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RNA干扰技术原理及其在脑胶质瘤治疗中的应用

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国际神经病学神经外科学杂志 2014年第6期41卷 562-564页

作者：汪超甲王辉湖北医药学院附属太和医院神外三科湖北十堰442000

RNA干扰是dsRNA在转录后水平特异性降解目的基因mRNA,导致该基因沉默的现象。脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,传统的手术、放、化疗均不能达到彻底治愈的目的。RNA干扰在脑胶质瘤治疗中的应用,可能会取得更好的效果。本文就RNA干扰技... 详细信息

RNA干扰是dsRNA在转录后水平特异性降解目的基因mRNA,导致该基因沉默的现象。脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,传统的手术、放、化疗均不能达到彻底治愈的目的。RNA干扰在脑胶质瘤治疗中的应用,可能会取得更好的效果。本文就RNA干扰技术原理及其在脑胶质瘤治疗中的应用的研究进展作一综述。

关键词： RNA干扰脑胶质瘤原理应用

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脑胶质瘤化疗现状及耐药机制的研究进展

中国临床神经外科杂志 2017年第11期22卷 791-794页

作者：汪超甲王辉湖北医药学院附属太和医院神外三科湖北十堰442000

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，恶性程度高，侵袭性强，易复发，治疗相当困难。随着显微神经外科、术中导航以及术中CT和MRI等技术与设备的发展，手术治疗的效果较前明显改善，但仍不能达到理想的目标。化疗或者术后辅以... 详细信息

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，恶性程度高，侵袭性强，易复发，治疗相当困难。随着显微神经外科、术中导航以及术中CT和MRI等技术与设备的发展，手术治疗的效果较前明显改善，但仍不能达到理想的目标。化疗或者术后辅以化疗在一定程度上可以改善病人的生存质量，但由于药物很难透过血脑屏障，加之耐药性，使得化疗效果有限，为了更好地指导化疗药物的选择和减少耐药性，提高疗效，综合分析人脑胶质瘤的化疗现状及耐药机制是非常必要的。

关键词：脑胶质瘤化疗耐药机制

微创手术和保守治疗高血压性脑出血疗效的Meta分析

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中国临床神经外科杂志 2017年第5期22卷 296-298,301页

作者：汪超甲王辉湖北医药学院附属太和医院神经外科湖北十堰442000

目的系统评价微创手术和保守治疗高血压性脑出血的疗效。方法计算机检索PubMed、EMBASE、CochraneCentral Register of Controlled Trials、中国期刊网全文数据库、中国生物医学文献数据库、维普数据库及万方数据库中关于微创手术和保... 详细信息

目的系统评价微创手术和保守治疗高血压性脑出血的疗效。方法计算机检索PubMed、EMBASE、CochraneCentral Register of Controlled Trials、中国期刊网全文数据库、中国生物医学文献数据库、维普数据库及万方数据库中关于微创手术和保守治疗高血压性脑出血的随机对照研究,并进行Meta分析。结果共纳入21项(4 241例)符合标准的随机对照研究,Meta分析显示,微创手术的有效率明显优于保守治疗(OR=2.85;95%CI 2.45~3.31;P<0.00001)。微创手术的发病后6个月GOS评分率明显优于保守治疗(OR=4.95;95%CI 3.69~6.64;P<0.00001)。结论与保守治疗相比,微创手术治疗高血压性脑出血既有效又安全,明显提高治疗有效率,明显改善病人的生存质量。

关键词：高血压性脑出血微创手术保守治疗 Meta分析随机对照试验

微血管减压术治疗原发性三叉神经痛的疗效观察

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中国临床神经外科杂志 2022年第10期27卷 857-858页

作者：汤朝阳王辉汪超甲锦州医科大学十堰市太和医院研究生培养基地/湖北医药学院附属医院湖北十堰442000 十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)神经外科湖北442000

目的总结微血管减压术(MVD)治疗原发性三叉神经(PTN)的经验。方法回顾性分析2016年1月至2017年12月MVD治疗的90例PTN的临床资料。结果术中发现,65例为单纯动脉压迫(动脉组),17例动静脉共同压迫(混合组),8例单纯静脉压迫(静脉组)。术后1 ... 详细信息

