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大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证

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大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证

作者：林敏玲广西大学

学位级别：硕士

肠出血大肠杆菌O157：H7是一种可由食品和水源传播的致病性强的人畜共患传染病原体,从首次分离以来,世界各地出现不同规模的暴发及散发流行,造成养殖业重大经济损失,并时刻威胁着人类的健康。肠出血大肠杆菌O157：H7由于感染程度不同,... 详细信息

肠出血大肠杆菌O157：H7是一种可由食品和水源传播的致病性强的人畜共患传染病原体,从首次分离以来,世界各地出现不同规模的暴发及散发流行,造成养殖业重大经济损失,并时刻威胁着人类的健康。肠出血大肠杆菌O157：H7由于感染程度不同,可导致患者血性腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜,甚至死亡。世界卫生组织已将其与艾滋病、埃博拉出血热列为新兴传染病。鞭毛蛋白(Flagellin,Flic)和溶菌酶抑制剂(Lysozyme inhibitor, Ivy)都已被证实是肠出血大肠杆菌O157：H7初期粘附和定植的重要毒力因子。本研究首先分析鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂的氨基酸二级结构、亲水性、柔韧性、抗原性、表面性等信息,综合考虑筛选出潜在的细胞抗原表位肽段,并且通过生物合成法合成得到高纯度片段：Flic 338-349 KAASEGSDGASL、Flic460-471 ATDTNKDYAPAI、Ivy 146-157 SLENHPDGFNFK。通过乳化多肽免疫小鼠得到多克隆抗体,运用ELISA、 Western blot、间接免疫荧光试验验证多克隆抗体的滴度、反应性、特异性。经过三次免疫后ELISA测得Anti-Flic338-349、Anti-Flic460-471. Anti-Ivy146-157、Anti-EHEC O157:H7多克隆抗体效价分别为1：1600、1：6400、1：6400、1：12800,结果表明多克隆抗体具有较高效价。Western blot证实制备的多克隆抗体可以识别天然蛋白,存在较高特异性;间接免疫荧光试验结果显示出Anti-Flic338-349、Anti-Flic460-471在Hela细胞外围有绿色荧光;Anti-Ivy146-157在Hela细胞细胞质中强烈的绿色荧光;Anti-EHECO157：H7在Hela细胞胞质与外围均显示绿色荧光;Anti-Flic338-349、 Anti-Flic460-471、Anti-Ivy146-157、Anti-EHEC 0157:H7的荧光强度值是正常对照组的2-4倍,与正常对照存在显著差异(p<0.05);说明多克隆抗体的反应性良好。抗体阻断抑制试验首先将Anti-Flic338-349、Anti-Flic460-471、 Anti-Ivy146-157、Anti-EHEC O157:H7多克隆抗体与大肠杆菌O157：H7预处理后,大肠杆菌O157：H7粘附Hela细胞的能力减弱或丧失,荧光强度比无预处理的降低2-3倍,具有统计学差异,表明多克隆抗体可以与大肠杆菌O157：H7天然的蛋白结合,在体外成功阻断大肠杆菌O157：H7对Hela细胞的粘附。多肽免疫后7天攻毒半数致死量(2.81×109CFU)的大肠杆菌O157：H7,攻毒后7天免疫组和攻毒组都在排菌,但攻毒第7天Flic338-349组、Flic460-471组、Ivy146-157组、全菌免疫组小鼠的粪便排菌量明显低于攻毒组,免疫组小鼠临床症状能快速恢复,Flic338-349组、Ivyl46-157组、Flic460-471组、全菌组小鼠保护率分别为80%、90%、100%、100%,攻毒组小鼠保护率仅为30%,且攻毒后7天Flic460-471组、Flic338-349组、Ivy146-157组、全菌组的ELISA抗体水平分别为1：12800、1：1600、1：12800、1：51200,表明多克隆抗体能在体内与大肠杆菌O157：H7进行中和反应,对小鼠感染大肠杆菌O157：H7提供一定的保护力。免疫后攻毒,小鼠脾淋巴细胞的增殖明显,Flic338-349组、Flic460-471组、Ivy146-157组脾淋巴细胞的细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的三免和攻毒7天以及IL-6、TNF-α的攻毒后7天细胞因子分泌和mRNA的转录水平显著升高(p<0.05),研究结果表明Flic338-349、Flic460-471、Ivy146-157多肽可以增强IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α介导的细胞免疫和IL-12介导的体液免疫,表明小鼠脾淋巴细胞的细胞免疫反应被多肽所激活。综合整个实验结果显示筛选的大肠杆菌O157：H7鞭毛蛋白多肽Flic460-471、Flic338-349和溶菌酶抑制剂多肽Ivy146-157刺激机体产生的多克隆抗体能够识别肠出血大肠杆菌O157：H7天然蛋白,成功抑制肠出血大肠杆菌O157：H7对Hela细胞的粘附,对小鼠感染大肠杆菌O157：H7具有一定的保护力度,并且可以诱导IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α细胞因子的分泌,表明Flic460-471、Flic338-349和Ivy146-157多肽片段具有刺激机体产生体液免疫和细胞免疫反应的能力,是大肠杆菌O157：H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂良好抗原性的抗原表

