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lncRNA相关ceRNA网络在伴海马硬化颞叶癫痫中的作用及机制研究

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lncRNA相关ceRNA网络在伴海马硬化颞叶癫痫中的作用及机制研究

作者：汤旺中南大学

学位级别：硕士

目的:颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)作为成人部分性癫痫最常见的形式,同时也是常见的难治性和耐药性癫痫,一直是癫痫研究热点和重点。海马硬化(hippocampal sclerosis,HS)是耐药性TLE最常见的组织病理学类型,其在耐药性TLE手术... 详细信息

目的:颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)作为成人部分性癫痫最常见的形式,同时也是常见的难治性和耐药性癫痫,一直是癫痫研究热点和重点。海马硬化(hippocampal sclerosis,HS)是耐药性TLE最常见的组织病理学类型,其在耐药性TLE手术患者中发生率约占70%。然而,伴海马硬化颞叶癫痫(TLE with HS,TLEHS)的具体分子发病机制尚不明确。本研究拟从全转录组水平,首次利用TLE-HS患者脑组织,从长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)相关竞争性内源性RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)调控网络的全新角度,探讨TLE-HS的发病机制,为TLE的治疗提供新思路。方法:本研究纳入2014年4月至2017年8月于中南大学湘雅医院神经外科住院行标准海马切除术的6例TLE患者,6例对照组海马标本来自中南大学湘雅医学院的遗体捐献计划。对TLE-HS患者及对照组海马区脑组织进行全转录组测序,确定海马中lncRNA、微小RNA(micro RNA,mi RNA)和信使RNA(messenger RNA,m RNA)的表达水平,筛选差异表达RNA并进行功能分析。通过检索star Base等相关数据库,寻找到lncRNA-mi RNA之间以及m RNAmi RNA之间的关系对,基于差异表达RNA构建lncRNA相关ceRNA网络。最后,对ceRNA网络中的m RNA进行功能分析及蛋白-蛋白互作分析。结果:1、与对照组比较,TLE-HS组筛查出差异表达m RNA 853个(744个上调,109个下调)。功能分析表明,差异表达m RNA富集于甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路、钙离子信号通路、Gn RH信号通路等。2、与对照组比较,TLE-HS组筛查出差异表达lncRNA 1097个(673个上调,424个下调)及1729个差异表达mi RNA(828个上调,901个下调)。3、构建出的TLE-HS患者lncRNA相关ceRNA网络,包含了91个m RNA、51个lncRNA及4个mi RNA,其中mi R-7978、mi R-302d-3p、mi R-302c-3p和mi R-302a-3p是其关键节点。4、功能分析表明,TLE-HS患者lncRNA相关ceRNA网络中差异表达的m RNA与PI3K-Akt信号通路、细胞衰老等相关,蛋白-蛋白互作网络中TP53是其最核心节点。结论:lncRNA相关ceRNA网络与TLE-HS的病理机制相关,可能通过网络中mi R-7978、mi R-302d-3p、mi R-302c-3p和mi R-302a-3p等关键节点调控PI3K-Akt信号通路、细胞衰老等关键生物学通路而发挥作用。图8幅,表8个,参考文献60篇

关键词：颞叶癫痫海马硬化长链非编码RNA 竞争性内源性RNA 网络

面向能效管理的内河船舶机舱远程监测系统研究

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面向能效管理的内河船舶机舱远程监测系统研究

作者：汤旺杰武汉理工大学

学位级别：硕士

针对传统的船舶能效信息记录-报告方式的不足,进行船舶能效远程监测,实现船舶能效智能化记录;针对记录的数据未能有效的指导船舶运营,开展对远程监测数据的研究,提出船舶运营能效管理方法,对船舶节能减排有一定意义。基于GPRS无线通讯... 详细信息

