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GPC3蛋白结构的分析及其表达纯化

分子诊断与治疗杂志 2024年第4期16卷 751-755页

作者：梁锦慧苏静怡龚鑫邱伟鹏崔锡平赵肃清广东工业大学生物医药学院广东广州510006

目的了解GPC3蛋白结构,构建GPC3蛋白的原核表达纯化系统,高效表达和纯化出GPC3蛋白。方法从GenBank中获取基因序列,通过Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件对GPC3蛋白(25-554 aa)的结构进行分析。从不同载体和菌株中筛选出相对优... 详细信息

目的了解GPC3蛋白结构,构建GPC3蛋白的原核表达纯化系统,高效表达和纯化出GPC3蛋白。方法从GenBank中获取基因序列,通过Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL等在线软件对GPC3蛋白(25-554 aa)的结构进行分析。从不同载体和菌株中筛选出相对优势的组合,优化其表达条件,并诱导表达TrxA-GPC3融合蛋白,通过包涵体的溶解和复性、亲和层析、标签切割和分子筛纯化等方法分离纯化出无TrxA标签的GPC3蛋白。结果GPC3蛋白的相对分子质量为60.26 kDa,等电点为5.76,不稳定系数为41.27,脂肪系数为83.66,平均亲水系数为-0.312,是不稳定的亲水性蛋白,其主要为α-螺旋和无规则卷曲结构,引入标签的TrxA-GPC3融合蛋白比GPC3蛋白更稳定。通过对比筛选出表达效率较高的BL21(DE3)-pET32a-GPC3工程菌,其在0.5%的葡萄糖浓度和0.1 mmol/L的IPTG浓度条件下,结合20℃的诱导温度及16 h的诱导时间,可显著提高蛋白表达量,通过亲和层析得到纯度90%以上的TrxA-GPC3融合蛋白,利用凝血酶将TrxA标签切除,最后通过分子筛纯化得到单一的GPC3蛋白。结论利用生物信息学分析了GPC3蛋白的理化性质和结构,并在原核系统中成功表达和纯化了GPC3蛋白,为高特异性抗体的制备或筛选以及结构-功能研究奠定了基础,同时也为其它蛋白的表达纯化提供科学的指导意义。

关键词：肝细胞癌 GPC3蛋白生物信息学亲和层析

双歧杆菌四联活菌对SAP大鼠肠屏障功能的影响和相关作用机制的研究

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双歧杆菌四联活菌对SAP大鼠肠屏障功能的影响和相关作用机制的研究

作者：梁锦慧右江民族医学院

学位级别：硕士

目的:通过建立牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)伴肠功能衰竭模型,观察大鼠血清胃动素、胃泌素、二胺氧化酶、D-乳酸的变化情况,探讨双歧杆菌四联活菌对SAP大鼠肠黏膜屏障功能的影响及可能的作用机制... 详细信息

