检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

第十三届全运会江苏女子手球队进攻特征研究

第十三届全运会江苏女子手球队进攻特征研究

作者：赵佳芹首都体育学院

学位级别：硕士

江苏女子手球队于2002年在常州成立,球队采取省队市办模式,由江苏省体育局和常州市政府共同承办。江苏女子手球队的成长历程从第十届江苏全运会的第六到第十三届天津全运会的冠军。储备了15年,终于,江苏女手的姑娘们如愿以偿地站到了最... 详细信息

江苏女子手球队于2002年在常州成立,球队采取省队市办模式,由江苏省体育局和常州市政府共同承办。江苏女子手球队的成长历程从第十届江苏全运会的第六到第十三届天津全运会的冠军。储备了15年,终于,江苏女手的姑娘们如愿以偿地站到了最高领奖台。通过对第十三届全运会江苏女子手球队比赛统计的分析,从中找出江苏女手与各个专业队的区别在哪里?整体进攻的特点在哪里?制胜的因素在哪里?并归纳总结出进攻特征。为今后江苏女子手球队的手球道路提供一份有价值的参考资料。本研究采用文献资料法、专家访谈法、录像观察法、数理统计法和逻辑分析法这五种方法针对江苏女子手球队在第十三届全运会女子手球前四名队伍的比赛中进行了总得分、阵地配合与快攻形式得分、射门位置与射门方式得分、配合形式下的射门位置与射门方式得分、阵地配合与快攻形式下的失误和7M球得分的分析。研究结果如下:1江苏女子手球队年龄层搭配合理,个人能力突出,老队员经验丰富,把控比赛节奏。所以总射门次数和总射门成功率在四支队伍里最高。扎实的基本功使江苏队的失误较少。2江苏女子手球队在阵地进攻中主要以突分和掩护为主。射门位置主要集中在9M中间、6M左45度、6M中间和右边。3江苏女子手球队的快攻反击是取胜的关键。快攻发动时机主要以断球、球门球和中场抢发为主,居四支队伍之首。快攻路线以中路和右路居多。全队发动快攻是江苏队快攻的主要得分方式。4江苏女子手球队在配合形式下的射门位置主要集中在9M中间、6M左45度,、6M中间和右边锋。5江苏女子手球队在配合形式下的射门方式主要以倒地、2步跳起和3步跳起为主。6江苏女子手球队进攻以反击快攻为先导,迅速衔接转入阵地进攻,并以突分和掩护的进攻基础配合为主,形成内外结合、边卫结合和边内结合的进攻特点。7江苏女子手球队不足之处:9M区域的外围实力较薄弱。6M右45度和左边锋是江苏队攻击较少位置。快攻左路意识、能力还有待提高。

关键词：第十三届全运会江苏省女子手球队进攻特征

细菌性甘薯茎腐病菌Dickeya dadantii的检测

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

细菌性甘薯茎腐病菌Dickeya dadantii的检测

作者：吴秀芹浙江大学

学位级别：硕士

Dickeya dadantii引起的甘薯茎腐病是甘薯的一种毁灭性细菌病害,在国内外均有发生。中国是最大的甘薯生产国,甘薯茎腐病严重损害甘薯产业的健康发展。甘薯茎腐病病原菌被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》,但目前国内... 详细信息

Dickeya dadantii引起的甘薯茎腐病是甘薯的一种毁灭性细菌病害,在国内外均有发生。中国是最大的甘薯生产国,甘薯茎腐病严重损害甘薯产业的健康发展。甘薯茎腐病病原菌被列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》,但目前国内外尚无针对D.dadantii的检测方法。本研究基于Dickeya属细菌全基因组序列,设计D.dadantii特异引物,建立特异灵敏的检测甘薯茎腐病菌的方法。本研究通过基因组系统发育分析和基因组相似度比较确定了Dickye 属内各种细菌的分类地位,用基于细菌全基因组序列高通量设计引物的程序流程（Find Differential Primers Pipeline）和泛基因组学分析发现种特有标志基因两种方法设计D.dadantii特异引物,PCR检测筛选出1对D.dadantii诊断引物Dad1-F（5’-CATATCAACCAGACCAGCCGTT）和 Dad1-R（5’-CGGCCTGCTTTTAAACAACGTATTA）,用该引物对能且只能从D.dadantii菌株中扩增到167-bp目的片段。基于该特异引物对建立了常规PCR、实时荧光定量PCR和免疫捕捉PCR三种检测方法。常规PCR对DNA的检测限为50 pg·μL-1,对接种土壤、甘薯茎和甘薯块根的检测限为2×105 CFU·g-1。实时荧光定量PCR对DNA的检测限为500fg·μL-1,对接种土壤、甘薯茎和甘薯块根的检测限为2×104 CFU·g-1,并建立了该引物对的qPCR扩增标准曲线y=-1.9271x+36.607,拟合系数为0.9883。免疫捕捉PCR对接种甘薯茎和甘薯块根检测限为2×107CFU·g-1,对接种土壤的检测限为2×106CFU·g-1。本研究建立了特异灵敏的常规PCR、qPCR和免疫捕捉PCR方法检测D.dadantii特有标志基因,为鉴定检测甘薯茎腐病病原菌提供了有效方法,对于检验检疫病原菌、田间监测病原菌和防控甘薯茎腐病有重要意义。

