0.05）,然而当共转染 miR-30a AMO 时,kdm3a、TGF-β1、Col Ⅰ、Col Ⅲ、TIMP1表达量未见显著抑制（P＞0.05）。miR-30a可使kdm3a表达下调,从而抑制心肌纤维化。结论1、缺氧促进RCF纤维化相关指标（TGF-β1、Col Ⅰ、Col Ⅲ、TIMP1）及kdm3a的表达,抑制RCF miR-30a的表达。2、miR-30a可能通过抑制心脏成纤维细胞kdm3a、TGF-β1的表达,抑制缺氧诱导的心肌纤维化。3、kdm3a可能是miR-30a的靶基因之一,miR-30a可能对kdm3a靶向调控,使其表达下调,从而抑制心肌纤维化。

关键词：心肌纤维化缺氧 miR-30a kdm3a

组蛋白去甲基化酶kdm3a通过调控巨噬细胞极化对梗死后心肌损伤的影响

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组蛋白去甲基化酶KDM3A通过调控巨噬细胞极化对梗死后心肌损伤的...

作者：柳小佩武汉大学

学位级别：硕士

目的:近年来,新的研究证实kdm3a作为一种重要的表观遗传学靶点参与调控糖尿病心肌病、心肌梗死和心肌肥厚等心血管疾病,而我们前期研究证实kdm3a参与调节高糖环境下平滑肌细胞的生物学功能和糖尿病血管重构,其机制可能与kdm3a参与调节... 详细信息

目的:近年来,新的研究证实kdm3a作为一种重要的表观遗传学靶点参与调控糖尿病心肌病、心肌梗死和心肌肥厚等心血管疾病,而我们前期研究证实kdm3a参与调节高糖环境下平滑肌细胞的生物学功能和糖尿病血管重构,其机制可能与kdm3a参与调节炎症、凋亡、氧化应激等病理生理反应有关。根据上述结果,我们推测kdm3a可能在心血管系统的炎症反应起重要作用。同时,由于巨噬细胞已被证实参与调节心肌梗死后的炎症修复,并发挥着核心作用,我们试图探讨kdm3a能否通过调节巨噬细胞的极化来影响心肌梗死后炎症反应,靶向调控kdm3a是否可影响心肌梗死后心肌损伤修复和左心室(LV)重构的愈后。方法:为了探讨kdm3a的生物学功能以及其潜在机制,我们通过下调kdm3a的表达设计的细胞实验随机分为三个组:a)对照组:无任何处理的骨髓巨噬细胞(BMDMs);b)Adsh RNA组:感染Adsh RNA病毒的BMDMs;c)Adsh kdm3a组:感染Adsh kdm3a病毒的BMDMs。动物实验随机分为4组:a)野生型大鼠假手术组(WT-SO);b)kdm3a基因敲除鼠假手术组(KO-SO);c)野生型大鼠心梗手术组(WT-MI);d)kdm3a基因敲除鼠心梗手术组(KO-MI)。通过吞噬和迁移实验分析巨噬细胞的生物学功能,探讨巨噬细胞的极化。采用Western blot和免疫荧光法检测炎症相关基因在急性炎症期的表达以及巨噬细胞的表面标志物的表达,超声检测、Masson染色、H&E染色来检测心脏功能。结果:我们证实kdm3a通过调节巨噬细胞的主要生物功能和表型极化来影响炎症反应进程,从而影响心肌梗死(MI)后心肌修复和左心室(LV)重塑的愈后。细胞实验中,抑制BMDMs中kdm3a表达降低了巨噬细胞的吞噬作用,减弱了其对心肌细胞坏死趋化因子的迁移能力,说明抑制kdm3a可能导致巨噬细胞归巢入损伤组织和清除细胞碎片的能力降低。在脂多糖(LPS)刺激下,下调kdm3a导致细胞促炎细胞因子分泌增多,巨噬细胞分化为M1表型,但IL-4刺激下巨噬细胞分化为M2表型的能力受到抑制。此外,动物实验结果表明,在KO-MI和WT-MI组之间M1和M2巨噬细胞在MI后第7天的浸润程度显著不同。值得注意的是,我们观察到KO-MI大鼠心肌梗死区M1巨噬细胞(CD86)浸润较多,M1/M2(CD86/CD206)比值较高。而WT-MI大鼠M2巨噬细胞(CD206)浸润较多。M1或M2相关表型标记物和细胞因子与细胞实验的分泌趋势是一致的。这些结果共同说明,在炎症反应向修复转换阶段,抑制kdm3a导致巨噬细胞向促炎症的M1型极化而没有及时向修复M2型巨噬细胞极化。更重要的是,心肌梗死后7天和1个月,KO-MI组大鼠左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)均降低。KO-MI组在第7天的纤维化和心功能均低于WT-MI组。Western blot以及Ch IP-PCR实验分析证实IRF4作为kdm3a调节巨噬细胞极化的下游效应因子,kdm3a通过表观遗传学效应增强IRF4启动子区域H3K9me2表达来影响IRF4的转录,从而调控巨噬细胞的极化。结论:kdm3a介导巨噬细胞极化、吞噬和迁移能力,从而调控梗死心肌的修复进程和左室重构。我们还发现IRF4是kdm3a下游信号通路。这些结果表明,靶向kdm3a通过调控IRF4信号通路来调节梗死心脏的巨噬细胞极化,可能是一种新的心脏修复和功能治疗策略,并提示巨噬细胞表型极化向修复表型的倾斜可能是改善梗死心肌修复的关键途径之一。

