中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析

作     者：朱春华 刘荭 刘晓东 杨金先 郑在予 林天龙 ZHU Chun-hua;LIU Hong;LIU Xiao-dong;YANG Jin-xian;ZHENG Zai-yu;LIN Tian-long

作者机构：福建省农业科学院生物技术研究所 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 深圳出入境检验检疫局 

出 版 物：《水产学报》 (Journal of Fisheries of China)

年 卷 期：2009年第33卷第5期

页      面：840-846页

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：国家“八六三”高技术研究发展计划(2006AA100306) “十一五”国家科技支撑计划重点项目(2006BAK10B06) 国家质量监督检验检疫总局科研项目(2007IK022) 福建省科技计划项目(2009N2003) 

主　　题：中华鳖 虹彩病毒 单克隆抗体 抗原 

摘      要：以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb/C小鼠,取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明,M ab2A4属IgA,M ab8E1是IgG2a,其他的6株单抗M ab1D3、M ab2H1、M ab3A1、M ab4B5、M ab5E1和M ab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定(ELISA)分析表明,8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒,与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应,腹水抗体的ELISA效价在105106。IFA分析表明,8株单抗中仅M ab5E1没有免疫荧光反应特性,其余7株单抗均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。中和试验结果证实8株单抗均没有中和病毒的特性。应用W estern-blotting进行中华鳖虹彩病毒的抗原表位初步分析,结果显示:M ab1D3和M ab2A4分别识别分子量为84 ku和35 ku中华鳖虹彩病毒结构蛋白,M ab3A1能够同时识别分子量分别为14 ku和16 ku的两条多肽,说明这3株单抗结合位点是非构象依赖性抗原决定簇,其余单抗不具备W estern-blotting反应特性。这些结果提示上述单抗对中华鳖虹彩病毒抗原特异、灵敏,可用于中华鳖虹彩病毒的检测和结构蛋白分析。