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褐菖鲉稚鱼对柴油污染的行为和生理响应

中国环境科学 2023年第5期43卷 2622-2631页

作者：田梦佳郭浩宇沈雨欣张晓锋田阔柴学军张鼎元张秀梅浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 浙江省海洋水产研究所浙江舟山316021

为研究柴油水溶性组分对褐菖鲉稚鱼行为反应和胆碱酯酶活性的影响,本研究以我国东海区典型的近岸岩礁性鱼类褐菖鲉为研究对象,以近岸海水本底调查的石油烃浓度为参考,探讨了不同浓度船用燃料油(0#柴油水溶性组分,DWSF)对褐菖鲉稚鱼行为... 详细信息

为研究柴油水溶性组分对褐菖鲉稚鱼行为反应和胆碱酯酶活性的影响,本研究以我国东海区典型的近岸岩礁性鱼类褐菖鲉为研究对象,以近岸海水本底调查的石油烃浓度为参考,探讨了不同浓度船用燃料油(0#柴油水溶性组分,DWSF)对褐菖鲉稚鱼行为活跃性、探索性及捕食能力的影响,并结合鳃的组织学变化与神经传递相关酶活性变化探究了石油类污染对褐菖鲉稚鱼的毒性效应.结果表明,当海水中DWSF浓度增加时,褐菖鲉稚鱼的探索性与活跃性均呈现先升高后降低的趋势.当DWSF浓度超过四类海水标准时(>0.30mg/L),稚鱼的行为活跃性受到明显抑制,捕食能力显著降低;通过组织学观察发现,当DWSF浓度达到0.45mg/L时,稚鱼的鳃组织会出现明显的病变和损伤,与神经传递相关的胆碱酯酶活性受到明显抑制,死亡率升高.综上可知,海水柴油污染能够引发褐菖鲉稚鱼的行为异常,显著降低其活饵捕食成功率,推断神经和呼吸系统功能受损可能是引发其行为异常的重要原因.为确保褐菖鲉等近岸岩礁性鱼类幼体的正常生长发育,海水中DWSF浓度应控制在0.45mg/L以下.

关键词：褐菖鲉行为组织学胆碱酯酶死亡率

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小黄鱼海豚链球菌的分离鉴定

中国预防兽医学报 2022年第7期44卷 725-730页

作者：徐伟施慧汪玮张鼎元许文军柴学军浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室浙江舟山316021

为探究浙江舟山地区网箱养殖小黄鱼暴发的以眼球突出、眼周充血、内脏出血等为特征症状的疾病病因,本研究采集发病小黄鱼的脑及内脏病变组织制作病理切片,观察结果显示,病鱼的脑、肝、脾、肾组织损伤严重,主要表现为淤血、细胞空泡变性... 详细信息

为探究浙江舟山地区网箱养殖小黄鱼暴发的以眼球突出、眼周充血、内脏出血等为特征症状的疾病病因,本研究采集发病小黄鱼的脑及内脏病变组织制作病理切片,观察结果显示,病鱼的脑、肝、脾、肾组织损伤严重,主要表现为淤血、细胞空泡变性、散在坏死,炎性细胞浸润等病理变化。将组织碎片于常规细菌培养基(TSA)和血琼脂培养基上划线培养,进行病原分离,结果显示,从患病鱼的脑和头肾组织中均分离到同一优势菌株DB2009001。经形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA 基因扩增及序列分析,并结合随机扩增多态性 DNA(RAPD)分型试验及海豚链球菌 lctO 基因的检测,确定菌株 DB2009001 为 Ⅰ 型海豚链球菌。毒力基因的 PCR 检测结果显示,DB2009001 同时携带海豚链球菌的 7 种毒力基因(pgmA、scpI、simA、cpsD、sagA、pdi、cfi)。药敏试验结果显示,菌株 DB2009001 对四环素类、喹诺酮类、β 内酰胺类、氯霉素类等药物敏感,对氨基糖苷类药物不同程度耐药。动物回归试验结果显示,菌株DB2009001可感染健康小黄鱼并引起死亡,对其半数致死剂量(LD)为1.66×10^(3)cfu/g,感染小黄鱼表现出与自然发病类似的症状,并从濒死的鱼体内再次分离到相同的菌株,表明菌株DB2009001为该养殖场小黄鱼暴发性疾病的致病菌。本研究首次报道了海豚链球菌能够感染小黄鱼,为小黄鱼链球菌病的防治提供了依据。