针对传统的船舶能效信息记录-报告方式的不足,进行船舶能效远程监测,实现船舶能效智能化记录;针对记录的数据未能有效的指导船舶运营,开展对远程监测数据的研究,提出船舶运营能效管理方法,对船舶节能减排有一定意义。基于GPRS无线通讯技术、北斗定位技术、嵌入式技术及计算机网络技术,从硬件和软件层面完成船舶运营能效的远程监测系统设计,为内河船舶运营能效提供自动化监测手段。通过远程监测系统采集获取的数据对EEOI(船舶能效运营指数,Energy Efficiency Operation Indicator)和实时船舶能效运营指数(RTEEOI,Real Time Energy Efficiency Operation Inicator)进行计算和分析,提出一种船舶能效管理方法,实现船舶能效等级分级和提升船舶能效管理,具体研究内容如下:(1)对现有船舶运营能效评价指标进行分析,选用EEOI作为船舶运营能效的评价指标,并根据远程监测系统实时性的特点引入RT-EEOI。根据研究目标和船舶运营能效的评价指标确定船舶运营能效监测系统需求,从系统需求出发,完成总体框架设计,在此基础上对船载能效监测仪、船岸数据通信模块、岸基能效监管平台3部分的组成和工作原理进行详细分析。(2)对于船载能效监测仪和船岸数据通讯模块的硬件需求,进行关键器件选型、最小系统电路和外围电路设计。(3)基于船载能效监测仪和岸基能效监管平台软件需求,设计下位软件实现船载能效监测仪的信号采集和传输功能;设计上位软件实现岸基能效监管平台的实时数据显示、存储和用户管理。(4)搭建系统功能测试平台,进行通电测试、功能测试和稳定性测试,并展开了为期31天的船舶运营测试的实船验证,系统运行稳定可靠。通过分析处理实船采集的数据实现船舶运营能效管理,对采集到的数据依据船舶能效评价指标进行计算,通过统计量的方法对计算结果进行船舶运营能效等级分级,并通过实时优化船舶操纵,实现船舶能效等级的不断提升。

关键词：船舶远程监测能效管理 EEOI 船岸通信

锰矿区构树果实多酚差异表达基因与含量变化特征研究

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锰矿区构树果实多酚差异表达基因与含量变化特征研究

作者：汤依旺中南林业科技大学

学位级别：硕士

构树(Broussonetia papyifera)是具有良好经济价值和环境价值的资源植物,构树中的多酚类物质是其药用价值和环境价值重要的贡献成分,目前有关构树多酚类物质的合成特征及分子机制的研究较少。先前研究表明,多酚是植物重要抗逆物质,重金... 详细信息