目的:通过建立牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)伴肠功能衰竭模型,观察大鼠血清胃动素、胃泌素、二胺氧化酶、D-乳酸的变化情况,探讨双歧杆菌四联活菌对SAP大鼠肠黏膜屏障功能的影响及可能的作用机制,评价在SAP动物模型中双歧杆菌四联活菌对肠功能障碍的防治作用,为SAP伴肠功能衰竭者补充微生态营养治疗提供理论基础。方法:(1)将体重为200-250g的24只雄性Wistar大鼠随机分成3组:益生菌组、模型组及空白组,每组8只大鼠;(2)益生菌组大鼠造模前7天至造模后24h予双歧杆菌四联活菌片0.75g BID,模型组大鼠造模前7天至造模后24h予玉米片0.75g BID,益生菌组及模型组大鼠采用经胰胆管逆行缓慢注射3.5%牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型;(3)造模24小时后麻醉动物后取材,大鼠心脏取血5ml,取全血检测血白细胞计数,离心后取血清检测C-反应蛋白、淀粉酶水平,ELISA法测定血清胃动素、胃泌素、二胺氧化酶、D-乳酸水平,取胰腺组织行病理切片、HE染色,判断SAP是否造模成功及观察胰腺损伤程度;(4)以上收集到的数据运用SPSS27.0软件进行统计处理。符合正态分布的计量资料采用(x±s)表示,组间比较用单因素方差分析,两两比较用最小有意义差别法(LSD法);不符合正态分布的计量资料用M(P25,P75)表示,两组间比较均采用非参数秩和检验。当P<0.05时认为数据的差异具有统计学意义。结果:(1)胰腺病理结果:空白组:胰腺小叶结构完整,小叶间隙正常,腺泡、导管及胰岛清晰可见,细胞排列紧密,腺泡细胞可见点状细胞核,未见出血、坏死。模型组:可见胰腺小叶结构模糊不清,分叶消失,小叶间隙明显水肿、增宽,部分腺泡细胞核碎裂或溶解消失,出现大片凝固性坏死,坏死胰腺组织周围可见单核细胞及中性粒细胞等炎细胞浸润,部分区域有脂肪液化坏死,间质小血管壁出血坏死,大量红细胞溢出。益生菌组:胰腺组织结构大体可见,小叶结构稍紊乱,可见小叶间隙增宽、水肿,程度较模型组轻,腺泡细胞肿胀,尚可见肿胀的细胞核,部分胰腺细胞坏死,无脂肪液化坏死,炎细胞浸润程度较模型组明显减弱。(2)益生菌组及模型组白细胞计数与空白组相比明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,益生菌组白细胞计数显著降低(P<0.01);(3)益生菌组及模型组C-反应蛋白浓度与空白组相比显著升高(P<0.01),与模型组相比,益生菌组C-反应蛋白浓度明显降低(P<0.01);(4)与空白组相比,模型组血清淀粉酶浓度显著升高(P<0.01);与模型组相比,益生菌组血清淀粉酶浓度明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);(5)模型组与空白组相比血清胃动素浓度明显降低(P<0.01),与模型组相比,益生菌组血清胃动素浓度明显升高(P<0.05);(6)与空白组相比,模型组血清胃泌素浓度显著升高(P<0.05),与模型组相比,益生菌组血清胃泌素浓度明显降低(P<0.05);(7)与空白组相比,益生菌组及模型组血清二胺氧化酶浓度显著升高(P<0.05),与模型组相比,益生菌组血清二胺氧化酶浓度明显降低(P<0.05);(8)益生菌组及模型组D-乳酸浓度与空白组相比明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,益生菌组D-乳酸浓度显著降低(P<0.01)。结论:(1)双歧杆菌四联活菌片可减轻SAP大鼠病理损伤及炎症反应,起到保护胰腺组织作用;(2)益生菌组大鼠MLT浓度高于模型组大鼠,GAS浓度低于模型组大鼠,考虑双歧杆菌四联活菌片可改善SAP大鼠胃肠功能,其机制与调节MLT、GAS分泌有关;(3)益生菌组大鼠DAO、D-LA浓度低于模型组大鼠,考虑双歧杆菌四联活菌对SAP大鼠肠屏障功能具有保护作用。

关键词：双歧杆菌四联活菌重症急性胰腺炎肠屏障功能作用机制

双歧杆菌四联活菌对重症急性胰腺炎肠屏障功能的影响和相关作用机制研究

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右江民族医学院学报 2023年第6期45卷 940-943,953页

作者：梁锦慧尹毅霞覃月秋梁秋利陆俞安右江民族医学院研究生学院广西百色533000 广西分子病理学(肝胆疾病)重点实验室广西百色533000 右江民族医学院临床医学院广西百色533000

重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)常伴肠功能衰竭,会诱发机体出现多器官障碍综合征,因此肠功能衰竭被认为是SAP死亡的起始环节。大量研究发现SAP肠功能衰竭与肠屏障功能障碍密切相关,机制可能与肠道缺血及再灌注损伤、胃... 详细信息

