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欧洲鳗皮肤黏膜免疫球蛋白纯化及其结构组成分析

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中国水产科学 2009年第3期16卷 404-410页

作者：林娟娟杨金先陈强刘晓东俞伏松林天龙福建省农业科学院生物技术研究所莆田学院环境与生命科学系

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白(Ig),并在结构和抗原性上进行分析。柱层析结果表明,欧洲鳗黏膜Ig经亲和层析分离后出现1个锐形的蛋白峰,蛋白主要分布于收集物的第2-6管,蛋白峰和抗原活性峰重叠。凝胶电... 详细信息

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白(Ig),并在结构和抗原性上进行分析。柱层析结果表明,欧洲鳗黏膜Ig经亲和层析分离后出现1个锐形的蛋白峰,蛋白主要分布于收集物的第2-6管,蛋白峰和抗原活性峰重叠。凝胶电泳结果显示,在变性还原条件下,欧洲鳗黏膜Ig重、轻链分子量分别为68kD和26kD,还有1条分子量约为18kD的蛋白带;在非变性非还原条件下,黏膜Ig只有1条蛋白带,分子量约为350kD,略呈扩散拖带现象,这一结果提示自然条件下欧洲鳗黏膜Ig可能以二聚体形式存在;在变性非还原条件下,黏膜Ig有3条蛋白带,分子量约为350kD、138kD和135kD,表明欧洲鳗黏膜Ig在SDS作用下可发生不同程度的解聚。Western-blotting试验证实,兔抗血清能识别欧洲鳗黏膜Ig的二聚体、解聚体、重链和81kD、84kD处的蛋白带,显示出黏膜Ig的抗原特异性。欧洲鳗黏膜Ig与血清Ig在结构和抗原性上的差异,为进一步探讨欧洲鳗是否存在相对独立的黏膜免疫系统奠定了基础。

关键词：欧洲鳗免疫球蛋白亲和层析结构组成分析抗原性

欧洲鳗黏膜免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

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中国水产科学 2008年第3期15卷 511-515页

作者：杨金先陈强林娟娟朱春华刘晓东林天龙福建省农业科学院生物技术研究所莆田学院环境与生命科学系

应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了8个分泌抗欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白的单克隆抗体细胞株,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。结果显示,8株单抗中IgM有2株,Igg1和Igg2a各有3株;所有单抗均与欧洲鳗黏膜免疫球蛋白呈ELIS... 详细信息

应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了8个分泌抗欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白的单克隆抗体细胞株,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。结果显示,8株单抗中IgM有2株,Igg1和Igg2a各有3株;所有单抗均与欧洲鳗黏膜免疫球蛋白呈ELISA反应阳性,腹水抗体滴度为在104~106之间。进一步实验证实,这些单抗与供试的10种水产动物常见病原菌均无交叉反应;其中3株单抗与欧洲鳗血清IgM有不同程度的交叉反应;4株单抗与黏膜免疫球蛋白有交叉反应,其中2株单抗交叉反应较弱。以上结果提示,欧洲鳗黏膜免疫球蛋白和血清IgM之间既有各自独特的抗原决定簇,又有共同抗原位点,证实欧洲鳗黏膜抗体在抗原性方面有别于血清IgM。成功制备的这8株单抗可用于鳗黏膜免疫球蛋白的检测及其结构和功能分析,为欧洲鳗黏膜免疫的进一步研究提供工具。

关键词：欧洲鳗鲡黏膜免疫球蛋白单克隆抗体特性分析

用重组腺病毒免疫方法制备伪狂犬病病毒gC蛋白单克隆抗体

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中国兽医科学 2007年第8期37卷 684-689页

作者：陈振海杨金先宋铁英刘晓东林天龙福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003

将表达伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）gC基因的重组腺病毒经肌肉免疫BALB/c小鼠,测试了重组腺病毒免疫小鼠制备抗目的蛋白单克隆抗体的效果。ELISA分析表明,BALB/c小鼠接种重组腺病毒后能产生针对gC蛋白的特异性抗体。给BALB/... 详细信息

