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复方苦参合剂HPLC指纹图谱建立及质量控制研究

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湖北中医药大学学报 2024年第3期 36-40页

作者：陈思迪唐佩莉杨思成黄菊岳凤芹彭伟孙婉瑾范恒李森段雪云湖北中医药大学湖北省中医院/湖北中医药大学附属医院/湖北省中医药研究院华中科技大学同济医学院附属协和医院

目的建立复方苦参合剂的HPLC指纹图谱，并测定其有效成分苦参碱、氧化苦参碱、没食子酸、甘草苷、甘草酸的含量，为制剂的质量控制提供实验依据。方法采用Green ODS-AQ C18色谱柱（4.6mm×250mm,5m），以乙腈-0.5%磷酸溶液进行梯度洗... 详细信息

目的建立复方苦参合剂的HPLC指纹图谱，并测定其有效成分苦参碱、氧化苦参碱、没食子酸、甘草苷、甘草酸的含量，为制剂的质量控制提供实验依据。方法采用Green ODS-AQ C18色谱柱（4.6mm×250mm,5m），以乙腈-0.5%磷酸溶液进行梯度洗脱，流速1mL/min，检测波长为235nm；采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”对10批制剂的指纹图谱进行相似度评价，对比对照品与样品中各个峰的保留时间确定制剂中主要特征峰的化学成分，通过分析初步确定制剂中各味成分的归属，采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）对测定结果进行识别，并对制剂中的苦参碱、氧化苦参碱、没食子酸、甘草苷、甘草酸进行含量测定。结果考察了复方苦参合剂HPLC指纹图谱的精密度、重复性及稳定性，结果均良好，相似度评价中10批复方苦参合剂的指纹图谱相似度为0.822～0.983，标定出31个共有峰，并指认出5个主要特征峰，分别为苦参碱、氧化苦参碱、没食子酸、甘草苷、甘草酸。通过PCA可将10批复方苦参合剂分成3类，可看出不同产地、不同批次药材之间的质量存在差异，进一步采用OPLS-DA筛选出差异成分。结论建立复方苦参合剂的指纹图谱方法稳定可靠，相较于现有质量标准中含量测定方法，该方法更佳，可作为复方苦参合剂质量控制的参考指标，为复方苦参合剂的质量控制及临床用药方面的研究提供实验依据。

关键词：复方苦参合剂高效液相色谱指纹图谱质量控制

UPLC-Q-TOF-MS联合网络药理学和实验验证分析桃红四物汤治疗软组织损伤的作用机制

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中国中药杂志 2021年第12期46卷 3043-3051页

作者：王伟军段雪云汪伟湖北中医药大学第一临床学院湖北武汉430061 湖北省中医院湖北武汉430061 湖北省中医药研究院湖北武汉430074

基于UPLC-Q-TOF-MS技术、网络药理学和实验验证方法探讨桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction, THSWD)治疗软组织损伤(soft tissue injury, STI)的作用机制。采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定THSWD化学成分;通过TCMSP数据库筛选THSWD活性成分及靶蛋白;Cytoscape软件构建“活性成分-靶点-通路”网络,STRING数据库进行蛋白互作分析;GeneCards和CTD数据库筛选STI相关靶点;DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析;构建软组织损伤大鼠模型,通过蛋白免疫印迹法探讨THSWD对大鼠软组织损伤相关通路关键靶点的影响。筛选得到THSWD活性成分40种,潜在作用靶点141个,与STI相关靶点交集20个。活性成分作用靶点富集分析得到128条KEGG通路,主要富集在氨基酸合成与代谢、疾病信号通路、细胞凋亡、炎症等相关的通路。对“活性成分-靶点-通路”网络进行可视化分析,得到THSWD作用于STI的5种关键活性成分和6个关键蛋白。蛋白免疫印迹法实验结果表明,THSWD可以显著降低大鼠STI样本中细胞凋亡蛋白酶-3(CASP3)和B细胞κ轻肽基因增强子核因子1(NFKB1)的蛋白表达及磷酸化水平,降低前列腺素G/H合酶2(PTGS2)蛋白表达,增强细胞肿瘤抗原p53(TP53)蛋白表达。UPLC-Q-TOF-MS、网络药理学和实验验证结果表明,THSWD中活性成分可能通过调控NF-κB信号通路及细胞凋亡通路中的关键蛋白,发挥抗炎、抗氧化应激的作用,从而发挥治疗STI的作用。