重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)常伴肠功能衰竭,会诱发机体出现多器官障碍综合征,因此肠功能衰竭被认为是SAP死亡的起始环节。大量研究发现SAP肠功能衰竭与肠屏障功能障碍密切相关,机制可能与肠道缺血及再灌注损伤、胃肠动力障碍和肠道菌群紊乱等相关。目前研究发现应用益生菌治疗SAP伴肠屏障功能障碍者有显著疗效。双歧杆菌四联活菌为目前应用广泛的复合益生菌制剂,通过调节胃肠道的微生态环境,对肠道的机械、化学、免疫及生物屏障均有保护作用,对改善肠功能衰竭有显著效果。本文通过回顾性分析双歧杆菌四联活菌治疗SAP的相关文献,对双歧杆菌四联活菌影响SAP肠屏障功能相关机制、疗效进行综述。

关键词：双歧杆菌四联活菌重症急性胰腺炎肠屏障功能发病机制

胆汁酸与肠道菌群在原发性硬化性胆管炎中的作用及相关机制研究进展

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右江医学 2023年第3期51卷 280-284页

作者：梁秋利尹毅霞梁锦慧覃金丹右江民族医学院附属医院消化内科广西百色533000 右江民族医学院研究生学院广西百色533000 广西分子病理学〔肝胆疾病〕重点实验室广西百色533000

原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种相对少见、复杂的肝病,特征为肝内、外胆管发生炎症,逐渐纤维化使管腔狭窄、胆汁慢性淤积,最终进展为肝纤维化,甚至肝功能衰竭。其发病率和患病率在不同地区呈现不同的分... 详细信息

原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种相对少见、复杂的肝病,特征为肝内、外胆管发生炎症,逐渐纤维化使管腔狭窄、胆汁慢性淤积,最终进展为肝纤维化,甚至肝功能衰竭。其发病率和患病率在不同地区呈现不同的分布。PSC患者可能没有明显症状,也可能有瘙痒、乏力、右上腹疼痛、复发性胆管炎或门静脉高压后遗症。

关键词：原发性硬化性胆管炎胆汁酸谱肠道菌群肝脏酶学肝肠轴

不同剂量熊去氧胆酸治疗原发性硬化性胆管炎的研究进展

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右江医学 2023年第4期51卷 370-374页

作者：梁锦慧尹毅霞梁秋利黄珍珍右江民族医学院附属医院消化内科广西百色533000 右江民族医学院研究生学院广西百色533000

原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种以特发性肝内外胆管炎症和纤维化导致多灶性胆管狭窄为特征、慢性胆汁淤积病变为主要临床表现的自身免疫性肝病[1-3]。PSC的病因和发病机制尚未明确,可能与疏水性胆汁酸... 详细信息

原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种以特发性肝内外胆管炎症和纤维化导致多灶性胆管狭窄为特征、慢性胆汁淤积病变为主要临床表现的自身免疫性肝病[1-3]。PSC的病因和发病机制尚未明确,可能与疏水性胆汁酸的毒性作用、免疫因素以及遗传因素有关。有研究报道PSC与炎症性肠病密切相关,尤其是溃疡性结肠炎[4-5]。

关键词：熊去氧胆酸原发性硬化性胆管炎治疗效果治疗剂量

高中英语课堂评价现状调查研究 ——以秦皇岛市某高中为例

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高中英语课堂评价现状调查研究 ——以秦皇岛市某高中为例

作者：梁锦如河北科技师范学院

学位级别：硕士

近年来,随着教育评价改革的逐步深化,课堂评价作为学校教育评价中的重要一环,受到越来越多的关注。《普通高中英语课程标准》(2017年版2020年修订)强调要发挥评价促进学生学习的作用,引导学生学会设立学习目标、调整学习方式、监控学习... 详细信息

