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自噬在多囊卵巢综合征发病机制中的研究进展

中华生殖与避孕杂志 2024年第1期44卷 94-97页

作者：杲莹相珊连方山东中医药大学第一临床医学院济南250014 山东中医药大学附属医院中西医结合生殖与遗传中心济南250014

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是临床常见的女性内分泌疾病,是导致女性不孕症的原因之一,影响女性健康的多个方面。目前医学界对该病发病机制的研究仍没有明确定论。自噬作为一种进化上保守、高度调节的分解代谢过程... 详细信息

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是临床常见的女性内分泌疾病,是导致女性不孕症的原因之一,影响女性健康的多个方面。目前医学界对该病发病机制的研究仍没有明确定论。自噬作为一种进化上保守、高度调节的分解代谢过程,能够影响卵泡生长,调控子宫内膜功能,与PCOS中高雄激素血症、胰岛素抵抗、肥胖、慢性炎症、氧化应激等内分泌代谢紊乱密切相关。本文对近几年文献报道的关于自噬在PCOS发病机制中的研究情况进行了综述,以期对PCOS、不孕症等生殖相关疾病的临床诊疗提供新思路。

关键词：自噬多囊卵巢综合征内分泌代谢紊乱发病机制

MicroRNA-10a-5p调控GATA6在卵巢癌中的机制研究及对紫草素抗卵巢癌的影响

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MicroRNA-10a-5p调控GATA6在卵巢癌中的机制研究及对紫草素抗卵巢...

作者：杲飞莹扬州大学

学位级别：硕士

第1章:受miRNA调控的GATA6对卵巢癌预后的影响目的:探究转录因子GATA结合蛋白6(GATA binding protein 6,GATA6)在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌预后的影响,同时明确调控GATA6的microRNA。方法:(1)利用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)和实... 详细信息

第1章:受miRNA调控的GATA6对卵巢癌预后的影响目的:探究转录因子GATA结合蛋白6(GATA binding protein 6,GATA6)在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌预后的影响,同时明确调控GATA6的microRNA。方法:(1)利用蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)和实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测患者组织中GATA6的蛋白和mRNA的表达水平;(2)通过肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas Program,TCGA)数据库分析GATA6的表达水平及其对卵巢癌患者总生存时间(Overall Survival,OS)和无进展生存期(Progression-free Survival,PFS)的影响;(3)通过在线数据库预测并利用双荧光素酶实验验证靶向作用于GATA6的miRNAs。结果:(1)GATA6在卵巢癌组织中的蛋白和mRNA的表达水平均低于正常卵巢组织;(2)TCGA数据库数据进一步验证了卵巢癌中GATA6的表达水平低于正常卵巢组织;(3)多因素回归分析提示GATA6和肿瘤分期是卵巢癌预后的独立危险因素;(4)通过Kaplan-Meier plotter数据库发现卵巢癌患者中GATA6的低表达与较好的预后相关,且与卵巢癌的分期、肿瘤分化程度、组织类型以及是否具有p53突变无关;(5)通过数据库预测发现microRNA-10a-5p(miR-10a-5p)调控GATA6,双荧光素酶实验进一步验证了二者之间的靶向关系。结论:(1)GATA6在卵巢癌中表达水平低于正常卵巢组织;(2)GATA6和肿瘤分期是卵巢癌患的独立危险因素,高表达GATA6的患者预后较差;(3)miR-10a-5p靶向作用于GATA6。第2章:慢病毒介导的miR-10a-5p过表达靶向作用于GATA6对卵巢癌细胞恶性表型的影响及机制研究目的:探究miR-10a-5p靶向调控GATA6对卵巢癌细胞表型的影响,并进一步明确相关机制。方法:(1)构建miR-10a-5p过表达慢病毒载体和GATA6过表达载体以上调卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3中miR-10a-5p和GATA6的表达水平;(2)通过qRT-PCR检测卵巢癌细胞中miR-10a-5p和GATA6的表达水平,Western Blot检测GATA6、N-Cadherin、E-Cadherin、p-AktS473、Akt、p53、GAPDH 和 MUC1 等蛋白的表达水平;(3)通过CCK-8、克隆形成、划痕试验和transwell试验研究GATA6对肿瘤细胞增殖、成瘤能力、迁移和侵袭的影响;(4)使用构建好的SKOV3相关细胞系进行裸鼠异体移植瘤实验,检测miR-10a-5p沉默GATA6后对肿瘤生长的影响;(5)通过HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化检测异体移植瘤中GATA6、Ki-67、N-Cadherin、E-Cadherin和 p-AktS473 表达水平,Westem Blot 检测:GATA6、N-Cadherin、E-Cadherin、p-AktS473、Akt、p53和GAPDH的表达水平。结果:(1)慢病毒转染后卵巢癌细胞中miR-10a-5p表达水平上调,GATA6的mRNA的表达水平下调;(2)上调miR-10a-5p通过靶向GATA6抑制卵巢癌细胞增殖、致瘤能力、迁移和侵袭,恢复GATA6的表达后细胞的细胞增殖、致瘤能力、迁移和侵袭能力上升,但在OVCAR3细胞中迁移和侵袭能力的改变无统计学差异;(3)miR-10a-5p抑制了 GATA6的表达水平,在SKOV3细胞中下调了 Akt和MUC1的表达水平,并抑制了上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT);在 OVCAR3 细胞中Akt通路同样受到抑制,但EMT被激活,p53蛋白的表达稍有下降,在恢复GATA6的表达水平后Akt通路和EMT也得到恢复;(4)体内实验发现,上调miR-10a-5p表达水平组小鼠的肿瘤生长缓慢且相关通路蛋白表达水平与体外SKOV3细胞中是一致。结论:体外和体内实验证实,miR-10a-5p介导的GATA6下调在p53丢失的卵巢癌细胞中抑制了 Akt通路的激活和MUC1的表达,后者可能抑制了 EMT,而在p53突变型的细胞系中虽然同样能抑制Akt通路的激活,但在EMT上的表现却是相反的。第3章:miR-10a-5p在紫草素诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用目的:本研究拟阐明miR-10a-5p在紫草素诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用。方法:(1)基于数据库分析卵巢癌中GATA6的表达水平与卵巢癌对紫草素的敏感性之间的关系;(2)使用CCK-8实验

