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大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证

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大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证

作者：林敏玲广西大学

学位级别：硕士

肠出血大肠杆菌O157：H7是一种可由食品和水源传播的致病性强的人畜共患传染病原体,从首次分离以来,世界各地出现不同规模的暴发及散发流行,造成养殖业重大经济损失,并时刻威胁着人类的健康。肠出血大肠杆菌O157：H7由于感染程度不同,... 详细信息

肠出血大肠杆菌O157：H7是一种可由食品和水源传播的致病性强的人畜共患传染病原体,从首次分离以来,世界各地出现不同规模的暴发及散发流行,造成养殖业重大经济损失,并时刻威胁着人类的健康。肠出血大肠杆菌O157：H7由于感染程度不同,可导致患者血性腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜,甚至死亡。世界卫生组织已将其与艾滋病、埃博拉出血热列为新兴传染病。鞭毛蛋白(Flagellin,Flic)和溶菌酶抑制剂(Lysozyme inhibitor, Ivy)都已被证实是肠出血大肠杆菌O157：H7初期粘附和定植的重要毒力因子。本研究首先分析鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂的氨基酸二级结构、亲水性、柔韧性、抗原性、表面性等信息,综合考虑筛选出潜在的细胞抗原表位肽段,并且通过生物合成法合成得到高纯度片段：Flic 338-349 KAASEGSDGASL、Flic460-471 ATDTNKDYAPAI、Ivy 146-157 SLENHPDGFNFK。通过乳化多肽免疫小鼠得到多克隆抗体,运用ELISA、 Western blot、间接免疫荧光试验验证多克隆抗体的滴度、反应性、特异性。经过三次免疫后ELISA测得Anti-Flic338-349、Anti-Flic460-471. Anti-Ivy146-157、Anti-EHEC O157:H7多克隆抗体效价分别为1：1600、1：6400、1：6400、1：12800,结果表明多克隆抗体具有较高效价。Western blot证实制备的多克隆抗体可以识别天然蛋白,存在较高特异性;间接免疫荧光试验结果显示出Anti-Flic338-349、Anti-Flic460-471在Hela细胞外围有绿色荧光;Anti-Ivy146-157在Hela细胞细胞质中强烈的绿色荧光;Anti-EHECO157：H7在Hela细胞胞质与外围均显示绿色荧光;Anti-Flic338-349、 Anti-Flic460-471、Anti-Ivy146-157、Anti-EHEC 0157:H7的荧光强度值是正常对照组的2-4倍,与正常对照存在显著差异(p<0.05);说明多克隆抗体的反应性良好。抗体阻断抑制试验首先将Anti-Flic338-349、Anti-Flic460-471、 Anti-Ivy146-157、Anti-EHEC O157:H7多克隆抗体与大肠杆菌O157：H7预处理后,大肠杆菌O157：H7粘附Hela细胞的能力减弱或丧失,荧光强度比无预处理的降低2-3倍,具有统计学差异,表明多克隆抗体可以与大肠杆菌O157：H7天然的蛋白结合,在体外成功阻断大肠杆菌O157：H7对Hela细胞的粘附。多肽免疫后7天攻毒半数致死量(2.81×109CFU)的大肠杆菌O157：H7,攻毒后7天免疫组和攻毒组都在排菌,但攻毒第7天Flic338-349组、Flic460-471组、Ivy146-157组、全菌免疫组小鼠的粪便排菌量明显低于攻毒组,免疫组小鼠临床症状能快速恢复,Flic338-349组、Ivyl46-157组、Flic460-471组、全菌组小鼠保护率分别为80%、90%、100%、100%,攻毒组小鼠保护率仅为30%,且攻毒后7天Flic460-471组、Flic338-349组、Ivy146-157组、全菌组的ELISA抗体水平分别为1：12800、1：1600、1：12800、1：51200,表明多克隆抗体能在体内与大肠杆菌O157：H7进行中和反应,对小鼠感染大肠杆菌O157：H7提供一定的保护力。免疫后攻毒,小鼠脾淋巴细胞的增殖明显,Flic338-349组、Flic460-471组、Ivy146-157组脾淋巴细胞的细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的三免和攻毒7天以及IL-6、TNF-α的攻毒后7天细胞因子分泌和mRNA的转录水平显著升高(p<0.05),研究结果表明Flic338-349、Flic460-471、Ivy146-157多肽可以增强IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α介导的细胞免疫和IL-12介导的体液免疫,表明小鼠脾淋巴细胞的细胞免疫反应被多肽所激活。综合整个实验结果显示筛选的大肠杆菌O157：H7鞭毛蛋白多肽Flic460-471、Flic338-349和溶菌酶抑制剂多肽Ivy146-157刺激机体产生的多克隆抗体能够识别肠出血大肠杆菌O157：H7天然蛋白,成功抑制肠出血大肠杆菌O157：H7对Hela细胞的粘附,对小鼠感染大肠杆菌O157：H7具有一定的保护力度,并且可以诱导IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α细胞因子的分泌,表明Flic460-471、Flic338-349和Ivy146-157多肽片段具有刺激机体产