关键词：桃红四物汤网络药理学软组织损伤 UPLC-Q-TOF-MS 信号通路炎症

高效液相色谱法测定桦褐孔菌4种成分含量及不同部位含量比较

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医药导报 2023年第3期42卷 339-345页

作者：段雨晴朱田密陈树和段雪云王思萌湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中医院/湖北中医药大学附属医院药事部武汉430061 湖北省中医药研究院武汉430074

目的评价桦褐孔菌药材质量,建立高效液相色谱(HPLC)法测定桦褐孔菌药材中4种成分含量,并比较不同部位4种成分含量的差异。方法采用HPLC法测定桦褐孔菌中栓菌酸、桦褐孔菌醇、麦角甾醇、羊毛甾醇含量,并对桦褐孔菌药材黑褐色外壳和内部... 详细信息

目的评价桦褐孔菌药材质量,建立高效液相色谱(HPLC)法测定桦褐孔菌药材中4种成分含量,并比较不同部位4种成分含量的差异。方法采用HPLC法测定桦褐孔菌中栓菌酸、桦褐孔菌醇、麦角甾醇、羊毛甾醇含量,并对桦褐孔菌药材黑褐色外壳和内部黄色菌肉中4种成分含量进行比较。色谱柱为Agilent 5 TC-C 18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃;以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1);检测波长为203,282 nm;进样量:20μL。采用SPSS23.0版统计软件对不同产地桦褐孔菌药材进行聚类分析,对内外两部位含量进行统计学分析。结果4种成分在各自浓度范围内线性关系良好(r≥0.9997);平均加样回收率分别为101.79%,102.96%,101.12%和101.37%,RSD分别为2.35%,2.25%,2.27%和2.13%(n=6);精密度、重复性、稳定性(24 h)实验RSD均<3.0%(n=6);23批桦褐孔菌药材中栓菌酸、桦褐孔菌醇、麦角甾醇、羊毛甾醇含量范围分别为0.3830~3.5234,0.7412~6.4903,0.1288~0.6997,0.6289~4.0533 mg·g^(-1);聚类分析可将23批样品分为3类。桦褐孔菌药材内部菌肉中麦角甾醇、羊毛甾醇含量高于黑褐色外壳,而栓菌酸、桦褐孔菌醇含量在桦褐孔菌内外两部位之间差异无统计学意义。结论所建立的含量测定方法重复性、稳定性、可操作性良好,可为桦褐孔菌药材的质量控制提供参考。

关键词：桦褐孔菌栓菌酸桦褐孔菌醇麦角甾醇羊毛甾醇含量测定高效液相色谱法

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乳香及其炮制品挥发性成分及颜色的差异研究

中国现代应用药学 2023年第18期40卷 2526-2534页

作者：黄菊谢四芳唐佩莉杨思成陈树和严劲松孙婉瑾段雪云湖北中医药大学武汉430065 湖北省中医院(湖北中医药大学附属医院) 武汉430061 湖北省中医药研究院武汉430074

目的通过GC-MS对乳香、醋乳香、灯心草炒乳香挥发性成分进行定性定量分析,通过RGB模型对三者颜色进行定量研究,为乳香及其炮制品主观评价指标提供辅助参考。方法提取乳香、醋乳香、灯心草炒乳香挥发油,通过GC-MS结合主成分分析、正交偏... 详细信息

目的通过GC-MS对乳香、醋乳香、灯心草炒乳香挥发性成分进行定性定量分析,通过RGB模型对三者颜色进行定量研究,为乳香及其炮制品主观评价指标提供辅助参考。方法提取乳香、醋乳香、灯心草炒乳香挥发油,通过GC-MS结合主成分分析、正交偏最小二乘-判别式法进行综合分析,探究三者挥发性成分的差异;采集乳香、醋乳香、灯心草炒乳香图像信息,利用RGB模型进行各炮制品表面颜色定量研究,统计三者颜色差异。结果三者气味的差异可能与挥发油中萜类、醇类化合物的含量与种类相关,尤其是芳樟醇、正辛醇。三者颜色测定结果,灯心草炒乳香R*76.86%~85.49%,G*61.96%~70.59%,B*38.04%~45.88%;醋乳香R*56.86%~61.57%,G*38.04%~41.96%,B*27.45%~30.59%;乳香R*69.41%~74.51%,G*56.86%~62.35%,B*40.78%~47.06%;经t检验,三者颜色测定结果具显著性差异,与相应标准记载中乳香“黄白色”、醋乳香“黄棕色”、灯心草炒乳香“金黄色”的差异吻合,表明该模型准确、可靠。结论对乳香、醋乳香、灯心草炒乳香进行挥发性成分、颜色的差异研究,为乳香及其炮制品的性状描述提供参考,避免传统主观评价引起的误差。

