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四种杯状病毒调控宿主免疫类细胞因子表达的研究进展

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中国动物传染病学报 2024年第3期 183-192页

作者：杨洪早朱杰缪秋红汤傲星陈少宇袁莉刚刘光清中国农业科学院上海兽医研究所甘肃农业大学动物医学院

杯状病毒科(Caliciviridae)为无囊膜的单股正链RNA病毒，包含许多对人类和动物健康带来严重威胁的病毒成员。由于该病毒科的大部分成员均不能在体外进行有效增殖，导致杯状病毒的研究相对滞后，虽然已取得了一些重要的进展，但还存在诸... 详细信息

杯状病毒科(Caliciviridae)为无囊膜的单股正链RNA病毒，包含许多对人类和动物健康带来严重威胁的病毒成员。由于该病毒科的大部分成员均不能在体外进行有效增殖，导致杯状病毒的研究相对滞后，虽然已取得了一些重要的进展，但还存在诸多问题亟待解决。基于此，本文综述了目前已证实的人诺如病毒(HuNoV)、鼠诺如病毒(MNV)、猫杯状病毒(FCV)和兔出血症病毒(RHDV)四种常见杯状病毒感染机体后干扰素、白介素、肿瘤坏死因子等免疫类细胞因子的表达水平及其作用机制，以了解免疫类细胞因子与杯状病毒感染的关系。为探讨病毒与宿主免疫系统之间的相互作用机制提供新思路。

关键词：人诺如病毒鼠诺如病毒猫杯状病毒兔出血症病毒免疫类细胞因子作用机制

猫源核糖体蛋白RPS3生物信息学及功能分析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：王笑汤傲星张淼张达朱世强孟春春李传峰朱杰刘光清中国农业科学院上海兽医研究所

核糖体蛋白是细胞中参与蛋白质合成及调控基因表达的一种重要蛋白，不同物种间核糖体存在异质性。因此，为了进一步展开核糖体蛋白基因的结构和功能研究，本研究克隆了猫源40S核糖体蛋白S3基因(RPS3)并构建了真核表达质粒，并借助于生... 详细信息

核糖体蛋白是细胞中参与蛋白质合成及调控基因表达的一种重要蛋白，不同物种间核糖体存在异质性。因此，为了进一步展开核糖体蛋白基因的结构和功能研究，本研究克隆了猫源40S核糖体蛋白S3基因(RPS3)并构建了真核表达质粒，并借助于生物信息学方法初步分析了该蛋白的结构特征。结果显示，该基因cDNA全长为732 bp，编码244个氨基酸；编码蛋白分子量为26 kDa，是一种亲水性的、没有跨膜结构域和信号肽、含有多个糖基化和磷酸化位点的核糖体蛋白；系统发育树构建的结果表明，该基因与小鼠的RPS3基因具有较近的亲缘关系。此外，利用OPP方法确定了瞬时过表达RPS3会抑制细胞内新生蛋白的生成，且抑制猫杯状病毒（FCV）增殖。因此，本研究结果可为猫及其它物种的核糖体蛋白基因的结构和功能研究提供分子基础参考。

关键词：核糖体蛋白猫杯状病毒 RPS3

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α属冠状病毒入侵宿主所需宿主因子研究进展

病毒学报 2024年第1期40卷 215-224页

作者：孙亚娟张达汤傲星袁莉刚刘光清朱杰中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 甘肃农业大学动物医学院兰州310029

属冠状病毒包含众多对畜牧业存在重大威胁的成员,如猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎病毒等。病毒识别细胞表面的受体是感染宿主的第一步。因此,探索冠状病毒感染机制对了解病毒的组织嗜性和宿主谱具有重要意义。... 详细信息

属冠状病毒包含众多对畜牧业存在重大威胁的成员,如猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎病毒等。病毒识别细胞表面的受体是感染宿主的第一步。因此,探索冠状病毒感染机制对了解病毒的组织嗜性和宿主谱具有重要意义。本文系统总结了近年来α属冠状病毒入侵宿主所需的受体和其它辅助性宿主因子的作用机理。

关键词：属冠状病毒功能性受体辅助因子入侵机制

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上海市宠物疫病发生特点及防治建议

中国动物传染病学报 2022年

作者：王笑程松梁留存汤傲星孟春春李传锋朱杰刘光清中国农业科学院上海兽医研究所德国纳博科临中国检验实验室

为了解上海地区宠物疫病发生和流行的特点，本文对来自上海某宠物医院收治的近2000例门诊病例进行了统计和分析。结果表明，在宠物病毒性病例中发病较多的病原有犬瘟热病毒（CDV）、犬冠状病毒（CCV）、猫冠状病毒（FCoV）和猫杯状病毒...

