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人胎脑中hSNF5结合蛋白的筛选、克隆及分析

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 529-532页

作者：张怡杨珺吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定... 详细信息

目的寻找在神经细胞中与染色质重塑复合物中hSNF5亚单位相结合的靶蛋白并探索其功能,为阐明hSNF5在细胞中参与染色质重塑复合物对靶基因调控的机制提供线索。方法以hSNF5为诱饵,采用酵母双杂交系统筛选人胎脑MATCHMAKERcDNA文库。测定核苷酸序列,计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。结果获得9个阳性克隆。DNA序列分析及同源性比较表明,1个克隆的序列与推导蛋白FLJ20643羧基端的mRNA同源性高达97%,4个克隆与GenBank中可编码蛋白的序列有较高的同源性,其他4个克隆编码的氨基酸顺序与GenBank中的已知序列无同源性。结论在人胎脑cDNA文库中克隆到hSNF5的结合蛋白,这些蛋白质可能通过hSNF5募集染色质重塑复合物以调节其靶基因的转录活性熏及其参与的细胞功能。

关键词： hSNF5 酵母双杂交体系基因调控

组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7促进Ngn1基因的表达

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 692-695页

作者：戴津泼张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定... 详细信息

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型(全反式维甲酸诱导P19神经分化)中,Setd7对神经分化关键基因Ngn1的调控;利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn1启动子活性的影响;构建小鼠Setd7siRNA干扰质粒,利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对Ngn1mRNA表达的影响。结果成功构建了小鼠Setd7基因的真核表达载体,可在HEK293T细胞中有效表达;Setd7可促进Ngn1mRNA表达;Setd7能够促进Ngn1启动子活性;降低Setd7抑制Ngn1mRNA表达。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn1的转录。

关键词： Setd7 神经分化 Ngn1

染色质免疫沉淀技术及其在基因表达调控研究中的初步应用

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中国医学科学院学报 2004年第1期26卷 52-55页

作者：张勇程小款吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果... 详细信息

目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果在p53抗体免疫沉淀的DNA片段中含有p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区p53蛋白结合序列,免疫沉淀样品中含有p53蛋白。结论p53蛋白在体内结合于p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区,参与两基因的表达调控。

关键词：染色质免疫沉淀 hsp90β p53 p21^WAF1/CIP1

PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 756-759页

作者：翟妞张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;... 详细信息

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解;PIH1D1抑制SNF5的降解,从而稳定SNF5。结论PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径,抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解,从而起到稳定SNF5的作用。

关键词： SWI/SNF染色质重塑复合物 SNF5 PIH1D1 蛋白酶体依赖降解

人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系

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中国医学科学院学报 1999年第2期21卷 126-129页

作者：施一江沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质，然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布... 详细信息

目的研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质，然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加，并与内源性的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达水平一致。结论首次证实人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控，为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型。

关键词： hsp90β基因亲和层析活性染色质染色质 cDNA

稳定表达SirT7对其转染的P19细胞的增殖抑制作用

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 724-727页

作者：吕建祎张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建稳定表达SirT7的P19细胞系并探讨Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶SirT7在该细胞中对细胞增殖和细胞周期的影响。方法将SirT7的真核表达质粒转染进入P19细胞,并利用筛选标记筛选出稳定克隆,采用Western blot、流式细胞仪等方法观察SirT7对... 详细信息

目的构建稳定表达SirT7的P19细胞系并探讨Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶SirT7在该细胞中对细胞增殖和细胞周期的影响。方法将SirT7的真核表达质粒转染进入P19细胞,并利用筛选标记筛选出稳定克隆,采用Western blot、流式细胞仪等方法观察SirT7对P19细胞生长和细胞周期的影响。结果稳定表达Sirt7 P19细胞系细胞生长速度减慢,流式细胞仪荧光分析呈现明显的G1/S期阻滞。结论SirT7可导致P19细胞的周期阻滞,并抑制细胞的增殖。

关键词： SirT7 细胞增殖细胞周期

热休克基因mRNA定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

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科学通报 1999年第18期44卷 1928-1933页

作者：王艳林沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用... 详细信息

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用DNA重组技术及体外转录体系制备了一种能用作测定hsp70 ,hsp90α及hsp90 βmRNA的复合内参照RNA ;然后 ,通过对反应条件的优化、选择 ,建立了一种特异检测 3种主要的人HSP基因mRNA水平的定量RT PCR体系 .应用此体系测定了hsp70 ,hsp90α及hsp90 β在Jurkat细胞中的组成性及热诱导表达规律 .

关键词：热休克基因 mRNA 定量RT-PCR检测热休克白质

The China affection of Ray Wu

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Science China(Life Sciences) 2009年第2期52卷 119-124页

作者：沈珝琲 Department of Biochemistry and Molecular Biology at the Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College in Beijing

I first knew Professor Ray Wu by name was in the early 1980s when I just came back to the Chinese Academy of Medical Sciences after an eleven year off from Beijing deep in the northwest part of China. Eager to catch up with the advanced knowledge in molecular biology that had been vigorously advanced in the previous decade, I went to

关键词：大学邹承鲁中学

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真核基因表达调控 1