关键词：小黄鱼海豚链球菌毒力基因药敏试验致病性

柴油水溶性组分对褐菖鲉稚鱼行为反应和胆碱酯酶活性的影响

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中国环境科学 2022年

作者：田梦佳郭浩宇沈雨欣张晓锋田阔柴学军张鼎元张秀梅浙江海洋大学水产学院浙江省海洋水产研究所

石油类污染是我国近岸海洋环境面临的主要污染类型之一，对近岸鱼类有着较强的致毒效应.为研究柴油水溶性组分对褐菖鲉稚鱼行为反应和胆碱酯酶活性的影响，本研究以我国东海区典型的近岸岩礁性鱼类褐菖鲉为研究对象，以近岸海水石油烃... 详细信息

石油类污染是我国近岸海洋环境面临的主要污染类型之一，对近岸鱼类有着较强的致毒效应.为研究柴油水溶性组分对褐菖鲉稚鱼行为反应和胆碱酯酶活性的影响，本研究以我国东海区典型的近岸岩礁性鱼类褐菖鲉为研究对象，以近岸海水石油烃浓度本底调查为参考，探讨了不同浓度船用燃料油(0#柴油水溶性组分，DWSF)对褐菖鲉稚鱼行为活跃性、探索性及捕食能力的影响，并结合鳃的组织学变化与神经传递相关酶活性变化探究了石油类污染对褐菖鲉稚鱼的毒性效应.结果表明，当海水中DWSF浓度增加时，褐菖鲉稚鱼的探索性与活跃性呈现先增加后减弱的趋势.当DWSF浓度超过四类海水标准时(>0.30 mg·L-1)，稚鱼的行为活跃性受到明显抑制，捕食能力显著降低;通过组织学观察发现，当DWSF浓度达到0.45 mg·L-1时，稚鱼的鳃组织会出现明显的病变和损伤，与神经传递相关的胆碱酯酶活性受到明显抑制，死亡率显著升高.综上可知，海水柴油污染能够引发褐菖鲉稚鱼的行为异常，显著降低其活饵捕食成功率，推断神经和呼吸系统功能受损可能是引发其行为异常的重要原因.为确保褐菖鲉等近岸岩礁性鱼类幼体的正常生长发育，海水中DWSF浓度应控制在0.45 mg·L-1以下.

关键词：褐菖鲉行为组织学胆碱酯酶死亡率

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杜仲叶免疫调节机制的网络药理学分析及验证

畜牧兽医学报 2023年第1期54卷 403-413页

作者：崔恩慧薛玉环李辞霞王帅朱晓岩柴学军赵善廷西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 西安医学院基础医学部西安710021

基于网络药理学及小鼠免疫抑制模型方法探讨杜仲叶免疫调节的作用机制。该研究通过TCMSP数据库筛选出3个杜仲叶活性成分,Uniprot和Swiss Target数据库预测到306个相关联的靶基因,经与OMIM、GeneCards数据库对比,获得105个免疫失调与杜... 详细信息