关键词：肠出血大肠杆菌O157:H7 鞭毛蛋白溶菌酶抑制剂抗原表位

后巩膜加固术对病理性近视患儿近期和远期疗效的影响

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中国卫生标准管理 2022年第20期13卷 21-24页

作者：骆蓉蓉林敏玲黄恩娥林燕瑜泉州市妇幼保健院·儿童医院眼科福建泉州362000

目的观察后巩膜加固术对病理性近视患儿近期、远期疗效的影响。方法回顾性分析泉州市妇幼保健院·儿童医院2019年6月—2020年6月收治的24例(42眼)病理性近视患儿临床诊疗资料,患儿均在确诊后自愿开展后巩膜加固术,比较本次研究对象治... 详细信息

目的观察后巩膜加固术对病理性近视患儿近期、远期疗效的影响。方法回顾性分析泉州市妇幼保健院·儿童医院2019年6月—2020年6月收治的24例(42眼)病理性近视患儿临床诊疗资料,患儿均在确诊后自愿开展后巩膜加固术,比较本次研究对象治疗前后心理情绪及视力、眼压、屈光度、眼轴长度等眼科指标的影响,同时随访分析患儿术后并发症、手术治疗满意度。结果 24例患儿术后3个月视力为(421.65±10.24)D,与术前视力(420.43±10.23)D相比略高,数据差异无统计学意义(P> 0.05)。患儿术后3个月屈光度以及眼轴长度、眼压分别为(19.54±2.11)D、(27.67±3.08)mm、(17.64±2.11)mmHg,均低于术前屈光度以及眼轴长度、眼压,分别为(24.54±2.12)D、(30.43±3.10)mm、(32.34±2.12)mmHg,数据差异有统计学意义(P 0.05)。术后6个月与术后12个月患儿家属对手术治疗效果满意度分别为91.67%、75.00%,数据差异无统计学意义(P> 0.05)。结论病理性近视患儿后巩膜加固术可有效对抗屈光度加深、眼轴长度增加,延缓视力减退,安全性高。

关键词：后巩膜加固术病理性近视近视屈光度眼轴长度眼压临床效果

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基于多元回归的通信基站租金评估方法

广东通信技术 2022年第7期42卷 2-6页

作者：庄丹曹海山郭向荣陈庆专张姣邓金荣徐志峰林敏玲中国移动通信集团广东有限公司汕头分公司无线优化中心通信物业管理室中国移动通信集团广东有限公司汕头分公司无线优化中心中国移动通信集团广东有限公司汕头分公司综合调度及维护中心中国移动通信集团广东有限公司无线优化中心中国移动通信集团广东有限公司汕头分公司无线优化中心综合管理室

移动通信运营商每年投入大量的资金建设5G基站,基本遍布全国各区域。移动网络站点广泛分布在各处,基站租赁费分级评审均为按照区域内划定上限进行评审,缺乏对周边同类型、同配置的基站租金水平比对,谈判时缺乏客观参照依据。针对基站租... 详细信息