构树(Broussonetia papyifera)是具有良好经济价值和环境价值的资源植物,构树中的多酚类物质是其药用价值和环境价值重要的贡献成分,目前有关构树多酚类物质的合成特征及分子机制的研究较少。先前研究表明,多酚是植物重要抗逆物质,重金属污染会增强多酚等次级代谢产物的合成。本研究对锰矿区和对照区构树果实进行多酚等代谢产物含量、矿物质含量、抗氧化能力测定和转录组测序,开展构树果实多酚含量变化特征及多酚合成机制相关研究,主要研究结果如下:1.采用福林酚法、铝离子络合法、相对含量法、蒽酮比色法、考马斯亮蓝法分别检测锰矿区与对照区构树青果、微红果及红果中多酚、黄酮、花青素、总糖、总蛋白等代谢物的含量,结果表明多酚含量呈现微红果>红果>青果的特征,对照区黄酮含量随着果实成熟度的增加而减少,锰矿区微红果黄酮含量最高,红果最低,花青素含量随着果实成熟度的增加而增加,总糖含量随着果实成熟度的增加而增加,不同发育阶段的构树果实总蛋白含量无明显差异;与对照区相比,锰矿区构树果实中多酚含量(除微红果外)、花青素含量显著高于对照区,黄酮含量低于对照区,总糖含量、总蛋白含量无显著差异。采用原子吸收光谱法测定锰矿区与对照区构树青果、微红果及红果中钾、钙、镁、锰的含量,结果表明钾含量呈现微红果>青果>红果的特征,钙、锰含量呈现青果>红果>微红果的特征,锰矿区镁含量呈现青果>微红果>红果的特征,对照区青果镁含量最高,微红果最低;与对照区相比,锰矿区构树果实中钾含量显著低于对照区,钙、镁、锰含量均显著高于对照区。采用ABTS、FRAP、DPPH三种方法对锰矿区与对照区构树青果、微红果及红果的抗氧化能力进行评价,结果表明,不同发育阶段构树果实抗氧化能力差别不大,锰矿区构树果实抗氧化能力普遍强于对照区。2.采用高通量测序技术对锰矿区和对照区构树青果、红果进行转录组测序,共获得27.04 Gb Clean Data,其中锰矿区青果(XT-0)、对照区青果(CK-0)、锰矿区红果(XT-100)、对照区红果(CK-100)中分别得到21,185,851、22,811,605、24,414,219、22,202,511 条 Clean reads,Q30 碱基百分比在 92.45%及以上,GC含量在47.02%以上。四组样品测序后经组装共获得46,072条Unigenes,总长度57,512,343 bp。在 XT-0 vs CK-0、XT-100 vs CK-100、XT-0 vs XT-100、CK-0 vs CK-100中分别鉴定出3422、2247、2055、3370个差异表达基因,其中,分别有2989、2053、2451、3016个差异表达基因分别被注释到8个数据库中(NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、egg-NOG、GO 和 Pfam)。进一步对各样品差异表达基因进行GO注释分析,发现不同锰环境下构树果实差异表达基因在逆境响应(Response to stimulus)、解毒作用(Detoxification)、生长(Growth)、信号转导(Signaling)等生物学进程以及抗氧化活性(Antioxidant activity)、转录因子活性(Transcription fator activity)、电子载体活性上(Electron carrier activity)等分子功能上显著富集。进一步对多酚类物质合成通路进行分析,筛选出14个构树果实多酚合成候选基因(CAD、CCR、COMT、CSE、FAOMT、GEDH、MTD、4CL、BGLU、BXYL、CYP、ALDH、CCoAOMT、PAL),8 个构树果实黄酮合成候选基因(ANR、BAHD、CCoAOMT、CHI、CYP、F3H、FLS、CHS)。本研究联合分析锰矿区与对照区构树果实多酚等功能成分含量变化特征,为后续构树资源开发利用提供新思路。利用转录组测序技术,分析锰矿区与对照区的差异表达基因,筛选出几个与构树果实多酚类物质合成相关的候选基因,为后续构树功能基因的发掘利用及构树抗逆调控机制提供参考。

关键词：锰矿区构树多酚转录组分析

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精益生产对JP公司A产品产能提升的研究

精益生产对JP公司A产品产能提升的研究

作者：汤德旺华南理工大学

学位级别：硕士

精益思想和精益生产是由丰田汽车公司在二战以后首创的。根据1990年的资料显示，与相同生产能力的大量生产系统相比，尽管丰田的产品品种多、批量小、质量缺陷少，而它只需要一半的劳动力、一半的制造空间和一半的资本投入、一小部分的... 详细信息