将表达伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）gC基因的重组腺病毒经肌肉免疫BALB/c小鼠,测试了重组腺病毒免疫小鼠制备抗目的蛋白单克隆抗体的效果。ELISA分析表明,BALB/c小鼠接种重组腺病毒后能产生针对gC蛋白的特异性抗体。给BALB/c小鼠用大肠杆菌表达的gC融合蛋白MBP-gC-NC加强免疫后第3 d,取小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞在PEg4000作用下进行杂交融合,经筛选、克隆,获得了3株稳定分泌抗PRV gC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B4、1H4和2C8。单抗特性分析结果表明,1B4、2C8属Igg2a亚类,1H4属Igg1亚类;腹水抗体的ELISA效价为1∶2×10^5～1∶2×10^6;3株单抗都具有间接免疫荧光试验（IFA）和免疫印迹试验（Western-blotting）反应特性,能够特异地识别PRV gC蛋白。证实重组腺病毒免疫可用于制备目的蛋白单克隆抗体,为制备单抗提供了一种新的方法。

关键词：重组腺病毒伪狂犬病病毒 gC蛋白单克隆抗体

中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析

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水产学报 2009年第5期33卷 840-846页

作者：朱春华刘荭刘晓东杨金先郑在予林天龙福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业科学院畜牧兽医研究所深圳出入境检验检疫局

以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明,M ab2A4属IgA,M ab8E1是Igg2a,其他的6株单抗M ab1D3、M ab... 详细信息

以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明,M ab2A4属IgA,M ab8E1是Igg2a,其他的6株单抗M ab1D3、M ab2H1、M ab3A1、M ab4B5、M ab5E1和M ab6F2均为Igg1。酶联免疫吸附剂测定(ELISA)分析表明,8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒,与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应,腹水抗体的ELISA效价在105106。IFA分析表明,8株单抗中仅M ab5E1没有免疫荧光反应特性,其余7株单抗均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。中和试验结果证实8株单抗均没有中和病毒的特性。应用W estern-blotting进行中华鳖虹彩病毒的抗原表位初步分析,结果显示:M ab1D3和M ab2A4分别识别分子量为84 ku和35 ku中华鳖虹彩病毒结构蛋白,M ab3A1能够同时识别分子量分别为14 ku和16 ku的两条多肽,说明这3株单抗结合位点是非构象依赖性抗原决定簇,其余单抗不具备W estern-blotting反应特性。这些结果提示上述单抗对中华鳖虹彩病毒抗原特异、灵敏,可用于中华鳖虹彩病毒的检测和结构蛋白分析。

关键词：中华鳖虹彩病毒单克隆抗体抗原

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一株牛蛙源虹彩病毒的分离及鉴定

中国动物传染病学报 2012年第1期20卷 16-21页

作者：刘晓东杨金先龚晖朱春华林天龙福建省农业科学院生物技术研究所福州350003 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013

用鲤鱼表皮瘤细胞系(epithelioma papulosum cyprini cell line,EPC)从福建省某美洲牛蛙养殖场分离到一株病毒FJ049。感染病毒的EPC呈现细胞圆缩、颗粒增多、脱落等特征性病变。间接免疫荧光检测结果表明,感染FJ049的EPC细胞与虹彩病毒... 详细信息

用鲤鱼表皮瘤细胞系(epithelioma papulosum cyprini cell line,EPC)从福建省某美洲牛蛙养殖场分离到一株病毒FJ049。感染病毒的EPC呈现细胞圆缩、颗粒增多、脱落等特征性病变。间接免疫荧光检测结果表明,感染FJ049的EPC细胞与虹彩病毒单克隆抗体反应并出现特异性的胞浆荧光。采用PCR对虹彩病毒主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因保守区域进行扩增,扩增出531 bp的特异性基因片段。MCP基因同源性和遗传进化分析结果表明分离株FJ049与沼泽绿牛蛙虹彩病毒RgV9808的核苷酸同源性最高,为99.8%,属于虹彩病毒科蛙病毒属。

关键词：鲤鱼表皮瘤细胞系牛蛙虹彩病毒分离鉴定

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新世纪福建水产科技发展趋势

福建农业学报 2000年第S1期15卷 252-255页

作者：许斌福林能锋杨金先俞伏松陈强刘晓东林天龙福建省农业科学院鱼病研究中心福建福州350003

随着福建省水产养殖品种不断增加 ,养殖规模的不断扩大 ,相应要求水产科技发生质的飞跃 ,包括将健康生态养殖、鱼类遗传育种、动物营养饲料、生物病害防治等方面的现代生物科学技术逐渐运用于水产业。现代科技进步 ,为我省 2 1世纪水产... 详细信息