关键词：乳香炮制 GC-MS 主成分分析正交偏最小二乘-判别式法 RGB颜色模型

桦褐孔菌药材的薄层色谱鉴别和HPLC指纹图谱建立及化学模式识别分析

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中国药房 2023年第1期34卷 52-56页

作者：段雨晴朱田密陈树和段雪云王思萌湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中医院/湖北中医药大学附属医院/湖北省中医药研究院药事部武汉430061

目的建立桦褐孔菌药材的薄层色谱鉴别方法和高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别分析评价桦褐孔菌药材的质量。方法采用薄层色谱法对桦褐孔菌药材中的栓菌酸、桦褐孔菌醇进行定性鉴别;建立桦褐孔菌药材的HPLC指纹图谱,根... 详细信息

目的建立桦褐孔菌药材的薄层色谱鉴别方法和高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别分析评价桦褐孔菌药材的质量。方法采用薄层色谱法对桦褐孔菌药材中的栓菌酸、桦褐孔菌醇进行定性鉴别;建立桦褐孔菌药材的HPLC指纹图谱,根据《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》确定共有峰并进行相似度评价;采用SPSS 23.0软件和SIMCA14.1软件对22批桦褐孔菌药材的指纹图谱数据进行化学模式识别分析(聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析)。结果薄层色谱鉴别结果显示,供试品色谱和对照品色谱在相应位置上显相同颜色斑点。22批桦褐孔菌药材的HPLC指纹图谱共有10个共有峰,相似度为0.942~0.995;指认出3号峰为栓菌酸,4号峰为桦褐孔菌醇,9号峰为麦角甾醇,10号峰为羊毛甾醇。聚类分析结果显示,S1~S15、S19、S21、S22聚为第1类,S16~S18、S20聚为第2类。主成分分析结果显示,综合得分排名前4位的样品分别为S17、S18、S16、S20。正交偏最小二乘法-判别分析结果显示,以变量重要性投影(VIP)值>1为标准,筛选出4号峰(桦褐孔菌醇,VIP值=1.86)、3号峰(栓菌酸,VIP值=1.62)、7号峰(VIP值=1.27)3个影响桦褐孔菌药材质量的标志性成分。结论成功建立了桦褐孔菌药材的薄层色谱鉴别方法及HPLC指纹图谱,结合化学模式识别分析可为桦褐孔菌药材的质量控制提供参考。

关键词：桦褐孔菌薄层色谱法指纹图谱高效液相色谱法化学模式识别分析

清肺排毒汤水煎液中4种不同水溶解度有效成分的转移率研究

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医药导报 2023年第3期42卷 346-352页

作者：闫斌陈树和段雪云陈洪燕朱田密段雨晴湖北省中医院药事部武汉430061 湖北中医药大学附属医院药事部武汉430061 湖北省中医药研究院中药研究所武汉430074

目的测定清肺排毒汤水煎液中4种不同水溶解度有效成分的转移率,为其质量控制研究和临床应用提供依据。方法建立3种高效液相色谱(HPLC)条件测定编号S1~S10清肺排毒汤水煎液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷含量,并测定这4... 详细信息

目的测定清肺排毒汤水煎液中4种不同水溶解度有效成分的转移率,为其质量控制研究和临床应用提供依据。方法建立3种高效液相色谱(HPLC)条件测定编号S1~S10清肺排毒汤水煎液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、黄芩苷含量,并测定这4种成分在所归属饮片中的含量,计算4种成分由饮片至水煎液的转移率,从4种成分中筛选水煎液质量控制的指标成分。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱转移率为40.99%~52.01%;苦杏仁苷转移率为13.78%~27.68%;黄芩苷转移率为2.67%~6.35%,4种成分转移率差异有统计学意义(P<0.05),水煎液中4种成分含量均在安全有效范围内,盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱可作为其质量控制指标成分。结论该研究可为清肺排毒汤水煎液的质量控制和临床应用提供参考依据。

关键词：清肺排毒汤水煎液水溶解度含量测定转移率

HPLC测定乌梅饮片中熊果酸和齐墩果酸的含量

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中成药 2006年第7期28卷 982-984页

作者：段雪云许腊英毛维伦范恒湖北中医学院湖北武汉430061 华中科技大学协和医院湖北武汉430022

目的：HPLC法同时测定乌梅饮片中熊果酸、齐墩果酸的含量。方法：采用高效液相色谱法，流动相：甲醇旬．2％乙酸铵（80：20），流速1mL／min；检测波长214nm。结果：熊果酸在0．885—8．85μg（r=0．9997），齐墩果酸在0．366～1．830μ... 详细信息