关键词：人卵巢癌微小RNA-10a-5p GATA6转录因子紫草素细胞凋亡

双氢青蒿素通过调节SLC7A11/GPX4信号通路诱导卵巢癌细胞铁死亡

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中药材 2024年 3103-3107页

作者：陈露李由由杲飞莹邢悦康璐瑶卢丹扬州大学附属苏北人民医院扬州大学医学院(转化医学研究院)

目的:考察双氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:SKOV3细胞予不同浓度双氢青蒿素处理,采用CCK-8法检测细胞活力;细胞划痕实验观察细胞迁移能力;免疫荧光术检测细胞内活性氧水平;试剂盒分别检测细胞内Fe2+和谷胱... 详细信息

目的:考察双氢青蒿素对卵巢癌SKOV3细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:SKOV3细胞予不同浓度双氢青蒿素处理,采用CCK-8法检测细胞活力;细胞划痕实验观察细胞迁移能力;免疫荧光术检测细胞内活性氧水平;试剂盒分别检测细胞内Fe2+和谷胱甘肽水平;Western Blotting和q PCR检测铁死亡相关蛋白及基因的表达。结果:双氢青蒿素可显著降低SKOV3细胞活力、迁移能力及谷胱甘肽水平,显著升高SKOV3细胞中的活性氧荧光强度与Fe2+水平,显著降低SKOV3细胞内SLC7A11、GPX4 m RNA及蛋白表达（P<0.05或P<0.01）,其作用呈浓度依赖性。结论:双氢青蒿素可抑制SKOV3细胞的增殖,并通过抑制SLC7A11/GPX4信号活化来诱导铁死亡,从而发挥抗卵巢癌的作用。

关键词：卵巢癌双氢青蒿素 SLC7A11/GPX4轴铁死亡活性氧

微小RNA-10a-5p促进紫草素抗卵巢癌细胞的作用

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实用临床医药杂志 2023年第4期27卷 15-22页

作者：杲飞莹武强潘相羽卢丹扬州大学医学院/转化医学研究院江苏扬州225009 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225009 扬州大学临床医学院江苏扬州225009 中南大学湘雅二医院湖南长沙410011 扬州大学附属苏北人民医院江苏扬州225001 大连医科大学辽宁大连116044

目的初步探究微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)在紫草素抗卵巢癌中的作用。方法基于数据库分析miR-10a-5p在肿瘤中的表达水平;瞬时转染miR-10a-5p mimic及NC,通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-10a-5p的表达水平;使用CCK-8实... 详细信息