随着福建省水产养殖品种不断增加 ,养殖规模的不断扩大 ,相应要求水产科技发生质的飞跃 ,包括将健康生态养殖、鱼类遗传育种、动物营养饲料、生物病害防治等方面的现代生物科学技术逐渐运用于水产业。现代科技进步 ,为我省 2 1世纪水产业的可持续发展指明了新方向、开辟了新道路。

关键词：可持续发展生物技术水产养殖

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欧洲鳗免疫球蛋白单克隆抗体的制备与特性

水产学报 2001年第6期25卷 532-537页

作者：林天龙陈强龚晖刘晓东俞伏松杨金先董传甫福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省农业科学院地热农业利用研究所华中农业大学水产学院福建福州350013 福建福州350003

应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了 13个分泌抗欧洲鳗免疫球蛋白的单克隆抗体细胞株 ,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。经抗体级份和亚级份测定 ,其中IgM有 3株 ,Igg1有 5株 ,Igg2a有 3株 ,Igg2b有 2株 ;所有的单克隆抗体与欧鳗免疫... 详细信息

应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了 13个分泌抗欧洲鳗免疫球蛋白的单克隆抗体细胞株 ,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。经抗体级份和亚级份测定 ,其中IgM有 3株 ,Igg1有 5株 ,Igg2a有 3株 ,Igg2b有 2株 ;所有的单克隆抗体与欧鳗免疫球蛋白均有ELISA反应特性 ,抗体滴度 10 4～ 10 7,有七株单抗具有WESTERNBLOT反应特性 ,能在变性条件下识别欧鳗免疫球蛋白的重链。进一步实验证实这些单抗能特异地识别欧洲鳗、日本鳗的免疫球蛋白 ,而与鲫、淡水白鲳、罗非鱼、胡子鲶、美洲斑点叉尾血清免疫球蛋白以及水产动物常见病原菌如气单胞菌、爱德华氏菌、弧菌、柱状屈桡杆菌、沙门氏菌及大肠杆菌等无任何交叉反应。单克隆抗体 9D7,对纯化的欧洲鳗免疫球蛋白的检测灵敏度为 16ng。实验结果证明这些单抗具有高度特异、高度灵敏等特点 ,可用于鳗鲡免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断 ,具有广阔的应用前景

关键词：欧洲鳗鲡单克隆抗体免疫球蛋白

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

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福建农业学报 2004年第4期19卷 238-242页

作者：方勤美林天龙龚晖杨金先刘晓东福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼... 详细信息

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。

关键词：嗜水气单胞菌免疫刺激复合物(ISCOMs) 免疫

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欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

水产学报 2006年第6期30卷 806-811页

作者：林娟娟杨金先陈强俞伏松刘晓东林天龙福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003 莆田学院环境与生命科学系福建莆田351100

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗鲡免疫球蛋白(Ig),并对欧鳗Ig的结构和抗原性进行分析。层析结果表明:Ig蛋白呈现一个锐形曲线,蛋白峰与抗原活性峰高度重叠。SDS-PAgE分析表明:欧鳗Ig重链分子量为68kD,轻链有3条,分子量分别为21kD、23kD和2... 详细信息

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗鲡免疫球蛋白(Ig),并对欧鳗Ig的结构和抗原性进行分析。层析结果表明:Ig蛋白呈现一个锐形曲线,蛋白峰与抗原活性峰高度重叠。SDS-PAgE分析表明:欧鳗Ig重链分子量为68kD,轻链有3条,分子量分别为21kD、23kD和26kD。凝胶电泳结果显示:在非变性非还原条件下,欧鳗Ig有790kD和350kD2条蛋白带,在变性非还原条件下有790kD、593kD和350kD3条蛋白带。Western-blotting试验证实:兔抗欧鳗Ig能识别欧鳗Ig的多种不同聚合体和Ig的重链,但不能识别Ig的轻链。结论:欧鳗Ig在自然条件下可能以四聚体和二聚体的形式存在,这与其它硬骨鱼的Ig形式有差异。欧鳗Ig链间二硫键不健全,在SDS作用下可解聚产生多种不同分子量的聚合体,首次揭示欧鳗Ig的轻链有3种异型。

关键词：欧洲鳗鲡免疫球蛋白亲和层析结构分析抗原性分析