目的总结微血管减压术(MVD)治疗原发性三叉神经(PTN)的经验。方法回顾性分析2016年1月至2017年12月MVD治疗的90例PTN的临床资料。结果术中发现,65例为单纯动脉压迫(动脉组),17例动静脉共同压迫(混合组),8例单纯静脉压迫(静脉组)。术后1 d、6个月、1年、2年,治愈率分别为82.2%、87.8%、90.0%、87.8%;其中动脉组治愈率分别87.7%、92.3%、93.9%、93.9%、85.3%;混合组分别为70.6%、76.5%、82.4%、76.5%;静脉组分别为62.5%、75%、75%、62.5%。三组治愈率均无统计学差异(P>0.05)。结论MVD治疗PTN效果良好。

关键词：原发性三叉神经痛微血管减压术疗效

应用规律成簇的间隔短回文重复/Cas9构建敲除趋化因子受体4的人胶质瘤U251细胞

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中华实验外科杂志 2018年第5期35卷 806-808页

作者：黄书岚刘宇航王辉汪超甲武汉大学人民医院神经外科 430060 湖北医药学院附属太和医院神经外科十堰442000

目的运用规律成簇的间隔短回文重复（CRISPR）/Cas9基因编辑技术构建敲除趋化因子受体4 （CXCR4）基因的人脑胶质瘤U251细胞.方法设计3对针对目标基因CXCR4的导向RNA（sgRNA）,通过PX335质粒构建3组该基因的Cas9表达载体（CXCR4-sgRN... 详细信息

目的运用规律成簇的间隔短回文重复（CRISPR）/Cas9基因编辑技术构建敲除趋化因子受体4 （CXCR4）基因的人脑胶质瘤U251细胞.方法设计3对针对目标基因CXCR4的导向RNA（sgRNA）,通过PX335质粒构建3组该基因的Cas9表达载体（CXCR4-sgRNA-1、CXCR4-sgRNA-2、CXCR4-sgRNA-3）,测序验证后,将构建正确的载体CXCR4-sgRNA-1转染进至U251细胞,T7核酸内切酶Ⅰ （T7E1）酶切鉴定敲除效率,分离单克隆细胞5组进行培养,分别测序及蛋白印迹法鉴定其敲除效率和蛋白含量,获得稳定敲除阳性单克隆细胞.结果测序验证CXCR4-sgRNA-1组载体构建成功,转染载体后U251细胞经聚合酶联反应（PCR）酶切鉴定敲除效率为48％,其2、3、4、5号单克隆细胞敲除效率分别为20％、40％、30％、20％.PCR产物连接T载体后测序,结果显示3组出现点突变,2号为A突变为G,4号为T突变为C和5号为A突变为G,而3号单克隆敲入38 bp碱基,确定为有意义的突变.2、3、4号单克隆细胞CXCR4蛋白表达量为0,敲除组CXCR4蛋白相对表达量较对照组明显降低（0比0.746±0.010,P=0.000）,差异有统计学意义.免疫印迹结果说明敲除CXCR4基因的U251细胞株内无CXCR4蛋白的表达;测序比对得到有效的敲除细胞株.结论通过CRISPR/Cas9系统高效地获得了靶向CXCR4重组质粒,并且筛选出稳定敲除CXCR4表达的U251细胞株.

关键词：胶质瘤规律成簇的间隔短回文重复/Cas9 趋化因子受体4

CRISPR/cas9基因编辑系统的结构功能及其在脑胶质瘤中的应用进展

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中国医药导报 2018年第18期15卷 24-27页

作者：汪超甲王辉湖北医药学院附属太和医院神外三科湖北十堰442000

脑胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,目前的手术、化疗、放疗效果欠佳,基因治疗可能成为未来脑胶质瘤的重要发展方向。现有的基因编辑技术有RNA干扰、TALEN、ZENs等,由于其设计操作复杂且脱靶率高,一直没能得到很好的应用。(CRISPR)/... 详细信息

脑胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,目前的手术、化疗、放疗效果欠佳,基因治疗可能成为未来脑胶质瘤的重要发展方向。现有的基因编辑技术有RNA干扰、TALEN、ZENs等,由于其设计操作复杂且脱靶率高,一直没能得到很好的应用。(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9是很多细菌和大部分古生菌的天然免疫系统。通过对入侵的病毒和核酸进行特异性的识别,利用Cas蛋白进行切割,从而达到对自身的免疫,较上述的几种方法,具有明显的优势。本文就CRISPR/Cas9的结构功能及在脑胶质瘤治疗中的应用作一综述,以期为脑胶质的治疗提供新途径。