关键词：狄克氏菌菊欧文氏菌软腐病基因组学保守标志蛋白

猪源NOD1和NOD2的免疫生物学功能研究及其应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

猪源NOD1和NOD2的免疫生物学功能研究及其应用

作者：朱美芹扬州大学

学位级别：硕士

哺乳动物在生长发育过程中会不断受到外界环境中病原微生物的侵染,从而它们进化出了比较完善的免疫系统来抵制外界病原体的侵染。免疫系统可分为固有免疫系统和获得性免疫系统,固有免疫系统是机体抵抗外来致病因子入侵的第一道防线,主... 详细信息

哺乳动物在生长发育过程中会不断受到外界环境中病原微生物的侵染,从而它们进化出了比较完善的免疫系统来抵制外界病原体的侵染。免疫系统可分为固有免疫系统和获得性免疫系统,固有免疫系统是机体抵抗外来致病因子入侵的第一道防线,主要是通过模式识别受体（PRRs）识别高度保守的病原相关分子模式（PAMPs）,然后再经过细胞中的一系列信号级联反应激活免疫应答的发生。最近的研究显示,作为模式识别受体NOD样受体（NLRs）蛋白家族中最具有代表性的NOD1和NOD2,可以通过识别特异性配体二氨基庚二酸（iE-DAP）和胞壁酰二肽（MDP）而迅速启动固有免疫反应,并能通过激活NF-κB和MAPK等信号传导途径,在机体免疫防御细菌感染中发挥作用;也有报道显示它们可以识别和抵抗病毒感染,虽然具体机制尚不清楚。在畜牧业发展的今天,猪作为一种重要的模式动物,同时也是重要的经济动物,猪的健康与人类的生活需求一脉相连。因此,本研究从猪源细胞中克隆出NOD1和NOD2两种受体编码基因并构建真核表达质粒来鉴定两种受体蛋白表达和信号功能;另外,通过构建NOD1和NOD2基因敲除细胞系进一步鉴定它们在抗病原微生物感染中所发挥的重要作用;最后还通过构建NOD1原核表达质粒进行蛋白纯化和单克隆抗体制备,这为后期进一步研究提供良好的生物材料。具体研究内容分为以下三个部分:1猪源NOD1（pNOD1）、NOD2（pNOD2）基因克隆表达及信号功能鉴定分别从猪的PAM和PK15细胞中RT-PCR扩增出pNOD1和pNOD2两个受体编码基因的全长cDNA序列,pNOD1为2867bp,pNOD2为3039bp。利用Gateway LR克隆技术成功构建了 C-端分别携带2HA和3FLAG标签的真核表达质粒pcDNA-pNOD1和pcDNA-pNOD2。Western blotting检测pNOD1和pNOD2的蛋白表达水平,蛋白大小都约为125kDa,pNOD1的蛋白表达水平较高,而pNOD2蛋白的表达水平较低。对pNOD1和pNOD2信号功能进行鉴定:将真核表达质粒与ELAM（NF-κB）启动子虫萤光素酶报告基因、肌动蛋白启动子海肾荧光素报告基因共转染HEK293T细胞,分别用特异性配体iE-DAP和MDP的刺激,双荧光素酶报告系统检测结果显示,pNOD1具有较强的组成性活性,pNOD1和pNOD2都可以识别相应特异性配体介导下游NF-κB信号活化。同时定量RT-PCR检测pNOD1和pNOD2转染HEK293T细胞下游基因表达,结果表明下游细胞因子IL-8的转录水平明显上升,与下游NF-κB信号活化一致。运用启动子报告基因试验分析pNOD1和pNOD2信号功能关系,没有发现明显的相互抑制或者促进作用。另外,将pNOD2转染NF-κB双荧光素酶信号HEK293报告细胞,用G418筛选获得pNOD2-NF-κB双荧光素酶信号稳定报告细胞。