移动通信运营商每年投入大量的资金建设5G基站,基本遍布全国各区域。移动网络站点广泛分布在各处,基站租赁费分级评审均为按照区域内划定上限进行评审,缺乏对周边同类型、同配置的基站租金水平比对,谈判时缺乏客观参照依据。针对基站租金合理性评估问题,分析基站租赁用地的独有特征,结合位置信息、基站建设模式、机房建设类型、场景类型、周边各运营商站点租金等,将影响因子聚类,构建一种适用于通信基站租金的定价模型,清理现网不合理租赁站点,指导基站续签租金合理定价。

关键词：通信基站租金定价降本增效租金合理性运营商

不同浓度酸对Harris苏木精染色液染色效果的影响

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临床与实验病理学杂志 2005年第3期21卷 361-362页

作者：沈溪明李海刚林敏玲吴东霞中山大学附属第二医院病理科广州510120

在病理医检常用的多种苏木精染色液中,Harris苏木精可即配即用,染色力强,核着色鲜艳,是常用的细胞核染色剂.缺点是出现氧化膜较快,易生成沉淀和过染.要减少这些缺点,就要尽量保持染色液稳定.Harris苏木精染色液的稳定,除与周围环境的温... 详细信息

在病理医检常用的多种苏木精染色液中,Harris苏木精可即配即用,染色力强,核着色鲜艳,是常用的细胞核染色剂.缺点是出现氧化膜较快,易生成沉淀和过染.要减少这些缺点,就要尽量保持染色液稳定.Harris苏木精染色液的稳定,除与周围环境的温度、光、空气、试剂和染料的纯度有关外,还与其配制过程中是否加入冰醋酸或盐酸及加入酸的多少有关.……

关键词： Harris苏木精染色液染色效果不同浓度周围环境染色剂细胞核氧化膜冰醋酸

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浅谈如何做好班级管理

浅谈如何做好班级管理

EGFR在消化道肿瘤中的表达意义及其与GSTπ和c-Met的关系

广东教育学会2019-2020年度学术论坛

作者：林敏玲广州市花都区新华街中心幼儿园

做好幼儿园里的小班级,大集体的管理工作,可以体现在老师之间友好合作,家长的信任支持,师幼之间平等融洽的互动方面。幼儿园里的小班级,也是一个大集体,班级管理工作在幼儿园工作中起到着很重要的作用。如何管理好这个小班级,做到同事... 详细信息

做好幼儿园里的小班级,大集体的管理工作,可以体现在老师之间友好合作,家长的信任支持,师幼之间平等融洽的互动方面。幼儿园里的小班级,也是一个大集体,班级管理工作在幼儿园工作中起到着很重要的作用。如何管理好这个小班级,做到同事之间友爱默契,家长配合信任,师幼关系平等尊重,是需要花点精力,时间和智慧的,从事幼儿教育10年了,在这方面,我一直在探索,在寻找更好的班级管理方法。如何做好班级管理呢?我从下面这几点入手:一.和谐友好的同事关系;二.信任支持的家园关系;三.平等融洽的师幼关系;四.班级环境和幼儿的互动关系。只要把这几点都做好,班级管理工作自然得心应手。

关键词：和谐友好合理安排信任支持细心观察平等融洽

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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广东医学 2009年第3期30卷 432-434页

作者：范苗静王林曾韵洁李海刚沈溪明林敏玲中山大学附属第二医院病理科广州510120

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)在消化道肿瘤中的表达意义及其与谷胱甘肽-S-转移酶π(GSTπ)、肝细胞生长因子受体(c-Met)的关系。方法应用免疫组织化学法检测171例消化道肿瘤组织中EG-FR、GSTπ和c-Met的表达,分析EGFR与患者的性别、... 详细信息