基于网络药理学及小鼠免疫抑制模型方法探讨杜仲叶免疫调节的作用机制。该研究通过TCMSP数据库筛选出3个杜仲叶活性成分,Uniprot和Swiss Target数据库预测到306个相关联的靶基因,经与OMIM、GeneCards数据库对比,获得105个免疫失调与杜仲叶的交集基因,通过Cytoscape3.8.2软件构建“活性成分-基因”网络。利用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(PPI),CytoNCA进行网络拓扑学分析,筛选出21个核心靶点,并对核心靶点进行基因本体(GO)富集分析与KEGG通路分析。结果发现,杜仲叶中的山奈酚、槲皮素、绿原酸等主要化合物通过调节肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)、血管内皮生长因子A (VEGFA)、白细胞介素1β(IL^(-1)β)等关键靶点,参与IL^(-1)7、肿瘤坏死因子信号通路等,从而发挥免疫调节作用。通过腹腔巨噬细胞体外试验和环磷酰胺免疫抑制体内试验探讨杜仲叶提取物的免疫调节作用,结果显示,1 000~5 000μg·mL^(-1)浓度的杜仲叶提取物可促进腹腔巨噬细胞增殖和吞噬能力;与模型组相比,杜仲叶提取物可增加小鼠免疫器官指数、吞噬指数、外周血白细胞和淋巴细胞数量,增强迟发型超敏反应(DTH)的耳廓肿胀。本研究展现了杜仲叶免疫调节多成分、多靶点作用的特点,为杜仲叶在畜禽健康养殖中的应用提供了科学依据。

关键词：杜仲叶提取物网络药理学免疫调节

注射和口服GnRH对小黄鱼人工催产效果的评估

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水生生物学报 2023年第11期47卷 1807-1815页

作者：方馨正胡伟华陈睿毅曾延清柴学军徐冬冬浙江海洋大学水产学院舟山316022 浙江省海洋水产研究所舟山316021 浙江省海水增养殖重点实验室舟山316021

为评估促性腺激素释放激素(Gonadotrophin releasing hormone,GnRH)作为外源激素对小黄鱼(Larimichthys polyactis)的人工催产繁殖效果,以生理盐水注射组为对照,设计促黄体素释放激素(LHRH-A2,2.4μg/kg)注射组、促性腺激素释放激素(GnR... 详细信息

为评估促性腺激素释放激素(Gonadotrophin releasing hormone,GnRH)作为外源激素对小黄鱼(Larimichthys polyactis)的人工催产繁殖效果,以生理盐水注射组为对照,设计促黄体素释放激素(LHRH-A2,2.4μg/kg)注射组、促性腺激素释放激素(GnRH,75μg/kg)注射组、促性腺激素释放激素(6 mg/kg)口服组,通过繁殖生理学等方法比较其产卵情况、卵巢组织生理学变化和血清激素水平综合分析催产效果。结果显示,GnRH注射组在效应时间、产卵持续时间及受精率和孵化率与LHRH-A2注射组无显著差异,但总产卵量和上浮卵重显著升高(P<0.05);GnRH口服组总产卵量和上浮卵重则显著低于LHRH-A2注射组,但受精率和孵化率无显著差异。进一步通过组织生理学分析小黄鱼产卵过程,对照组卵巢发育以Ⅲ期卵巢为主,LHRH-A2注射组、GnRH注射和口服组均可诱导卵巢由Ⅲ期发育至Ⅴ期,促进卵母细胞由Ⅲ和Ⅳ时相发育成熟并排出体外。各实验组经催产激素处理后,血清中促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和GnRH迅速上升,至产卵后期仍维持较高水平,各处理组的激素水平变化趋势一致。综上,注射GnRH可有效诱导小黄鱼产卵,且催产效果与注射LHRH-A2无显著差异;口服GnRH也可以诱导小黄鱼产卵,但产卵量和上浮卵重显著低于激素注射组,对其给药方法和剂量需要进一步优化。

关键词： GnRH 口服型激素催产效果血清激素水平组织学分析小黄鱼

小黄鱼(Larimichthys polyactis)鰤鱼诺卡氏菌的分离及鉴定

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海洋与湖沼 2023年第4期54卷 1182-1190页

作者：吴迪阮泽超王跃斌张鼎元张燕许文军柴学军浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 浙江省海洋水产研究所、浙江省海水增养殖重点实验室浙江舟山316021

