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大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白多克隆抗体的制备与应用

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2024年第4期52卷 21-27页

作者：王若瑄罗霞李宁求林强牛银杰梁红茹付小哲吕爱军天津农学院水产学院天津300384 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室广东广州510380

【目的】制备大口黑鲈蛙虹彩病毒主衣壳(MCP)蛋白兔多克隆抗体,以期为该病毒蛋白功能研究奠定基础。【方法】对pET32a(+)MCP/BL21重组大肠杆菌进行诱导表达,将重组蛋白进行纯化、复性,以此为抗原免疫大耳兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗... 详细信息

【目的】制备大口黑鲈蛙虹彩病毒主衣壳(MCP)蛋白兔多克隆抗体,以期为该病毒蛋白功能研究奠定基础。【方法】对pET32a(+)MCP/BL21重组大肠杆菌进行诱导表达,将重组蛋白进行纯化、复性,以此为抗原免疫大耳兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,间接免疫荧光试验(IFA)和Western Blot法分析MCP多克隆抗体的特异性。【结果】纯化的MCP重组蛋白条带特异;间接ELISA结果显示,制备的兔多克隆抗体血清效价为1∶1024000;IFA和Western Blot检测结果表明该多抗特异性良好,能够与大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白发生特异性反应,IFA试验表明血清最适稀释度为1∶500。【结论】成功制备了大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP兔多克隆抗体,该抗体可特异性识别大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白。

关键词：大口黑鲈蛙虹彩病毒主衣壳蛋白多克隆抗体

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鳜弹状病毒N蛋白与鳜c-Myc互作调控谷氨酰胺代谢机制

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水产学报 2024年第5期48卷 56-64页

作者：张秋爽叶彩媚牛银杰林强梁红茹罗霞李宁求付小哲中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc (Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制，本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白，初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白)；Co-IP结果显示，SCRV的N蛋白与Sc-c-My... 详细信息

为了研究鳜弹状病毒(SCRV)如何调控鳜c-Myc (Sc-c-Myc)进而调控谷氨酰胺代谢的分子机制，本研究通过免疫共沉淀联合蛋白质谱寻找可能与Sc-c-Myc互作的病毒蛋白，初步分析确定为核衣壳蛋白(N蛋白)；Co-IP结果显示，SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc存在相互作用。通过PCR扩增获得了带有Flag标签序列的SCRV-N基因的ORF片段，并构建了SCRV-N蛋白过表达载体pcDNA-N-Flag；将pcDNA-N-Flag质粒转染鳜脑组织细胞系(CPB细胞系)，荧光共定位结果显示，Sc-c-Myc与SCRV-N在细胞质内存在共定位现象；通过逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)和免疫印记(Western blot)检测转染pcDNA-N-Flag的CPB细胞系中Sc-c-Myc及谷氨酰胺代谢通路关键酶(GLS1、GDH和IDH2)的表达变化，发现Sc-c-Myc、GLS1的转录水平和蛋白水平均显著上调。综上表明，SCRV的N蛋白与Sc-c-Myc互作促进Sc-c-Myc的表达，进而调控宿主细胞谷氨酰胺代谢途径，为SCRV防控提供了新的靶点。

关键词：鳜鳜弹状病毒(SCRV) 鳜c-Myc 蛋白互作谷氨酰胺代谢

大口黑鲈弹状病毒Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2024年第4期46卷 379-384页

作者：孔明慧梁红茹李宁求林强牛银杰罗霞马宝福付小哲上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院珠江水产研究所农村农业部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术与绿色养殖重点实验室广东广州510380

为建立快速、敏感的大口黑鲈弹状病毒(MSRV)流行株Taq Man荧光定量PCR (qPCR)方法,本研究采用NCBI分析MSRV流行株N基因的保守序列,设计特异性引物和Taq Man探针,以构建的并经PCR和测序鉴定正确的重组质粒标准品p MD18-MSRV-N为模板,通... 详细信息