近年来,随着教育评价改革的逐步深化,课堂评价作为学校教育评价中的重要一环,受到越来越多的关注。《普通高中英语课程标准》(2017年版2020年修订)强调要发挥评价促进学生学习的作用,引导学生学会设立学习目标、调整学习方式、监控学习进程。虽然英语教师开始重视课堂评价,但是课堂评价仍然存在评价方法单一、学生在评价中处于被动地位等问题。因此,本研究对高中英语课堂评价的现状进行调查研究,以了解课堂评价的实施现状、存在的问题和原因。本研究以秦皇岛市某中学高一年级198名学生和五位教师作为研究对象,运用课堂观察、问卷调查和访谈的研究方法,对高中英语课堂评价现状进行调查研究,旨在解决三个问题:第一,高中英语课堂评价的现状如何?存在哪些问题?第二,高中英语课堂评价现存问题产生的原因有哪些?第三,如何优化高中英语课堂评价?通过数据的分析与讨论,本研究得出以下结论:(1)高中英语课堂评价总体处于中等水平,其中教师的课堂评价行为处于高等水平,学生自我评价行为和同伴互评行为处于中等水平。具体而言,教师的课堂评价存在评价信息的收集方式单一、课堂评价内容不够丰富、教师的课堂有效反馈有待提高的问题;学生自我评价存在缺乏明确的英语学习目标、缺乏自我反思的方法与策略的问题;学生的同伴互评存在缺乏同伴互评的标准、同伴互评气氛不活跃的问题。(2)高中英语课堂评价现存问题产生的原因包括:第一,应试教育和教师的课堂评价素养影响教师的课堂评价质量。第二,学生的评价意识和能力限制自我评价的实施。第三,学生的评价认识和实践机会制约同伴互评的落实。(3)可通过以下对策优化高中英语课堂评价:第一,提高教师的课堂评价素养。第二,加强学生的自我评价技能训练。第三,构建良好的同伴互评环境。

关键词：高中英语教学课堂评价

我国中学数学学科素养的百年演进及启示 ——基于课程标准（教学大纲）的文本分析

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我国中学数学学科素养的百年演进及启示 ——基于课程标准（教学...

作者：梁锦敏广州大学

学位级别：硕士

课程标准是教育改革的基石,对教师的教学方法和学生的学习路径起着引导作用。在数学教育领域,2017年发布的高中数学课程标准引入了“核心素养”理念,激起了对数学素养能力的广泛关注。尽管中学数学课程标准经历了百年的演变,但在素养培... 详细信息

课程标准是教育改革的基石,对教师的教学方法和学生的学习路径起着引导作用。在数学教育领域,2017年发布的高中数学课程标准引入了“核心素养”理念,激起了对数学素养能力的广泛关注。尽管中学数学课程标准经历了百年的演变,但在素养培养方面的深入研究尚不充分,特别是对其历史发展脉络缺乏系统的梳理。本研究致力于填补这一空白,通过分析近百年中学数学课程标准,探讨数学学科素养在这些课程标准中如何展现和演进,旨在为未来中学数学课程标准的制定和完善提供切实的建议。本文的研究步骤如下:首先,回顾“课程标准”“中学数学课程标准”以及“数学学科素养”等领域的相关国内外文献,总结现有研究成果并得出启示;其次,搜集、研读自1902年以来颁布的48份中学数学课程标准,探讨我国中学数学课程标准的历史发展背景及其演变轨迹,并分析课程标准结构的发展规律。接着,将中学数学课程标准划分为目标文本、内容文本和建议文本这三类文本,运用NLPIR-master工具对三类文本内容进行特征词权重分析,揭示四个发展阶段的演变规律。此外,本研究依据PISA2021数学素养评估框架和5C素养模型,将学科素养划分为基础素养、领域素养、高阶素养和通用素养四大类别,针对课程标准文本中学科素养进行编码和统计,深入探讨课程标准文本中蕴含的学科素养特征和发展规律。最后,统计分析课标三类文本中学科素养的比重,对比同一阶段内不同文本间的学科素养比重,探讨目标、内容和建议文本的学科素养分布的合理性,研究三者之间的一致性程度。研究发现,中国中学数学课程标准百年演进历程与国家教育体系现代化紧密相连,数学学科素养的培养经历了从“重视基础知识和技能传授”到“强调全面发展和创新能力”的重要转变。尽管数学教育在基础素养方面取得了显著进步,但在高阶素养和通用素养的培养上仍存在不足。此外,研究还发现了课程标准文本之间在素养培养上的不一致性,这可能会对教学实施和学生学习成效产生不利影响。基于此,研究提出了未来课程标准制定应更加注重素养培养的均衡性、一致性和连贯性,以确保教学目标与实践的有效对接,促进学生在数学学科素养各方面的全面发展,更好地满足新时代对人才的培养需求。