关键词：肠出血大肠杆菌O157:H7 鞭毛蛋白溶菌酶抑制剂抗原表位

不同浓度酸对Harris苏木精染色液染色效果的影响

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临床与实验病理学杂志 2005年第3期21卷 361-362页

作者：沈溪明李海刚林敏玲吴东霞中山大学附属第二医院病理科广州510120

在病理医检常用的多种苏木精染色液中,Harris苏木精可即配即用,染色力强,核着色鲜艳,是常用的细胞核染色剂.缺点是出现氧化膜较快,易生成沉淀和过染.要减少这些缺点,就要尽量保持染色液稳定.Harris苏木精染色液的稳定,除与周围环境的温... 详细信息

在病理医检常用的多种苏木精染色液中,Harris苏木精可即配即用,染色力强,核着色鲜艳,是常用的细胞核染色剂.缺点是出现氧化膜较快,易生成沉淀和过染.要减少这些缺点,就要尽量保持染色液稳定.Harris苏木精染色液的稳定,除与周围环境的温度、光、空气、试剂和染料的纯度有关外,还与其配制过程中是否加入冰醋酸或盐酸及加入酸的多少有关.……

关键词： Harris苏木精染色液染色效果不同浓度周围环境染色剂细胞核氧化膜冰醋酸

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低生育率群体计划生育服务工作的探讨

学习月刊 2015年第10期 82-83页

作者：林敏玲广东省机场管理集团有限公司计生办

合理调整广大育龄群众生育、节育行为,实行人口与计生依法管理是维护群众民主权利、保证政府依法行政、群众依法生育的迫切需要,也是经济社会平稳发展的现实需要。从根本上来看,计划生育既符合国家和民族的根本利益,又符合人民群众的根... 详细信息

合理调整广大育龄群众生育、节育行为,实行人口与计生依法管理是维护群众民主权利、保证政府依法行政、群众依法生育的迫切需要,也是经济社会平稳发展的现实需要。从根本上来看,计划生育既符合国家和民族的根本利益,又符合人民群众的根本利益。人民群众是计划生育工作的主人,群众既有按有关法律和政策履行计划生育的义务,也有获得合法生育、优生优育、适婚适育、

关键词：人民群众服务工作计生政策计生队伍生育观念更替水平计生专干生殖健康社会经济发展生殖保

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微写作教学兴起与初中语文教学把握

中华少年 2017年第7期 87-88页

作者：林敏玲清远市清城区石角镇第二初级中学

以贴合微博特点进行写作的作文就叫微写作作文。本次研究说明了微作文的概念、微作文在初中语文写作教学中应用的方法、微作文教学带来的教学效果。只要初中语文教师优化微写作策略,就能提高学生的写作水平。