为建立快速、敏感的大口黑鲈弹状病毒(MSRV)流行株Taq Man荧光定量PCR (qPCR)方法,本研究采用NCBI分析MSRV流行株N基因的保守序列,设计特异性引物和Taq Man探针,以构建的并经PCR和测序鉴定正确的重组质粒标准品p MD18-MSRV-N为模板,通过优化各反应条件初步建立MSRV的Taq Man q PCR检测方法。结果显示,建立的Taq Man q PCR方法标准曲线的R2为0.9906,质粒标准品在6.79×10^(8)拷贝/μL~6.79×10^(2)拷贝/μL范围内与Ct值均存在较好的线性关系。采用该方法检测MSRV及相关病毒,评估该方法的特异性,结果显示,该方法可以特异性检测MSRV,而草鱼出血病病毒、神经坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、大口黑鲈双RNA病毒、鳜蛙虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、石斑鱼虹彩病毒、大口黑鲈蛙虹彩病毒等8种常见鱼类病毒检测结果均为阴性;采用建立的方法检测不同浓度的质粒标准品(6.79×10^(8)拷贝/μL~6.79×10^(1)拷贝/μL),评估该方法的敏感性,结果显示,该方法的检测限为6.79×10^(2)拷贝/μL,比文献中的常规PCR方法敏感1 000倍;以不同批次或同一批次提取的不同浓度的质粒标准品作为模板,分别利用该方法检测,评估该方法的重复性,结果显示,该方法批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。采用该方法和文献中的常规PCR同时检测71份临床发病的大口黑鲈、鳜鱼、鲮鱼组织样品,结果显示阳性率为16.9%(12/71),阴性率为83.1%(59/71),且阳性样品均是从发病大口黑鲈的组织样品中检测到,而发病的鳜鱼、鲮鱼组织样品中均未检测到该病毒;常规PCR方法的阳性率为9.9%(7/71),阴性率为90.1%(64/71),二者的总符合率为93.0%。本研究建立的MSRV Taq Man q PCR方法特异性强、敏感性高、重复性和准确性均较好,可用于大口黑鲈临床样品的检测,为MSRV的快速检测提供了可行的技术手段。

关键词：大口黑鲈弹状病毒 Taq Man荧光定量PCR N基因

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纳米酶在农业方向的研究进展

仲恺农业工程学院学报 2024年第1期37卷 67-73页

作者：马宝福付小哲林强牛银杰罗霞梁红茹李宁求中国水产科学研究院珠江水产研究所广东广州510380 农业农村部渔用药物创制重点实验室广东广州510380 广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室广东广州510380

纳米酶作为一种具有类酶活性的新型纳米材料,在抗逆改良、食品检测、食品加工与保鲜、植物保护和种子处理等方向具有广泛的应用前景.文章对纳米酶的定义、分类及其在农业方向的应用进行了综述,对目前存在的问题进行了探讨,并对其未来的... 详细信息

纳米酶作为一种具有类酶活性的新型纳米材料,在抗逆改良、食品检测、食品加工与保鲜、植物保护和种子处理等方向具有广泛的应用前景.文章对纳米酶的定义、分类及其在农业方向的应用进行了综述,对目前存在的问题进行了探讨,并对其未来的发展方向进行了展望.

关键词：农业食品纳米酶

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大口黑鲈蛙病毒分子流行病学及组织病理分析

水产学报 2022年第6期46卷 1063-1073页

作者：杨展展林强付小哲罗霞刘礼辉梁红茹牛银杰左绍志张晓婷李宁求上海海洋大学水产与生命学院中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

为探讨大口黑鲈蛙病毒(LMBV)的分子流行规律及在感染后的组织病理变化，实验对2019—2021年采集的723份患病大口黑鲈样品进行荧光定量PCR (qPCR)检测。结果显示，LMBV的阳性率为63.62%，挑选阳性样品接种鳜脑细胞(Chinese perch brain c... 详细信息

为探讨大口黑鲈蛙病毒(LMBV)的分子流行规律及在感染后的组织病理变化，实验对2019—2021年采集的723份患病大口黑鲈样品进行荧光定量PCR (qPCR)检测。结果显示，LMBV的阳性率为63.62%，挑选阳性样品接种鳜脑细胞(Chinese perch brain cells,CPB)，共获得93株LMBV。通过对分离株MCP、ATP酶、DNA聚合酶和甲基转移酶基因进行PCR扩增与测序分析，发现上述基因在LMBV分离株中均保守，其中MCP、ATP酶基因一致性均为100.0%、甲基转移酶基因一致性为99.7%～100.0%、DNA聚合酶基因一致性为99.8%～100.0%。选取1株LMBV毒株感染健康大口黑鲈，采用qPCR方法对不同组织中的病毒载量进行检测，结果显示，大口黑鲈蛙病毒在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃、肠和脑等组织中均有分布，人工感染LMBV后的前5天病毒载量逐步升高；感染后第5天，心脏中病毒载量最高(9.5×10~5个/mg拷贝)，脑组织中病毒载量最低(2.9×10~2个/mg拷贝)。组织病理结果表明，LMBV可导致大口黑鲈多种组织坏死，其中肝脏、肾脏和心脏病变较为严重，典型病理特征包括肝细胞排列紊乱、肝窦扩张、核质疏散；肾组织细胞疏散、巨噬细胞破裂；心室外膜纤维坏死等。实验结果可为大口黑鲈蛙病毒病防控提供参考。