关键词： CRISPR/Cas9 结构功能脑胶质瘤应用进展

成年人病毒性脑炎血清及脑脊液中NSE、S-100B蛋白及IL-6水平变化及意义

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脑与神经疾病杂志 2022年第6期30卷 357-361页

作者：程艳丽汪超甲湖北工业大学医院内科湖北430068 十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)神经外科

目的探讨成年人病毒性脑炎血清及脑脊液中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100B蛋白及白细胞介素-6 (IL-6)水平与临床疗效和近期复发的关系。方法选取2016年5月1日至2020年5月1日期间江夏区第一人民医院收治的79例成年病毒性脑炎患者(... 详细信息

目的探讨成年人病毒性脑炎血清及脑脊液中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100B蛋白及白细胞介素-6 (IL-6)水平与临床疗效和近期复发的关系。方法选取2016年5月1日至2020年5月1日期间江夏区第一人民医院收治的79例成年病毒性脑炎患者(脑炎组)和63例门诊体检健康者志愿者(对照组)。脑炎组患者分别于入院后24h内(治疗前)、治疗后采集脑脊液和外周静脉血,对照组仅于体检当日采集外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验检测NSE、S-100B蛋白、IL-6水平。评估临床治疗效果,出院后定期复查和随访3个月统计复发情况,比较不同疗效、是否复发患者脑脊液和血清中NSE、S-100B蛋白、IL-6水平差异。结果脑炎组脑脊液、血清中NSE、S-100B蛋白、IL-6水平均高于对照组(P<0.05)。脑炎组治疗后脑脊液、血清中NSE、S-100B蛋白、IL-6水平均较治疗前明显下降(P<0.05),其中无效组治疗后上述指标高于有效组(P<0.05),复发组高于无复发组(P<0.05)。结论成年人病毒性脑炎血清及脑脊液中NSE、S-100B蛋白、IL-6水平均升高,三者与临床疗效和近期复发密切相关。

关键词：病毒性脑炎神经元特异性烯醇化酶 S-100B蛋白白细胞介素-6 复发

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胶质母细胞瘤治疗现状和化疗药物研究进展

中国医药导报 2017年第35期14卷 29-32页

作者：黄书岚刘宇航王辉汪超甲武汉大学人民医院神经外科湖北武汉430060

多形性胶质母细胞瘤(GBM)是最致命的一种异质性脑肿瘤,GBM患者存活时间为8~15个月。GBM由复杂的信号通路驱动,对于GBM的治疗一直被认为是最具挑战性的,GBM的标准治疗包括手术、放射治疗、化疗和联合治疗。本文综述了GBM的肿瘤间和肿瘤... 详细信息

多形性胶质母细胞瘤(GBM)是最致命的一种异质性脑肿瘤,GBM患者存活时间为8~15个月。GBM由复杂的信号通路驱动,对于GBM的治疗一直被认为是最具挑战性的,GBM的标准治疗包括手术、放射治疗、化疗和联合治疗。本文综述了GBM的肿瘤间和肿瘤内异质性、最新的化疗药物及作用机制,重点介绍了一些天然合成和新型抗胶质瘤药物,也是当今研究人员的主要研究热点。

关键词：多形性胶质母细胞瘤异质性联合治疗化疗药物

RNAi对U251细胞c-Met基因表达水平的影响

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中国临床神经外科杂志 2015年第2期20卷 99-100页

作者：汪超甲王辉胡钧涛湖北医药学院附属太和医院神外科湖北十堰442000

目的探讨RAN干扰作用对人脑胶质瘤U251细胞c-Met基因表达的影响。方法设计3对以c-Met为靶基因短发夹RNA片段,p Genesil-1质粒为载体,构建p Genesil-1/c-Met-sh RNA重组质粒,将其转染人脑胶质瘤U251细胞。采用PCR和免疫印迹法分别检测c-... 详细信息

目的探讨RAN干扰作用对人脑胶质瘤U251细胞c-Met基因表达的影响。方法设计3对以c-Met为靶基因短发夹RNA片段,p Genesil-1质粒为载体,构建p Genesil-1/c-Met-sh RNA重组质粒,将其转染人脑胶质瘤U251细胞。采用PCR和免疫印迹法分别检测c-Met基因m RNA和蛋白的表达水平。结果成功构建p Genesil-1-c-Met sh RNA重组质粒,并转染至U251细胞。转染重组质粒的U251细胞c-Met基因m RNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 RNA干扰能明显降低U251细胞c-Met基因m RNA和蛋白的表达水平。

关键词：胶质瘤 U251细胞 c-Met基因 RNA干扰