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西安矿业学院学报 1989年第4期9卷 61-66,71页

作者：韩华汪小五西安矿业学院电气工程系

在矢量控制的基础上,采用价格低可靠性好的HEF-4752V组件与8位机相结合的方法对交流异步机进行控制,不但有效地解决了8位机运行速度慢的缺点,而且整个系统具有较好的快速响应和较高的可靠性。

关键词： HEF-4752V 组件矢量控制

肺炎支原体P1-C末端特异性抗原蛋白的制备及其基因分型的研究

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肺炎支原体P1-C末端特异性抗原蛋白的制备及其基因分型的研究

作者：汪小五安徽医科大学

学位级别：硕士

目的研究肺炎支原体(MP)特异性蛋白免疫反应性以及用该蛋白检测合肥地区138份儿童血清样本中相应Ig G抗体的的情况,检测血清样本中细胞因子水平并分析63份肺泡灌洗液MP阳性标本的P1基因型和引起该疾病的危险因素。方法r P1-513蛋白ELIS... 详细信息

目的研究肺炎支原体(MP)特异性蛋白免疫反应性以及用该蛋白检测合肥地区138份儿童血清样本中相应Ig G抗体的的情况,检测血清样本中细胞因子水平并分析63份肺泡灌洗液MP阳性标本的P1基因型和引起该疾病的危险因素。方法r P1-513蛋白ELISA方法:首先培养FH-MP标准菌株,从其培养液中提取基因组DNA,设计特异性引物采用普通PCR技术扩增获得基因r P1-513目的基因。将目的基因先连接到T载体上再连接到PQE-80L表达载体上,利用诱导剂诱导PQE-80L-r P1-513重组菌蛋白表达。12%SDS-PAGE电泳初步确定蛋白表达情况,并扩大培养,纯化r P1-513蛋白。蛋白免疫印迹法来验证纯化r P1-513蛋白免疫反应性。利用r P1-513蛋白作为包被蛋白构建的ELISA方法。儿童血清MP抗体的检测:采用r P1-513蛋白ELISA方法和商业ELISA试剂盒检测儿童血清样本中感染MP的情况,并比较两者的灵敏度和特异性进行分析。细胞因子的测定:血清标本分为感染和未感染MP两组,而感染MP的血清标本进一步分成重症组,轻症组(重症组11人、轻症组13人)。对照组有20名正常儿童,这些儿童与实验组年龄和性别的大致相同。初步检测一下两个实验组血清中白介素8、10和18表达水平的情况,以及感染MP的危险因素。MP肺泡灌洗液标本P1基因分型:收集到的63例儿童的肺泡灌洗液标本提取基因组DNA,筛选出阳性标本,针对阳性标本以基因组DNA为模板通过巢式PCR和多重PCR技术对其基因型进行分析。同时设对照实验组(MP-FH标准菌株)。巢式PCR和多重PCR的扩增的最终基因片段通过DNA片段胶回收试剂盒切胶回收纯化后连接到T载体中制备重组质粒,对重组质粒进行基因测序鉴定。结果①构建了含r P1-513基因的重组质粒,并诱导其表达纯化,经Western blot法检测与感染MP的血清中相应的抗体有免疫反应性,而与未感染MP的血清无反应性。r P1-513蛋白ELISA和商业ELISA试剂盒检测MP抗体的敏感度分别为97.14%和91.42%,两者特异性都为100%。②经SPSS 16.0统计学分析与MP感染的因素有C-反应蛋白,而性别,年龄,白细胞都与其无关。③患有MPP的儿童血清中IL-8、L-10和IL-18水平比正常儿童血清中的IL-8,IL-10和IL-18水平高(P<0.01)。④IL-10在患有严重MPP的患儿血清中的水平比轻症组血清中的表达水平低(P<0.01)。⑤但是IL-18在重症组血清中的水平比轻症组血清中的水平高(P<0.01)。⑥同时实验数据分析也显示IL-8和IL-18都与C-反应蛋白有相关性(r=0.451,P<0.05;r=0.594,P<0.05)。⑦巢式PCR和多重PCR技术扩增检测显示,63例肺泡灌洗液标本中筛查出了15例MP阳性标本,且15例MP阳性标本基因型都为P1-I型,对照组基因型为P1-II型。重组质粒经过测序后进行片段比较验证其扩增条带均正确。结论初步证明r P1-513蛋白具有免疫反应性,且其作为抗原的ELISA法灵敏度和特异性都比较高,同时分析MP感染与C-反应蛋白有关,为临床在血清学上诊断MP都提供了一定的帮助。从实验数据结果分析可初步得出IL-8、L-10和IL-18在儿童感染MPP后表达水平都呈现上升的趋势。IL-10在重症儿童血清中的表达水平比轻症儿童血清中的表达水平低,这可能是自身免疫反应因素影响的结果。有实验结果可总结出:这些细胞因子在MP感染儿童后影响了机体的免疫调节。初步调查结果显示合肥地区感染MP儿童的基因型为P1-I型。