为探明舟山海域网箱养殖小黄鱼(Larimichthys polyactis)暴发的以体表溃疡、眼球溃烂、内脏出现白色结节为主要症状的疾病病因,对患病小黄鱼体表溃疡处和结节病灶处采集组织样本,在血琼脂平板上划线培养,通过分离、纯化到同一优势菌株ZH... 详细信息

为探明舟山海域网箱养殖小黄鱼(Larimichthys polyactis)暴发的以体表溃疡、眼球溃烂、内脏出现白色结节为主要症状的疾病病因,对患病小黄鱼体表溃疡处和结节病灶处采集组织样本,在血琼脂平板上划线培养,通过分离、纯化到同一优势菌株ZHNK2101。经形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA基因片段扩增及序列比对,确定该菌株为鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)。药敏试验结果显示,菌株ZHNK2101对哌拉西林、头孢曲松、丁胺卡那、庆大霉素等16种抗生素敏感。回归感染试验表明,该菌株可以感染小黄鱼并引起和自然感染相同的症状,半致死浓度LD50为7.28×10^(4)CFU/尾。另外,该病株会引起小黄鱼鳃、肝、肾和脾脏发生病理变化,主要表现为鳃丝紊乱,肝脏、肾脏、脾脏组织细胞纤维化形成病理性结节。试验首次报道了小黄鱼感染鰤鱼诺卡氏菌的病例,并从理化特性、药敏试验、回归感染及组织病理变化等方面对该菌株的特性进行了初步研究,为小黄鱼养殖过程中由鰤鱼诺卡氏菌引起的内脏白点病的早期预防和治疗提供基础数据。

关键词：小黄鱼(Larimichthys polyactis) 鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae) 药敏试验回归感染组织学病理

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日本黄姑鱼全人工繁养技术与种质资源研究

日本黄姑鱼全人工繁养技术与种质资源研究

作者：柴学军中国海洋大学

学位级别：硕士

本文主要探讨了日本黄姑鱼Nibea japonic全人工繁育技术、成鱼网箱养殖技术、成鱼耐温性研究和种质资源研究方面的内容,现将研究结果分述如下。 1、在水温16.8℃、盐度29.9、溶解氧5.7～7.8mg/L、PH8.0的条件下,日本黄姑鱼受精卵经53h孵... 详细信息

本文主要探讨了日本黄姑鱼Nibea japonic全人工繁育技术、成鱼网箱养殖技术、成鱼耐温性研究和种质资源研究方面的内容,现将研究结果分述如下。 1、在水温16.8℃、盐度29.9、溶解氧5.7～7.8mg/L、PH8.0的条件下,日本黄姑鱼受精卵经53h孵化,仔鱼陆续破膜孵出,孵化率达到82.8﹪;在水温16.8～24.6℃的条件下,初孵仔鱼历时48d的培育,能培育出平均全长为4.10㎝的幼鱼,育苗成活率达到54.0﹪。 2、日本黄姑鱼的网箱养殖实验从网箱的设计工艺到网箱养殖管理进行了详细的论述。对日本黄姑鱼在网箱养殖条件下的摄食、生长特点、死亡规律、病害特征及防治方法作了较系统总结,为日本黄姑鱼的规模化养殖生产提供了参考依据。 3、日本黄姑鱼的生存极限水温最高为34℃,最低为8℃;越冬的安全温度为10℃;摄食温度为10～32℃之间。 4、利用PCR技术对日本黄姑鱼和鮸状黄姑鱼线粒体DNA的细胞色素b基因片段进行了扩增,PCR产物直接测序,分别获得日本黄姑鱼和鮸状黄姑鱼1137 bp的序列。通过对两种鱼的Cyt b序列的比对分析,得出两种鱼序列的相似性为99.82 %;分析了两种鱼序列的碱基组成及碱基变异情况,发现两种鱼的序列差异明显,碱基替换较多,有2个位点可以作为区分两种鱼的分子标记。 5、利用RAPD技术对日本黄姑鱼和鮸状黄姑鱼Nibea miichthioides养殖群体进行了基因组DNA遗传分析。从120个随机引物中,筛选出其中19个扩增效果好,条带清晰的引物进行扩增。结果表明:引物F04扩增的1283bp带为鮸状黄姑鱼的种的特异性谱带;日本黄姑鱼和鮸状黄姑鱼群体内个体间的平均遗传相似度分别为0.8853和0.8901;用SPSS软件对群体内个体间遗传相似度的方差分析结果表明,在鮸状黄姑鱼群体内存在显著差异(P<0.05),而在日本黄姑鱼群体内则差异不显著,表明日本黄姑鱼的种质较单一,存在近交衰退的危险;两种黄姑鱼之间相似度为0.7850,遗传距离为0.2150,由此判断两种黄姑鱼为同一属的2个不同物种,这与形态学分析的结果相一致。