精益思想和精益生产是由丰田汽车公司在二战以后首创的。根据1990年的资料显示，与相同生产能力的大量生产系统相比，尽管丰田的产品品种多、批量小、质量缺陷少，而它只需要一半的劳动力、一半的制造空间和一半的资本投入、一小部分的开发时间和产品制造周期。在制造业利润微薄的今天，全世界的制造业都认可和实践了精益生产少投入多产出的事实，纷纷仿效日本丰田的这种精益生产模式。从日本到美国、到巴西和中国的港台企业，都从精益生产获得了丰厚的回报。中国制造业面临中国加入世界贸易组织的机遇，面临世界经济一体化的挑战，难道不需要降低投入和成本而在竞争的红海中获得一片生存空间吗？如何用较少的人力投入、较少的占用空间、较少的资金投入和较少的生产产品的时间，和较少的质量缺陷而能够精确地满足客户的需求已经成为利润率低下的制造型企业刻不容缓要考虑的问题了。本文以电子合约制造服务型企业（EMS：Electronic Manufacturing Service）---JP公司为例，研究生产中遇到的产能瓶颈问题，利用精益生产方式的核心理论和方法，运用ECRS（取消、合并、重排、简化）技术和5W2H方法，对整个生产过程进行多工序的合并，消除不必要的活动，使停滞时间大大减少;通过对产品快速换型过程的分析，采用外部并行作业，缩短了产品换型中作业准备时间。并通过优化内外部作业，建立了A产品换型的标准流程，减少了产品换型中的不确定性。为精益生产的思想在制造型企业的成功应用指明方向。

关键词：精益思想精益生产精益生产方式产品换型

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雪旺细胞对大鼠视神经保护机制的实验研究

雪旺细胞对大鼠视神经保护机制的实验研究

作者：汤畴旺福建医科大学

学位级别：硕士

目的:观察雪旺细胞(SCs)对大鼠视网膜睫状神经营养因子(CNTF)表达变化的影响,探讨SCs对视网膜神经节细胞(RGCs)的保护机制。方法:双酶消化法分离、培养、纯化大鼠SCs;玻璃体腔内注射SCs,3d后前房灌注法建立大鼠急性高眼压模型;模型建立... 详细信息

目的:观察雪旺细胞(SCs)对大鼠视网膜睫状神经营养因子(CNTF)表达变化的影响,探讨SCs对视网膜神经节细胞(RGCs)的保护机制。方法:双酶消化法分离、培养、纯化大鼠SCs;玻璃体腔内注射SCs,3d后前房灌注法建立大鼠急性高眼压模型;模型建立后第1d、3d、7d、14d、21d采用RT-PCR方法检测大鼠不同时期视网膜CNTFmRNA表达情况;通过免疫组化二步法检测其蛋白水平的表达差异。结果:成功分离、培养了大鼠SCs;建立了急性高眼压模型。RT-PCR结果显示,正常大鼠视网膜组织CNTFmRNA表达微弱,急性高眼压损伤后CNTFmRNA的表达逐渐增强,于损伤后3-7d表达量达到峰值,之后表达量开始下降,DMEM/F12干预组CNTFmRNA的表达变化情况与急性高眼压组相类似,SCs干预组中CNTFmRNA的表达量在每个时间点都高于急性高眼压组和DMEM/F12干预组,各时间点差异均有显著性(P<0.05)。视网膜切片免疫组织化学染色结果与PT-PCR表达相符,染色阳性产物定位显示,在正常大鼠视网膜神经节细胞层(GCL)有少量CNTF阳性产物表达,急性高眼压后表达有所增加,在视网膜GCL、神经纤维层(NFL)、内核层(INL)均可见到CNTF阳性产物,SCs干预组在3d、7d、14d可见CNTF阳性产物在视网膜GCL、NFL、INL、外核层(ONL)染色明显。结论:大鼠急性高眼压后玻璃体腔内注射SCs能使视网膜CNTF的表达水平升高,提示SCs可能在视网膜及视神经损伤的修复过程中发挥了一定的作用。

关键词：雪旺细胞急性高眼压睫状神经营养因子 RT-PCR 免疫组织化学

光动力诱导Lnc-BHLHA15-1调控结肠癌细胞内质网应激与凋亡的作用研究

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光动力诱导Lnc-BHLHA15-1调控结肠癌细胞内质网应激与凋亡的作用...