关键词： kdm3a 巨噬细胞极化心肌损伤不良重塑

kdm3a沉默对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和侵袭能力的影响

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基础医学与临床 2021年第1期41卷 33-37页

作者：张天瑞高文怡姚娟新疆医科大学新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学第一附属医院影像中心新疆乌鲁木齐830000

目的探讨siRNA介导的kdm3a基因沉默对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响。方法构建kdm3a基因特异性siRNA慢病毒载体。感染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞转染siRNA-kdm3a的效率;CCK-8法检测细胞增殖;Western... 详细信息

目的探讨siRNA介导的kdm3a基因沉默对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响。方法构建kdm3a基因特异性siRNA慢病毒载体。感染MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞转染siRNA-kdm3a的效率;CCK-8法检测细胞增殖;Western blot检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞侵袭。结果在MDA-MB-231细胞中,相对于NC组,kdm3a-sh1、kdm3a-sh2、kdm3a-sh3组中kdm3a基因的mRNA表达均下调;kdm3a-sh2组基因敲低效率最高;mRNA相对表达量降低了80.1%(Pkdm3a基因后,MDA-MB-231细胞增殖能力减弱,凋亡率升高(Pkdm3a沉默能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭,并促进细胞凋亡。

关键词： kdm3a 基因沉默乳腺癌增殖凋亡

kdm3a加重高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞损伤

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医学研究杂志 2017年第3期46卷 26-30页

作者：张博方郭鑫陈静江洪武汉大学人民医院心内科武汉大学心血管病研究所心血管病湖北省重点实验室 430060

目的探究组蛋白去甲基化酶kdm3a对高胰岛素条件下平滑肌细胞增殖、迁移功能以及炎性状态的影响。方法从SD大鼠胸主动脉分离原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),之后将VSMCs随机分为3组:1正常培养基+对照组干扰siRN... 详细信息

目的探究组蛋白去甲基化酶kdm3a对高胰岛素条件下平滑肌细胞增殖、迁移功能以及炎性状态的影响。方法从SD大鼠胸主动脉分离原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),之后将VSMCs随机分为3组:1正常培养基+对照组干扰siRNA组;2高胰岛素刺激+kdm3a特异siRNA组;3高胰岛素刺激+对照组干扰siRNA组。分别用CCK-8、Transwell检测细胞的增殖和迁移。RT-PCR检测白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA的表达水平。蛋白免疫印记法检测kdm3a的表达。结果高胰岛素刺激可以显著促进VSMCs的增殖和迁移,同时上调kdm3a的表达,并提高IL-6及MCP-1的mRNA水平。然而,使用siRNA下调kdm3a的表达可以显著减少高胰岛素诱导的VSMCs的增殖、迁移及炎性因子的表达。结论 kdm3a加重高胰岛素诱导的血管平滑肌细胞的损伤。

关键词： kdm3a 平滑肌细胞胰岛素