目的初步探究微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)在紫草素抗卵巢癌中的作用。方法基于数据库分析miR-10a-5p在肿瘤中的表达水平;瞬时转染miR-10a-5p mimic及NC,通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-10a-5p的表达水平;使用CCK-8实验检测紫草素对SKOV3细胞的半数抑制浓度(IC_(50));通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;活死细胞染色比较细胞死亡情况。结果miR-10a-5p在多种肿瘤中异常表达,与对照组相比,转染miR-10a-5p mimic后可上调SKOV3细胞中miR-10a-5p的表达水平约80倍,差异有统计学意义(P<0.0001);miR-10a-5p可促进卵巢癌细胞的凋亡,提高SKOV3细胞对紫草素的敏感性,其IC_(50)由2.45μmol/L降低至1.40μmol/L,降幅达42.9%。与NC相比,转染mimic可促进SKOV3细胞的凋亡,差异有统计学意义(6.73%与17.71%,P=0.0075)。与无紫草素相比,紫草素可显著促进卵巢癌细胞的凋亡,差异有统计学意义(6.73%与82.48%,P<0.0001);且miR-10a-5p可协同紫草素促进SKOV3的凋亡,差异有统计学意义(82.48%与96.80%,P<0.0001)。活死细胞染色结果显示,miR-10a-5p联合紫草素使更多细胞显著发生死亡(P<0.0001);miR-10a-5p联合紫草素使S期细胞占比显著增高(P<0.0001),从而抑制细胞增殖。通过Targetscan7.2预测发现,GATA6可能是miRNA-10a-5p的一个作用靶点。Kaplan-Meier Plotter数据库分析提示,GATA6的高表达与卵巢癌的不良预后相关,瞬时转染mimic后,GATA6 mRNA和其蛋白表达水平明显著下调(P<0.0001)。结论miR-10a-5p和紫草素均可促进SKOV3凋亡,有协同抗卵巢癌的作用,且miR-10a-5p可显著提高SKOV3细胞对紫草素的药物敏感性,其可能是通过靶向作用于GATA6而产生抑癌作用。

关键词：卵巢癌细胞紫草素微小RNA-10a-5p 细胞凋亡细胞增殖

多次使用川芎嗪注射液对丙泊酚逆行性遗忘作用的影响

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航空航天医学杂志 2012年第8期23卷 897-898页

作者：杲会莹秦敏洋蒋志浩张馨芝朱波王娟吴清潘昕黄陈源马涛徐州医学院华方麻醉学院 08级在读本科生徐州221004 徐州医学院麻醉药理学教研室

目的:观察多次使用川芎嗪(Ligustrazine,L)注射液对丙泊酚(Propofol,P)逆行性遗忘作用的影响。方法:将60只昆明种小鼠随机分成5组(n=12):川芎嗪L15组(15 ***-1)、丙泊酚P5组(5 ***-1)、丙泊酚P10组(10 ***-1)、P5+L15组、P10+L15组。用避暗实验观察24 h后各组小鼠步入潜伏期和错误次数。结果:用药后24 h,各组间错误次数差异无统计学意义(P>0.05);与L15组相比,P10组、P5+L15组、P10+L15的潜伏期缩短(P<0.01);与P5组相比,P10组、P5+L15组、P10+L15组的潜伏期缩短(P<0.01或P<0.05)。结论:多次使用川芎嗪可增强丙泊酚的逆行性遗忘作用。

关键词：川芎嗪丙泊酚逆行性遗忘避暗实验学习记忆

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有机金属化合物的发现、研究历史与应用

化学教育(中英文) 2025年第1期 120-126页

作者：徐彦博廖旭杲宁波市镇海中学宁波市鄞州中学

有机金属化合物是有机合成的重要试剂，其应用遍布各个领域。作为无机化学与有机化学的交叉学科，金属有机化学在其诞生之后的百余年时间中获得了迅猛的发展。从有机锌化合物到有机镁、有机锂，再到有机铝和过渡金属有机化合物，研究者... 详细信息

有机金属化合物是有机合成的重要试剂，其应用遍布各个领域。作为无机化学与有机化学的交叉学科，金属有机化学在其诞生之后的百余年时间中获得了迅猛的发展。从有机锌化合物到有机镁、有机锂，再到有机铝和过渡金属有机化合物，研究者通过传承和探索，不断取得新的进展，相关研究数次获得诺贝尔奖。梳理有机金属化合物的发展脉络，温习其中的改进和创新对今后的研究不无启示。