目的：HPLC法同时测定乌梅饮片中熊果酸、齐墩果酸的含量。方法：采用高效液相色谱法，流动相：甲醇旬．2％乙酸铵（80：20），流速1mL／min；检测波长214nm。结果：熊果酸在0．885—8．85μg（r=0．9997），齐墩果酸在0．366～1．830μg（r=0．9999）范围内线性关系良好，平均回收率分别为熊果酸101．5％（RSD=1．4％），齐墩果酸99．64％（RSD=1．1％）。净乌梅中熊果酸和齐墩果酸含量分别为0．6132‰和0．2182‰，乌梅炭中熊果酸和齐墩果酸含量分别为0．3620‰和0．1113‰。结论：本方法操作简便，定量准确，可作为乌梅饮片的质量控制标准。

关键词： HPLC 乌梅饮片熊果酸齐墩果酸含量测定

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缬草中的两个新的萜类化合物(英文)

中国天然药物 2009年第4期7卷 270-273页

作者：周颖方颖龚占峰段雪云刘焱文湖北省中药资源与中药化学重点实验室湖北中医学院武汉430061

目的:对缬草(Valeriana officinalis L.)的化学成分进行研究。方法:采用多种色谱层析技术进行分离并采用现代波谱技术解析各化合物的结构。结果:得到缬草新萜醇(4β,10α,15-三羟基香木兰烷)(1)和缬草单酯A(kanokoside A的苷元)(2)2个... 详细信息

目的:对缬草(Valeriana officinalis L.)的化学成分进行研究。方法:采用多种色谱层析技术进行分离并采用现代波谱技术解析各化合物的结构。结果:得到缬草新萜醇(4β,10α,15-三羟基香木兰烷)(1)和缬草单酯A(kanokoside A的苷元)(2)2个新化合物,另有8个已知化合物分别为鳞盖红菇醇(3)、山山山(4)、松脂醇(5)、缬草烯山(6)、β-谷甾醇(7)、kanokosideA(8)、青刺尖木脂醇苷(9)和8-羟基松脂醇苷(10)。结论:化合物1～4均为首次从该植物中分离得到;其中缬草新萜醇、缬草单酯A为2个新的天然产物。

关键词：缬草缬草新萜醇 4β,10α,15-三羟基香木兰烷缬草单酯A

基于高效液相色谱指纹图谱技术的养血利尿颗粒物质相关性的评价

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中国医院药学杂志 2023年第13期43卷 1484-1488页

作者：谢四芳杨思成唐佩莉黄菊段雪云孙婉瑾范恒湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中医院/湖北中医药大学附属医院药事部湖北武汉430061 华中科技大学同济医学院附属协和医院中西结合科湖北武汉430022

目的:建立养血利尿颗粒的高效液相色谱指纹图谱(HPLC),为其质量控制提供依据。方法:采用Agilent Eclipse Plus C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以0.4%磷酸-乙腈进行梯度洗脱,进样量10μL,柱温35℃,流速为0.3 mL·min^(-1),检测波长... 详细信息

目的:建立养血利尿颗粒的高效液相色谱指纹图谱(HPLC),为其质量控制提供依据。方法:采用Agilent Eclipse Plus C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以0.4%磷酸-乙腈进行梯度洗脱,进样量10μL,柱温35℃,流速为0.3 mL·min^(-1),检测波长为254 nm。运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)分别对10批养血利尿颗粒和10批中间品的相似度进行评价,指认了颗粒对照指纹图谱中的部分色谱峰并确定每个共有峰的药材归属;通过比对单味饮片、中间品和颗粒色谱图中标志性成分群的转移评价其物质相关性;运用化学模式识别方法中的聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)寻找养血利尿颗粒批间差异的关键性成分。结果:10批颗粒和中间品的相似度分别都在0.9以上,颗粒对照指纹图谱标定出28个共有峰并指认出其中10个成分;成品颗粒与中间品对照指纹图谱基本一致,物质相关性良好;CA和PCA将10批养血利尿颗粒聚为3类,OPLS-DA寻找出10个差异性成分,这些成分可能是导致养血利尿颗粒批间差异的关键因素。结论:该方法能快速、准确地评价养血利尿颗粒的饮片、中间品、成品之间的相关性,可用于养血利尿颗粒的质量控制。

关键词：养血利尿颗粒高效液相色谱指纹图谱物质相关性化学模式识别