为了解上海地区宠物疫病发生和流行的特点，本文对来自上海某宠物医院收治的近2000例门诊病例进行了统计和分析。结果表明，在宠物病毒性病例中发病较多的病原有犬瘟热病毒（CDV）、犬冠状病毒（CCV）、猫冠状病毒（FCoV）和猫杯状病毒（FCV）；在宠物寄生虫病例中，主要以球虫、跳蚤、耳螨感染为主；在宠物皮肤病病例中，多以细菌或真菌感染病例居多。根据上述统计结果，我们认为病毒性传染病、传染性皮肤病和体表寄生虫感染是当前对宠物健康危害较大的疫病，我们应以此作为宠物疫病重点防控的方向。

关键词：

锌指抗病毒蛋白限制小反刍病毒复制的分子机制

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锌指抗病毒蛋白限制小反刍病毒复制的分子机制

作者：汤傲星中国农业科学院

学位级别：硕士

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR),俗称羊瘟,是由小反刍动物病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起急性、高度传染性的病毒性疾病,主要发生于山羊、绵羊和骆驼等反刍动物。其病原PPRV是副黏病毒科,麻疹病毒属的... 详细信息

小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR),俗称羊瘟,是由小反刍动物病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)引起急性、高度传染性的病毒性疾病,主要发生于山羊、绵羊和骆驼等反刍动物。其病原PPRV是副黏病毒科,麻疹病毒属的成员。PPRV的基因组大小为15948 nt,编码6种结构蛋白和2种非结构蛋白。PPRV在羊源细胞中难以稳定的增殖,导致了PPRV天然免疫和致病机制方面的研究相对滞后。宿主限制因子是天然免疫系统的一部分,是宿主进化形成的抵抗病原微生物感染的早期防线。目前已经发现了多种限制性因子,其中就包括锌指抗病毒蛋白(Zinc finger antiviral protein,ZAP)。ZAP是由ISG ZC3HAV1基因编码表达的一种宿主限制因子,对多种病毒具有明显的抑制作用,在天然免疫过程中发挥了重要作用。目前,关于羊源ZAP(ovis aries ZAP,oZAP)的抗病毒研究较少,尤其是与PPRV感染之间的关系尚未见报道。为此,本论文首先克隆了羊源ZAP,并探索了ZAP在PPRV感染和复制过程中的作用及其分子机制,以其为进一步研究PPRV致病机理以天然免疫机制等提供新的线索。本论文的研究主要包括以下三个方面:1.羊源ZAP的克隆与序列分析:首先,提取羊肺脏总核酸,利用设计的特异性引物,成功扩增出oZAP基因,然后通过生物信息学分析显示oZAP蛋白中丝氨酸(Ser)含量最高,半衰期为30h,属于不稳定的亲水性蛋白;该蛋白不存在信号肽及跨膜结构,存在114个潜在的磷酸化位点和5个糖基化位点,二级结构预测中,参与形成无规则卷曲的氨基酸最多;功能结构域预测发现,该蛋白存在Zinc finger域、WWE域和多聚核糖聚合酶功能域。为进一步研究oZAP蛋白的抗病毒作用提供了有价值的信息。2.oZAP对PPRV增殖的影响:首先,我们构建了oZAP真核表达质粒,然后将该质粒转染Vero-SLAM细胞,使其过量表达oZAP。然后用PPRV感染ZAP过表达细胞系,分别使用RT-PCR、TCID和Western blot等实验方法检测PPRV的增殖水平。结果表明,oZAP的过量表达可以显著抑制PPRV的增殖,并呈现相关剂量依赖性。为了进一步证明oZAP可以限制PPRV的复制,我们利用小RNA干扰技术,将羊子宫内膜细胞(EEC)中的oZAP表达予以沉默,然后再以PPRV感染该细胞。再同样利用上述检测方法检测PPRV的增殖水平,结果发现PPRV的增殖水平要明显高于对照组。因此,我们认为oZAP是一种对PPRV增殖具有明显抑制作用限制性细胞因子。3.oZAP抑制PPRV增殖的分子机制研究:利用双荧光素酶报告基因系统和RNA电泳迁移率迁移分析(REMSA)实验技术,我们发现oZAP能够与PPRV结构蛋白(N蛋白、P蛋白、M蛋白和F蛋白)编码基因的的5′UTR相互作用;进一步研究我们还发现将oZAP与PPRV蛋白的重组质粒共同转染EEC,N、P、H、V和C的表达水平明显降低,而且呈现剂量依赖性关系,证明oZAP能在翻译水平抑制PPRV。通过质谱分析和共聚焦显微镜观察,我们还发现oZAP与PPRV P蛋白相互作用,并在细胞中存在共定位现象。综上所述,本论文成功克隆和表达了羊源ZAP蛋白,首次用试验证明oZAP对PPRV的增殖具有明显抑制作用,并且发现oZAP可能是通过抑制病毒的转录和翻译等多种机制来限制PPRV在细胞中的增殖。该研究为后续研究PPRV的致病机理和天然免疫机制提供了重要线索。