关键词：儿童肺炎支原体特异性的抗原基因型

重型新型冠状病毒肺炎多因素分析及实验室指标的诊断价值

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中国热带医学 2020年第9期20卷 867-870页

作者：金慧高勇朱义朗汪小五阜阳市第二人民医院检验科安徽阜阳236000

目的探讨重型新型冠状病毒肺炎(COVID-19)危险因素及实验室指标对重症患者的诊断价值。方法对普通组和重症组进行单因素分析筛选符合条件(P<0.2)的可疑影响因素;继续对筛选符合条件因素进行Logistics回归多因素分析,评估重症组的独立危... 详细信息

目的探讨重型新型冠状病毒肺炎(COVID-19)危险因素及实验室指标对重症患者的诊断价值。方法对普通组和重症组进行单因素分析筛选符合条件(P<0.2)的可疑影响因素;继续对筛选符合条件因素进行Logistics回归多因素分析,评估重症组的独立危险因素;对普通组和重症组进行实验室指标检测,采用ROC曲线对检测结果进行效能评价。结果两组之间年龄、高血压、糖尿病和武汉居住史差异有统计学意义(P<0.05);武汉居住史(OR=4.609,95%CI:1.219~17.428;P=0.024)是重症COVID-19的独立危险因素;重症组患者LYMPH计数低于普通组患者,而CRP、IL-6高于普通组,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析,LYMPH、CRP、IL-6预测重症COVID-19的AUC分别为0.812、0.844、0.856,特异度和灵敏度分别为(73.68%,83.33%)、(76.32%,83.33%)、(73.68%,87.50%),临界点分别为0.84×10^9/L、36.7 mg/L、23.3 pg/mL。结论年龄、高血压、糖尿病和武汉居住史是COVID-19患者重症化的危险因素;其中武汉居住史为重症患者独立的危险因素;LYMPH、CRP、IL-6联合检测有助于重症COVID-19的诊断。

关键词：新型冠状病毒肺炎重症型多因素分析 C-反应蛋白白细胞介素-6

肺炎支原体P1蛋白的制备及其应用的初步研究

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安徽医科大学学报 2014年第12期49卷 1709-1713页

作者：汪小五曾宪聪陈伟王林定安徽医科大学微生物学教研室合肥230032

目的研究肺炎支原体(MP)特异性抗原免疫反应性及检测合肥地区138份儿童血清样本感染MP的情况,并初步分析其危险因素。方法构建含r P1-513基因的克隆和表达质粒分别命名为T-r P1-513和PQE-80L-r P1-513。诱导PQE-80L-r P1-513重组菌蛋白... 详细信息

目的研究肺炎支原体(MP)特异性抗原免疫反应性及检测合肥地区138份儿童血清样本感染MP的情况,并初步分析其危险因素。方法构建含r P1-513基因的克隆和表达质粒分别命名为T-r P1-513和PQE-80L-r P1-513。诱导PQE-80L-r P1-513重组菌蛋白表达。Western blot法检测其免疫反应性和ELISA法筛选血清样本感染MP的阳性标本。结果 Western blot法检测约30 ku的r P1-513蛋白有免疫反应性。ELISA法筛选出34份阳性血清,同时用商业MP ELISA试剂盒检测出24份阳性血清,两种P1蛋白作为抗原ELISA检测法检出率分别为24.6%和17.4%,且两个检出率差异有统计学意义(P<0.05)。MP感染与C-反应蛋白有显著相关性,但与性别、年龄、白细胞无相关性。结论初步证明r P1-513蛋白具有免疫反应性,且以此蛋白构建的ELISA法有较高的灵敏度和特异性,为临床诊断MP提供一定的帮助。

关键词：肺炎支原体 rP1-513蛋白儿童危险因素

HCMV重组嵌合抗原表达质粒构建及免疫反应的初步鉴定

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安徽医科大学学报 2014年第6期49卷 752-756页

作者：曾宪聪汪小五陈伟王林定安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 安徽医科大学病原与免疫学实验室合肥230032