关键词：初中语文语文教学写作教学微作文

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浅谈如何做好班级管理

浅谈如何做好班级管理

广东教育学会2019-2020年度学术论坛

作者：林敏玲广州市花都区新华街中心幼儿园

做好幼儿园里的小班级,大集体的管理工作,可以体现在老师之间友好合作,家长的信任支持,师幼之间平等融洽的互动方面。幼儿园里的小班级,也是一个大集体,班级管理工作在幼儿园工作中起到着很重要的作用。如何管理好这个小班级,做到同事... 详细信息

做好幼儿园里的小班级,大集体的管理工作,可以体现在老师之间友好合作,家长的信任支持,师幼之间平等融洽的互动方面。幼儿园里的小班级,也是一个大集体,班级管理工作在幼儿园工作中起到着很重要的作用。如何管理好这个小班级,做到同事之间友爱默契,家长配合信任,师幼关系平等尊重,是需要花点精力,时间和智慧的,从事幼儿教育10年了,在这方面,我一直在探索,在寻找更好的班级管理方法。如何做好班级管理呢?我从下面这几点入手:一.和谐友好的同事关系;二.信任支持的家园关系;三.平等融洽的师幼关系;四.班级环境和幼儿的互动关系。只要把这几点都做好,班级管理工作自然得心应手。

关键词：和谐友好合理安排信任支持细心观察平等融洽

来源： cnki会议评论

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微写作教学兴起与初中语文教学把握

中华少年 2017年第14期 60-61页

作者：林敏玲广东省清远市清城区石角镇第二初级中学

关键词：初中语文语文教学写作教学微作文

开架书库馆员服务工作研究──以海南大学儋州校区图书馆开架书库为例

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科技情报开发与经济 2009年第1期19卷 67-69页

作者：林敏玲海南大学儋州校区图书馆海南儋州571737

从开架书库的特点入手,介绍了海南大学儋州校区图书馆开架书库管理和服务工作,探讨了提高馆员的读者服务水平的措施。

关键词：图书馆开架书库馆员读者服务

葡萄糖酸锌在小儿轮状病毒腹泻治疗中的应用分析

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中国医学工程 2016年第1期24卷 5-7页

作者：林敏玲广东省肇庆市高新区人民医院儿科广东肇庆526238

目的探讨葡萄糖酸锌在小儿轮状病毒腹泻治疗中的临床疗效和安全性。方法将该院收治的156例轮状病毒腹泻患儿随机分为对照组和实验组,均78例。给予对照组患儿补液纠正脱水,维持水、电解质平衡,并采用妈咪爱、思密达对症治疗;实验组在对... 详细信息

目的探讨葡萄糖酸锌在小儿轮状病毒腹泻治疗中的临床疗效和安全性。方法将该院收治的156例轮状病毒腹泻患儿随机分为对照组和实验组,均78例。给予对照组患儿补液纠正脱水,维持水、电解质平衡,并采用妈咪爱、思密达对症治疗;实验组在对照组常规治疗基础上加以口服葡萄糖酸锌治疗。对比分析两组的疗效情况、止泻时间和总疗程以及不良反应发生情况。结果实验组总有效率为94.9%,明显高于对照组的69.2%(P<0.05);实验组的止泻时间和总疗程显著少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),两组患儿均未发生不良反应。结论葡萄糖酸锌治疗小儿轮状病毒腹泻临床疗效确切,效果好,疗程短,无明显不良反应,安全可靠,易被家长接受,值得临床推广使用。

关键词：葡萄糖酸锌小儿腹泻轮状病毒疗效

浅谈高校图书馆读者服务部馆员的继续学习——以海南大学儋州校区图书馆读者服务部为例

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科技情报开发与经济 2010年第3期20卷 23-24页

作者：林敏玲海南大学儋州校区图书馆海南儋州571737

论述了新时期高校图书馆读者服务部馆员继续学习的必要性,阐述了其继续学习的主要内容,提出了馆员继续学习的方式和途径。

关键词：高校图书馆图书馆员继续学习