作者：汤继旺中南大学

学位级别：硕士

目的:探讨Lnc-BHLHA15-1的基本功能及其对结肠癌细胞ERS通路和凋亡的调控作用。方法:(1)在结直肠癌患者手术标本中检测Lnc-BHLHA15-1的表达水平;qRT-PCR检测 DVDMS-PDT处理CX-1细胞后Lnc-BHLHA15-1的表达变化;通过核质分离实验检测CX-1... 详细信息

目的:探讨Lnc-BHLHA15-1的基本功能及其对结肠癌细胞ERS通路和凋亡的调控作用。方法:(1)在结直肠癌患者手术标本中检测Lnc-BHLHA15-1的表达水平;qRT-PCR检测 DVDMS-PDT处理CX-1细胞后Lnc-BHLHA15-1的表达变化;通过核质分离实验检测CX-1细胞和HCT116细胞中Lnc-BHLHA15-1的核质分布比例。(2)构建Lnc-BHLHA15-1的过表达质粒和siRNA,并通过qRT-PCR检测转染效果;通过CCK-8、EdU、克隆形成实验检测其对CX-1和HCT116增殖与活力的影响。(3)通过转染过表达质粒和siRNA的CX-1和HCT116采用划痕实验和Transwell实验检测Lnc-BHLHA15-1对结肠癌细胞迁移的影响。(4)通过Western Blot和qRT-PCR实验检测转染过表达质粒和siRNA的CX-1和HCT116细胞中内质网应激相关蛋白PERK、ATF4、BIP的表达变化。(5)通过Western Blot分析敲低和过表达Lnc-BHLHA15-1的结肠癌细胞系中凋亡相关的caspase-3和caspase-8的活化程度变化。(6)通过RIP实验检测Lnc-BHLHA15-1与DDX3的结合关系;Western Blot实验检测Lnc-BHLHA15-1与DDX3的共表达关系;结直肠癌患者肿瘤标本和癌旁标本检测DDX3的表达变化。结果:(1)在结直肠癌患者的临床标本中,Lnc-BHLHA15-1在癌旁标本中的表达相对高于肿瘤标本(p<0.05);Lnc-BHLHA15-1的表达与DVDMS-PDT呈剂量依赖效应,0.2 μM时可上升15倍(p<0.01);核质分离实验显示在CX-1中的核质分布比为6:4,HCT116中的核质分布比为8:2。(2)两株细胞转染过表达质粒后,Lnc-BHLHA15-1的表达水平显著上升(p<0.01),两株细胞转染siRNA后,Lnc-BHLHA15-1的表达水平被敲降到30%以下;CCK-8、EdU、克隆形成实验的结果显示过表达Lnc-BHLHA15-1能抑制两株结肠癌细胞系的生长。(3)HCT116和CX-1的划痕实验和Transwell实验的结果显示过表达Lnc-BHLHA15-1能抑制结肠癌细胞的迁移能力,而敲低可在一定程度上增加结肠癌细胞的迁移。(4)在过表达 Lnc-BHLHA15-1 的 HCT116 和 CX-1 中,PERK、ATF4、BIP的表达水平被上调,而敲低之后,PERK、ATF4、BIP的表达水平有一定程度的降低。(5)对 HCT116 和 CX-1 过表达 Lnc-BHLHA15-1 后,caspase-3和caspase-8活化水平上升了,敲低之后,呈现相反的趋势。(6)RIP实验结果显示,DDX3与Lnc-BHLHA15-1的结合百分比约为Input组的3%,高于IgG组1%的结合比(p<0.05);过表达Lnc-BHLHA15-1后能上调DDX3的表达;结直肠癌标本DDX3的免疫组化结果显示癌中DDX3的表达低于癌旁标本。结论:Lnc-BHLHA15-1在DVDMS-PDT处理后的结肠癌细胞系CX-1中表达上调,Lnc-BHLHA15-1可上调内质网应激相关的PERK-ATF4信号通路,并可诱导结肠癌细胞凋亡;而DDX3与Lnc-BHLHA15-1结合可能参与调控内质网应激。图8幅,表8个,参考文献55篇

关键词：结肠癌 Lnc-BHLHA15-1 细胞凋亡内质网应激 DDX3