目的选用人巨细胞病毒(HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒,诱导其表达,纯化目的蛋白;并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列,设计合理引物;各基因片段用Overlap方法连接,并引入... 详细信息

目的选用人巨细胞病毒(HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒,诱导其表达,纯化目的蛋白;并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列,设计合理引物;各基因片段用Overlap方法连接,并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株,经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化,获得目的蛋白,采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白,采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HCMV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒,并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。

关键词：人巨细胞病毒重组融合抗原免疫反应性

哌拉西林他唑巴坦与碳青霉烯类抗菌药物治疗产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌感染的临床疗效对比

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中国现代应用药学 2021年第19期38卷 2411-2418页

作者：武东汪晓娟汪小五汪小英李亚杨振峰梁实慧阜阳市人民医院药剂科安徽阜阳236000 阜阳市第二人民医院检验科安徽阜阳236000 皖南医学院药学院安徽芜湖241002

目的探讨哌拉西林他唑巴坦(piperacillin-tazobactam,PTZ)与碳青霉烯类抗菌药物(carbapenem,CBP)治疗产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBL)大肠埃希菌感染的临床疗效、安全性和药物经济性,为遏制碳青霉烯类耐药细... 详细信息

目的探讨哌拉西林他唑巴坦(piperacillin-tazobactam,PTZ)与碳青霉烯类抗菌药物(carbapenem,CBP)治疗产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBL)大肠埃希菌感染的临床疗效、安全性和药物经济性,为遏制碳青霉烯类耐药细菌的增长提供可行性方案。方法回顾性分析2019年9月—2021年1月阜阳市人民医院检出产ESBL大肠埃希菌,根据目标治疗采用PTZ和CBP分为PTZ组和CBP组,收集患者临床资料包括基础疾病、Charlson合并症评分、Pitt菌血症评分、PTZ的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)、14 d全因死亡率等,采用临床有效率和生存曲线评价2组临床疗效,不良反应发生率和严重程度评价2组治疗方案安全性,最小成本分析法评价2组治疗方案药物经济性,并探讨PTZ治疗失败的危险因素。结果共收集268例患者,产ESBL大肠埃希菌从穿刺液(84例)、尿液(64例)、分泌物(61例)和血液(59例)4种标本类型中检出。与CBP组(n=70)相比,PTZ组(n=198)在临床有效率(76.26%vs 82.86%,P=0.252)、14 d全因死亡率(6.06%vs 11.43%,P=0.138)和药物不良反应发生率(4.54%vs 8.57%,P=0.230)方面,差异无统计学意义,而PTZ治疗方案较CBP治疗方案药品成本低(2035.05元vs 3250.19元,P3分(OR 1.260,95%CI 1.019~1.558,P=0.033)、CCr4μg·m^(−1)(OR 2.723,95%CI 1.238~5.993,P=0.013)、血流感染(OR 4.029,95%CI 1.652~9.827,P=0.002)是PTZ治疗失败的独立危险因素。结论PTZ用于治疗包括血流感染在内的产ESBL大肠埃希菌感染是有效的,且不增加14 d全因死亡率,在获得满意的疗效的同时,可获得最佳的经济效果,但若患者合并以上5种危险因素时,建议调整为CBP或PTZ联合呼吸喹诺酮类或氨基糖苷类抗菌药物。

关键词：哌拉西林他唑巴坦碳青霉烯类抗菌药物超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌血流感染

新型冠状病毒肺炎患者恢复期肛拭子中SARS-CoV-2核酸检测结果评价

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天津医药 2020年第7期48卷 592-595页

作者：汪小五朱义朗李团团高勇安徽省阜阳市第二人民医院检验科 236000

目的分析新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者在恢复期肛拭子标本中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸的检出率及其临床价值。方法对我院确诊的COVID-19患者痰液、咽拭子和肛拭子3种来源的标本同期进行SARS-CoV-2核酸检测。分析3种标本类型的病... 详细信息