关键词：中学数学课程标准数学学科素养文本分析

超临界CO辅助聚对苯二甲酸乙二醇酯/聚对苯二甲酸丁二酯珠粒发泡

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高分子材料科学与工程 2024年

作者：陈先娇梁锦涵胡圣飞湖北工业大学绿色轻工材料湖北省重点实验室湖北工业大学电气与电子工程学院

聚对苯二甲酸丁二酯（PBT）与聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）化学结构相似，熔融温度相近且结晶速率、熔体强度等性能互补等特点在PET/PBT合金化方面得到广泛应用。采用扩链剂乙烯-丙烯酸甲酯共聚物接枝甲基丙烯酸缩水甘油酯（EMA-g-GMA... 详细信息

聚对苯二甲酸丁二酯（PBT）与聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）化学结构相似，熔融温度相近且结晶速率、熔体强度等性能互补等特点在PET/PBT合金化方面得到广泛应用。采用扩链剂乙烯-丙烯酸甲酯共聚物接枝甲基丙烯酸缩水甘油酯（EMA-g-GMA）和碳纳米管（CNTs）协同改性PET/PBT，并通过超临界CO2浸渍辅助发泡制备PET/PBT发泡珠粒。结果表明，EMA-g-GMA（EG）的加入起到了扩链增容效果，提高了体系交联度和黏弹性；CNTs的加入有效提高了体系稳定性和黏度，并延缓了PET/PBT基体的降解；EG和CNTs的加入使可发泡温度从260 ℃降至200 ℃，泡孔分布趋于均匀，泡孔结构得到改善；在260 ℃下，平均泡孔尺寸从4.4 μm降至3.37 μm，泡孔密度从3.06×109cm-3提高至5.32×109cm-3；相比于PET/PBT，PET/PBT/EG，PET/PBT/CNTs和PET/PBT/EG/CNTs的拉伸强度分别提高了97%，67.6%和79.3%，断裂伸长率分别提高了93.4%，57.4%和80.3%。

关键词：聚对苯二甲酸乙二醇酯聚对苯二甲酸丁二酯碳纳米管乙烯-丙烯酸甲酯共聚物接枝甲基丙烯酸缩水甘油酯珠粒发泡

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基于动态综合评价的面板数据聚类方法

统计与决策 2024年第6期40卷 45-49页

作者：梁锦玲邓光明桂林理工大学理学院广西桂林541006 桂林理工大学应用统计研究所广西桂林541006

面板数据聚类需要考虑指标维度和时间维度信息,文章尝试从动态综合评价的角度提取面板数据的指标维度和时间维度信息。利用“纵横向”拉开档次法对面板数据进行动态综合评价,得到体现样本水平高低的指标维度综合评价值;运用具有速度特... 详细信息

面板数据聚类需要考虑指标维度和时间维度信息,文章尝试从动态综合评价的角度提取面板数据的指标维度和时间维度信息。利用“纵横向”拉开档次法对面板数据进行动态综合评价,得到体现样本水平高低的指标维度综合评价值;运用具有速度特征的动态综合评价模型对样本增量速度进行综合评价,得到体现样本波动大小和变化趋势的时间维度综合评价值;最后,对两个维度综合评价值进行系统聚类。实例分析的结果表明所提方法的聚类效果更优。

关键词：面板数据动态综合评价指标维度时间维度聚类分析