关键词：日本黄姑鱼全人工育苗养殖耐温性分子标记遗传变异

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2020年第5期46卷 899-904,I0001页

作者：杨吉平费琳柴学军苟兴春西安医学院基础医学研究所陕西省缺血性心血管疾病重点实验室陕西省脑疾病防治重点实验室陕西西安710021 西安交通大学第一附属医院精神心理科陕西西安710061

目的:观察髓样分化因子88(MyD88)抑制肽(MIP)对脂多糖(LPS)激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法:将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组(不进行处理)、LPS组(给予1 mg·L^-1 LPS处理)和不同剂量MIP+LPS组(分别给予25、50... 详细信息

目的:观察髓样分化因子88(MyD88)抑制肽(MIP)对脂多糖(LPS)激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法:将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组(不进行处理)、LPS组(给予1 mg·L^-1 LPS处理)和不同剂量MIP+LPS组(分别给予25、50和100μmol·L-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS)。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素18(IL-18)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1)蛋白表达水平。结果:LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少(P<0.05或P<0.01)。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低(P<0.01);与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高(P<0.05或P<0.01)。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。

关键词：髓样分化因子88抑制肽 BV2小胶质细胞极化脂多糖

杜仲水提物改善动物睡眠障碍作用机制的网络药理学分析及实验动物验证

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动物医学进展 2023年第10期44卷 68-74页

作者：吕梦圆柴学军崔恩慧张露露朱晓岩陈树林赵善廷西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 西安医学院基础医学部陕西西安710000

利用网络药理学分析方法,经过动物试验验证,探究杜仲改善小鼠睡眠障碍的作用机制。通过TCMSP数据库获得杜仲的潜在作用靶点,利用OMIM和GeneCards数据库获得睡眠障碍潜在靶点。将两个靶点合集交集后构建蛋白互作网络,筛选核心靶点。通过D... 详细信息

利用网络药理学分析方法,经过动物试验验证,探究杜仲改善小鼠睡眠障碍的作用机制。通过TCMSP数据库获得杜仲的潜在作用靶点,利用OMIM和GeneCards数据库获得睡眠障碍潜在靶点。将两个靶点合集交集后构建蛋白互作网络,筛选核心靶点。通过David在线平台进行基因本体功能(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。使用Cytoscape软件构建杜仲成分-睡眠障碍靶点-通路网络,之后采用分子对接技术进行检验。最终通过PCPA小鼠睡眠障碍模型进行体内试验验证。网络药理学和分子对接结果显示,杜仲有效成分烟碱单宁、表奎宁定等通过调节多巴胺D2受体基因(DRD2)和GABAA受体α亚基基因(GABRA1)的表达,发挥镇静安神、抗焦虑的作用。动物试验结果显示,杜仲显著减少了睡眠障碍小鼠的运动量(P<0.05),下调睡眠障碍小鼠下丘脑组织中DRD2基因的表达(P<0.01),上调GABRA1基因的表达(P<0.01)。预测并验证了杜仲改善睡眠障碍的作用机制,为其临床应用提供了一定的参考依据。

关键词：杜仲睡眠障碍网络药理学分子对接