关键词：大口黑鲈蛙病毒分子流行病学组织病理荧光定量PCR (qPCR)

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狂犬病毒体内移行研究进展

中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1107-1110页

作者：梁红茹谭业平江飚张靖郭霄峰华南农业大学兽医学院微生物学与免疫学教研室广州510642

狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus, RV)引起的一种高度致死性中枢神经系统感染的疾病,在我国曾一度得到有效的控制,但是近年来该病疫情又有抬头和回升的趋势~([1-2]).针对存世已有4000余年的狂犬病至今仍"可防不可治"的特点:首... 详细信息

狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus, RV)引起的一种高度致死性中枢神经系统感染的疾病,在我国曾一度得到有效的控制,但是近年来该病疫情又有抬头和回升的趋势~([1-2]).针对存世已有4000余年的狂犬病至今仍"可防不可治"的特点:首先应该加大安全、高效,廉价狂犬病新型疫苗的研究,扩大犬只免疫覆盖率；此外,深入狂犬病毒致病机制的研究也是极其重要的一面,这不仅为解决"不可治"问题开辟途径,而且也为诊断和更加有效预防该病提供坚实的理论支撑.

关键词：狂犬病毒体内移行中枢神经系统感染免疫覆盖率新型疫苗致病机制致死性

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鳜传染性脾肾坏死病毒研究进展

基因组学与应用生物学 2017年第3期36卷 976-984页

作者：胡松李宁求付小哲林强刘礼辉梁红茹广东省水产动物免疫技术重点实验室农业部渔用药物创制重点实验室中国水产科学研究院珠江水产研究所广州510380 华中农业大学水产学院武汉430070 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心武汉430070

自1994年以来,鳜传染性脾肾坏死病毒病每年给我国鳜养殖业造成数亿元的经济损失,严重制约着鳜鱼养殖业的发展,目前已被列为国际兽医局(International Epizootic Office,OIE)申报疫病。其病原传染性脾肾坏死病毒因广泛的宿主范围和极高... 详细信息

自1994年以来,鳜传染性脾肾坏死病毒病每年给我国鳜养殖业造成数亿元的经济损失,严重制约着鳜鱼养殖业的发展,目前已被列为国际兽医局(International Epizootic Office,OIE)申报疫病。其病原传染性脾肾坏死病毒因广泛的宿主范围和极高的致死率,越来越得到研究者的关注。本综述对近年来有关传染性脾肾坏死病毒的病原特性、功能基因、检测方法和疫苗研制等研究进行概述、归纳与简评,旨在为鳜传染性脾肾坏死病毒研究提供借鉴。

关键词：鳜传染性脾肾坏死病毒功能基因检测方法疫苗

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浅谈大口黑鲈无病毒亲本选育技术

海洋与渔业 2023年第2期 96-97页

作者：余明海林强付小哲罗霞梁红茹牛银杰李宁求邓德基仲恺农业工程学院动物科技学院中国水产科学研究院珠江水产研究所广东德权渔业发展有限公司

大口黑鲈,近年来正如火如荼地在全国推广养殖,据《2022中国渔业统计年鉴》统计,2021年全国养殖产量已突破70万吨.目前苗种繁育企业、养殖户平均育苗成活率不足10%;其中,亲鱼产卵期间的损耗成为直接导致苗种繁育企业亏损的主要原因.如何... 详细信息

大口黑鲈,近年来正如火如荼地在全国推广养殖,据《2022中国渔业统计年鉴》统计,2021年全国养殖产量已突破70万吨.目前苗种繁育企业、养殖户平均育苗成活率不足10%;其中,亲鱼产卵期间的损耗成为直接导致苗种繁育企业亏损的主要原因.如何做好后备亲鱼选择以及亲鱼产前营养强化、减少亲鱼损耗、增加产卵数量,公开研究报道较少.

关键词：企业亏损育苗成活率苗种繁育后备亲鱼大口黑鲈养殖产量中国渔业统计亲本选育

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核酸适配体及其在病原微生物学中的应用

生物工程学报 2011年第5期27卷 698-703页

作者：梁红茹杨松涛张涛胡桂秋夏咸柱吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

核酸适配体指利用指数富集配体系统进化技术筛选出的寡聚核苷酸片段,它可以特异性地识别靶标并与之结合,已经广泛应用于基础研究、临床诊断、纳米技术等。以下综述了适配体在微生物学方面的应用。

关键词：适配体病毒细菌指数富集配体系统进化技术