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)在消化道肿瘤中的表达意义及其与谷胱甘肽-S-转移酶π(GSTπ)、肝细胞生长因子受体(c-Met)的关系。方法应用免疫组织化学法检测171例消化道肿瘤组织中EG-FR、GSTπ和c-Met的表达,分析EGFR与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、组织分化程度、pTNM、浸润深度、淋巴结转移及GSTπ、c-Met的关系。结果171例消化道肿瘤组织EGFR阳性率为19.9%,其表达与组织学类型相关(P=0.000),鳞癌阳性率明显高于腺癌及其他组织学类型,与其他临床病理学指标均无关(P>0.05)。食管癌中EGFR阳性率为66.7%,明显高于胃癌和大肠癌的11.1%(P=0.000)。消化道肿瘤组织中EG-FR与GSTπ的表达呈正相关(rs=0.201,P=0.043),与c-Met的表达无关(P=0.091)。结论消化道肿瘤EG-FR的表达与组织学类型有密切关系,反映在食管癌中的高表达。

关键词：表皮生长因子受体消化道肿瘤谷胱甘肽-S-转移酶π 肝细胞生长因子受体

开架书库馆员服务工作研究──以海南大学儋州校区图书馆开架书库为例

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科技情报开发与经济 2009年第1期19卷 67-69页

作者：林敏玲海南大学儋州校区图书馆海南儋州571737

从开架书库的特点入手,介绍了海南大学儋州校区图书馆开架书库管理和服务工作,探讨了提高馆员的读者服务水平的措施。

关键词：图书馆开架书库馆员读者服务

葡萄糖酸锌在小儿轮状病毒腹泻治疗中的应用分析

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中国医学工程 2016年第1期24卷 5-7页

作者：林敏玲广东省肇庆市高新区人民医院儿科广东肇庆526238

目的探讨葡萄糖酸锌在小儿轮状病毒腹泻治疗中的临床疗效和安全性。方法将该院收治的156例轮状病毒腹泻患儿随机分为对照组和实验组,均78例。给予对照组患儿补液纠正脱水,维持水、电解质平衡,并采用妈咪爱、思密达对症治疗;实验组在对... 详细信息

目的探讨葡萄糖酸锌在小儿轮状病毒腹泻治疗中的临床疗效和安全性。方法将该院收治的156例轮状病毒腹泻患儿随机分为对照组和实验组,均78例。给予对照组患儿补液纠正脱水,维持水、电解质平衡,并采用妈咪爱、思密达对症治疗;实验组在对照组常规治疗基础上加以口服葡萄糖酸锌治疗。对比分析两组的疗效情况、止泻时间和总疗程以及不良反应发生情况。结果实验组总有效率为94.9%,明显高于对照组的69.2%(P<0.05);实验组的止泻时间和总疗程显著少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),两组患儿均未发生不良反应。结论葡萄糖酸锌治疗小儿轮状病毒腹泻临床疗效确切,效果好,疗程短,无明显不良反应,安全可靠,易被家长接受,值得临床推广使用。

关键词：葡萄糖酸锌小儿腹泻轮状病毒疗效

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门诊小儿泪道探通术临床护理干预

中外医学研究 2017年第6期15卷 69-71页

作者：温佳妙林敏玲泉州市妇幼保健院·儿童医院·眼科医院福建泉州362000

目的:探讨门诊小儿泪道探通术临床护理方法。方法:选取笔者所在门诊在2014年6月-2015年12月收治的小儿泪腺炎患者110例为研究对象,随机分成研究组和对照组,对照组给予常规护理,研究组给予规范化性的临床护理干预,比较两组患者的治疗成... 详细信息

目的:探讨门诊小儿泪道探通术临床护理方法。方法:选取笔者所在门诊在2014年6月-2015年12月收治的小儿泪腺炎患者110例为研究对象,随机分成研究组和对照组,对照组给予常规护理,研究组给予规范化性的临床护理干预,比较两组患者的治疗成功率以及护理满意度。结果:研究组泪道探通成功率和护理满意度均显著高于对照组(P<0.05)。结论:对于小儿泪腺炎患者而言,采用门诊小儿泪道探通术效果较好,给予规范化的临床护理干预可以大大提高患者的治疗成功率,家属满意度较高,临床应用价值较高。

关键词：小儿泪腺炎泪道探通术临床护理