关键词：小反刍兽疫病毒锌指抗病毒蛋白限制因子天然免疫相互作用

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核糖体蛋白调控病毒生命周期的研究进展

中国动物传染病学报 2022年第6期30卷 173-180页

作者：郭宏元朱杰缪秋红汤傲星戚睿斌唐井玉杨洪早刘光清中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

病毒是一种基因组比较小,仅编码自身结构蛋白和一些重要的与复制相关的非结构蛋白的细胞内寄生物。为了完成其生命周期,它还需要劫持宿主细胞内的一些蛋白或细胞因子,以组装成病毒的复制或翻译机器。其中,核糖体蛋白(RPs)就是病毒经常... 详细信息

病毒是一种基因组比较小,仅编码自身结构蛋白和一些重要的与复制相关的非结构蛋白的细胞内寄生物。为了完成其生命周期,它还需要劫持宿主细胞内的一些蛋白或细胞因子,以组装成病毒的复制或翻译机器。其中,核糖体蛋白(RPs)就是病毒经常劫持的一类宿主蛋白,被用来组装病毒的“翻译机器”。本文即对近年来关于RPs在病毒蛋白翻译中的调控作用研究进展做一综述。

关键词：核糖体蛋白病毒感染调控作用

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绵羊ZAP基因克隆与生物信息学分析

中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 179-184页

作者：汤傲星王勇董丹丹缪秋红朱杰戚睿斌郭宏元刘光清中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 安徽农业大学动物科技学院合肥230000

锌指抗病毒蛋白(ZAP)是一种重要的宿主限制性因子,能够抑制多种病毒的增殖。为研究绵羊ZAP(oZAP)的生物信息学特征和对该蛋白功能进行预测,本研究通过PCR扩增oZAP基因,其长度为2697 bp,编码898个氨基酸;生物信息学分析显示oZAP蛋白中丝... 详细信息

锌指抗病毒蛋白(ZAP)是一种重要的宿主限制性因子,能够抑制多种病毒的增殖。为研究绵羊ZAP(oZAP)的生物信息学特征和对该蛋白功能进行预测,本研究通过PCR扩增oZAP基因,其长度为2697 bp,编码898个氨基酸;生物信息学分析显示oZAP蛋白中丝氨酸(Ser)含量最高,半衰期为30 h,属于不稳定的亲水性蛋白;该蛋白不存在信号肽及跨膜结构,存在114个潜在的磷酸化位点和5个糖基化位点,二级结构预测中,参与形成无规则卷曲的氨基酸最多;功能结构域预测发现,该蛋白存在锌指域、WWE域和多聚核糖聚合酶功能域。本研究为进一步研究oZAP蛋白的抗病毒作用提供了有价值的信息。

关键词：绵羊 oZAP 生物信息学分析

猫源C11orf96基因表达及其在细胞中的定位分析

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畜牧兽医学报 2022年第7期53卷 2390-2395页

作者：杨洪早朱杰郭宏元汤傲星陈少宇刘春草张达袁莉刚刘光清甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

本研究旨在通过克隆猫源C11orf96(Felis catus C11orf96,fC11orf96)基因,并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位。以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因,并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a(+)-fC11orf96-Fe。随后将重... 详细信息

本研究旨在通过克隆猫源C11orf96(Felis catus C11orf96,fC11orf96)基因,并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位。以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因,并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a(+)-fC11orf96-Fe。随后将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达fC11orf96-Fe重组蛋白,并利用该重组蛋白制备多克隆抗体。最后利用Western blot及间接免疫荧光试验分析多克隆抗体的有效性及其细胞定位。结果表明,成功获得猫C11orf96基因CDS序列,全长372 bp,可编码124个氨基酸,表达的fC11orf96-Fe蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白大小约49 ku。由该重组蛋白制备的多克隆抗体能够识别细胞内源性fC11orf96蛋白和外源真核表达蛋白,并且发现fC11orf96蛋白定位于细胞质。本研究成功克隆得到猫C11orf96基因,并且fC11orf96蛋白定位于细胞质,为后续研究C11orf96的生物学功能奠定了基础。

关键词： C11orf96 基因克隆多克隆抗体亚细胞定位

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干扰素刺激基因15抗病毒感染的分子机制

中国动物传染病学报 2023年第6期31卷 170-176页

作者：唐井玉杜汉宇贾楠楠汤傲星刘春草朱杰孟春春李传峰刘光清中国农业科学院上海兽医研究所小动物传染病预防与控制创新团队上海200241 新疆农业大学乌鲁木齐830052

干扰素刺激基因15(ISG15)是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa的泛素样蛋白。在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中,ISG15是诱导最强烈、最快的ISG蛋白之一。研究表明,ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。此外,ISG15在调节... 详细信息

干扰素刺激基因15(ISG15)是由病原微生物或干扰素诱导产生的一种大小为15 kDa的泛素样蛋白。在干扰素诱导的数百个干扰素刺激基因中,ISG15是诱导最强烈、最快的ISG蛋白之一。研究表明,ISG15对多种病毒具有抗病毒作用。此外,ISG15在调节宿主损伤、DNA修复,调节信号通路及抗原递呈中也发挥着重要的作用。文章介绍了ISG15的概况,并阐述了近年来ISG15在抗病毒、免疫调节和调节宿主信号通路过程中的作用。

关键词：干扰素刺激基因15 抗病毒作用免疫调节