关键词：有机金属化合物格氏试剂研发历程应用

有症状的妊娠期合并肾积水临床特点及治疗方法评价

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实用临床医药杂志 2022年第9期26卷 45-49页

作者：王莉武强蒲巍林葛君杲飞莹张国泰卢丹甘肃省妇幼保健院生殖泌尿外科甘肃兰州730050 扬州大学附属苏北人民医院江苏扬州225001 中南大学湘雅二医院胸外科湖南长沙410011 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225009 扬州大学医学院/扬州大学转化医学研究院江苏扬州225009

目的分析妊娠期肾积水的临床特点以及不同治疗方式的效果。方法本研究纳入89例因腰痛、发热或腹痛等原因就诊于甘肃省妇幼保健院生殖泌尿外科的妊娠期肾积水患者,根据治疗方式不同分为支架置入组和保守治疗组。比较2组年龄、住院时间、... 详细信息

目的分析妊娠期肾积水的临床特点以及不同治疗方式的效果。方法本研究纳入89例因腰痛、发热或腹痛等原因就诊于甘肃省妇幼保健院生殖泌尿外科的妊娠期肾积水患者,根据治疗方式不同分为支架置入组和保守治疗组。比较2组年龄、住院时间、妊娠时期、合并疾病、治疗前后肾积水程度、血白细胞(WBC)计数等指标。结果89例妊娠期肾积水患者中,97.75%(87/89)的患者为轻中度肾积水,69例(77.53%)为右侧(含双侧)肾积水,85例(95.51%)为中晚期妊娠,25例合并泌尿系结石(28.09%)。支架置入或保守治疗后,所有患者临床症状均明显好转,无流产病例,其中33例(37.08%)肾积水完全缓解,35例(39.33%)为轻度肾积水,3例(3.37%)为中度肾积水。支架置入组孕妇平均年龄(25.60±4.92)岁,保守治疗组为(28.61±4.54)岁,2组孕妇平均年龄比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论妊娠期合并肾积水主要见于妊娠中晚期,以右侧肾积水为主,多合并泌尿系结石等疾病。对于有症状的妊娠期肾积水患者而言,输尿管支架置入治疗和保守治疗效果相似,但对于合并泌尿系疾病的孕妇,应优先考虑支架置入。

关键词：妊娠期肾积水泌尿系统疾病输尿管支架置入保守治疗

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用鱼的思维引导钓者

声屏世界（广告人） 2018年第1期 48-48页

作者：杲佳莹华录百纳蓝火

想要钓到鱼，就要像鱼一样思考。在营销过程中，信息接收者对于信息的价值感知直接决定了消费需求及心理驱动力。爆款IP的身后必然有一个以目标人群为导向的高度认知。

关键词：思维引导鱼信息接收营销过程消费需求驱动力

QuEChERS结合HPLC检测辣椒及其制品中天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素

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食品科学 2025年第2期46卷 240-247页

作者：成璐瑶温雅君石文婷周子莹马丽艳中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 北京市农产品质量安全中心北京100029 农业农村部农产品质量检验测试中心(北京) 北京100083

建立一种QuEChERS结合高效液相色谱快速检测辣椒及其制品中的天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素的方法。样品用乙腈提取,无水硫酸镁、十八烷基硅烷(C18)、乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶、石墨化炭黑复合吸附剂净化。采用Agilent Eclipse Pl... 详细信息

建立一种QuEChERS结合高效液相色谱快速检测辣椒及其制品中的天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素的方法。样品用乙腈提取,无水硫酸镁、十八烷基硅烷(C18)、乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶、石墨化炭黑复合吸附剂净化。采用Agilent Eclipse Plus C18(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,以0.4%磷酸水溶液和90%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,荧光检测器进行检测。结果表明:天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素在0.20~100 mg/L范围内线性关系良好,决定系数(R2)均大于0.999。天然辣椒素的方法检出限为0.014~0.069 mg/kg,定量限为0.046~0.23 mg/kg;二氢辣椒素的方法检出限为0.023~0.12 mg/kg,定量限为0.077~0.39 mg/kg;合成辣椒素的方法检出限为0.018~0.088 mg/kg,定量限为0.059~0.30 mg/kg。在干辣椒、鲜辣椒、香菇酱、辣椒油4种基质中,3个不同添加水平下的加标回收率为91.6%~117.2%,相对标准偏差为0.2%~6.1%。该方法简便、准确,不仅适用于干、鲜辣椒,而且适用于高油、高蛋白等辣椒制品中天然辣椒素、二氢辣椒素和合成辣椒素含量的检测。

关键词： QuEChERS 高效液相色谱辣椒辣椒素合成辣椒素