目的分析新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者在恢复期肛拭子标本中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸的检出率及其临床价值。方法对我院确诊的COVID-19患者痰液、咽拭子和肛拭子3种来源的标本同期进行SARS-CoV-2核酸检测。分析3种标本类型的病毒核酸阳性率及肛拭子病毒核酸阳性时痰液标本和咽拭子标本中病毒核酸检出情况。结果共收集50例COVID-19患者的156份样本,其中痰液标本41份,检出SARS-CoV-2阳性8份(19.5%);咽拭子标本55份,检出SARS-CoV-2阳性6份(10.9%);肛拭子标本60份,检出SARS-CoV-2阳性11份(18.3%)。50例COVID-19患者在恢复期出现病毒核酸阳性者痰液、咽拭子和肛拭子样本核酸检测阳性分别有8例(19.5%)、6例(12.0%)和10例(20.0%)。10例肛拭子核酸检测阳性患者的呼吸道标本核酸检测显示9例为阴性。结论COVID-19患者恢复期肛拭子SARS-CoV-2核酸阳性检出率较咽拭子和痰液标本检出率稍高。患者恢复期的呼吸道标本SARS-CoV-2核酸连续检测阴性时,应考虑添加肛拭子检测作为出院或者隔离标准。

关键词：肺炎,病毒性冠状病毒属恢复期新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒肛拭子核酸检测

安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究

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安徽医科大学学报 2013年第5期48卷 493-495页

作者：张莹曾宪聪汪小五刘淑均李进王林定安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院输血科合肥230022 安徽省合肥市蜀山区疾病预防控制中心检验科合肥230039 安徽医科大学病原与免疫学实验室合肥230032

目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检... 详细信息

目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检测的1 008份血样中,KSHV抗体的总阳性率为4.3%,其中男为3.9%,女为4.6%。统计学分析结果显示,KSHV感染率没有性别差异,在年龄上也基本无差异。结论在中国安徽北部地区的普通人群KSHV的感染率较低,且KSHV的感染与年龄及性别之间无明显相关性。

关键词：卡波氏肉瘤相关疱疹病毒血清阳性率蚌埠安徽

万古霉素联合哌拉西林他唑巴坦或碳青霉烯类抗菌药物发生急性肾功能损伤的风险对比

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中国医院药学杂志 2023年第16期43卷 1851-1855页

作者：汪晓娟武东汪小五汪小英李亚杨振峰阜阳市人民医院药剂科安徽阜阳236000 阜阳市第二人民医院检验科安徽阜阳236000

目的:评估万古霉素(vancomycin,VAN)联合哌拉西林他唑巴坦(piperacillin-tazobactam,PTZ)或碳青霉烯(carbapenem,CBP)类抗菌药物后急性肾功能损伤(acute kidney injury,AKI)的发生率及危险因素。方法:对2019年1月至2022年8月就诊的接受VAN联合PTZ或CBP患者进行回顾性分析,统计AKI发生率,采用logistic回归分析筛选发生AKI的独立危险因素。结果:共收集310例患者,VAN联合PTZ后AKI发生率显著高于VAN联合CBP(23.08%vs.13.59%,P=0.035),亚组分析显示,VAN联合不同CBP在AKI发生率方面,差异无统计学意义(P=0.545);与VAN联合CBP相比,VAN联合PTZ发生AKI时间提前(2.5 d vs.5.0 d,P=0.009),且肾功能损伤Ⅱ级和Ⅲ级发生率显著增高;VAN联合PTZ(OR:0.501,95%CI:0.267~0.938,P=0.031)、VAN谷浓度>20 mg·L^(-1)(OR:0.595,95%CI:0.454~0.781,P=0.025)和基线Ccr<60 mL·min^(-1)(OR:0.348,95%CI:0.159~0.761,P=0.008)是发生AKI的独立危险因素。结论:与VAN联合CBP相比,VAN联合PTZ增加AKI发生风险,发病时间更早,肾功能损伤更严重。

关键词：急性肾功能损伤万古霉素哌拉西林他唑巴坦碳青霉烯类

KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定

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安徽医科大学学报 2016年第10期51卷 1417-1420页

作者：许常青陈伟方圆汪小五王林定安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 合肥市第三人民医院检验科合肥230000

目的构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORF K15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究。方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe I酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体p CDHCMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将... 详细信息

目的构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORF K15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究。方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe I酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体p CDHCMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将重组慢病毒载体与3种辅助质粒p MDL-PRRE、pRSV-Rev和p MD2.g共转染HEK 293T细胞包装产生慢病毒,Western blot法检测K15P蛋白的表达。结果经酶切及测序鉴定,成功构建慢病毒载体,重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293T细胞可见有荧光表达,说明K15P基因在细胞内有表达并且96 h后产生4×106TU/ml滴度为慢病毒。结论成功构建了KSHV K15P慢病毒表达载体p CDH-CMV-K15P-GFP,获得高效表达K15P基因的慢病毒颗粒,为后续其在细胞内的功能研究奠定实验基础。

关键词：卡波肉瘤相关疱疹病毒 K15P基因慢病毒