成功构建的pNOD2-NF-κB双荧光素酶稳定报告系为以后的筛选工作提供了有效工具。2 pNOD1和pNOD2抗病原微生物作用鉴定利用CRISPR-cas9技术,分别设计pNOD1和pNOD2基因对应的gRNAs,将gRNAs与慢病毒载体pLentiCRISPRv2连接,对测序正确的gRNAs病毒重组载体进行功能鉴定。将pNOD1和pNOD2表达质粒和对应的gRNAs载体共转染HEK293T细胞,Western blotting检测分析鉴定gRNAs有效性和特异性。将鉴定的gRNAs质粒进行慢病毒包装,病毒上清液分别感染PAM、PK15和IPEC-J2细胞,经过嘌呤霉素的筛选,获得最终存活的基因敲除（KO）稳定细胞系。将构建好的pNOD1、pNOD2KO和载体对照稳定细胞系用于感染鼠伤寒沙门氏菌（PAM）、猪大肠杆菌（PK15）、猪和人流感病毒（PAM）、猪流行性腹泻病毒（IPEC-J2）,细菌计数和qRT-PCR结果显示与对照相比,pNOD1 KO和pNOD2 KO细胞系感染以上病原微生物时,细菌增殖以及病毒复制水平都显著上升;其中pNOD1 KO和pNOD2 KO细胞系在感染鼠伤寒沙门氏菌和流感病毒后下游基因主要是抗病毒蛋白基因的转录水平明显下降。这说明pNOD1和pNOD2在宿主受到病原侵染时发挥防御作用的重要性。3重组pNOD1原核蛋白表达及单克隆抗体的制备Gateway LR克隆技术构建原核表达质粒pDest527-pNOD1,并将其转化至大肠埃希菌DE3/BL21,Western-blotting检测到目的蛋白的正确表达,目的重组蛋白主要在沉淀中表达。选择优化表达条件大量培养重组菌并诱导表达蛋白,从细菌沉淀中纯化包涵体,包涵体蛋白用8M尿素变性再用浓度梯度6M、4M、2M、0M尿素依次复性最终得到可溶性蛋白。将目得pNOD1纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度为1:10000-1:50000。将免疫

关键词：天然免疫 pNOD1 pNOD2 信号活性抗感染单克隆抗体

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Y公司战略扩张的困境及对策研究

Y公司战略扩张的困境及对策研究

作者：郑小芹华南理工大学

学位级别：硕士

民营企业是伴随着中国改革开放而成长起来的,一直在中国国民经济的舞台上扮演着非常重要的角色。战略扩张是企业谋求发展与转型的重要途径。为了寻求企业生存、发展和业务规模突破,民营企业在发展过程中积极进行扩张活动。成功实施战略... 详细信息

民营企业是伴随着中国改革开放而成长起来的,一直在中国国民经济的舞台上扮演着非常重要的角色。战略扩张是企业谋求发展与转型的重要途径。为了寻求企业生存、发展和业务规模突破,民营企业在发展过程中积极进行扩张活动。成功实施战略扩张的企业不仅能扩大盈利,也能促进企业中具有产业链关联的业务之间的内部协同,提高生产效率。但是,失败的战略扩张同时也会加大企业的经营风险和财务风险,比如业务之间未产生预期的协同效应、企业资源过于分散都会增加企业的风险,对民营企业的稳步发展和可持续性成长造成不利影响。本文以Y公司的战略扩张行为为研究对象,主要运用文献研究法、统计分析法、案例研究法和对比分析法,对Y公司战略扩张的进展及扩张后陷入困境的原因进行分析,提出了企业摆脱战略扩张困境的相应对策。本文包括四章。第一章为绪论,介绍了本文的研究背景和研究意义,综述了与企业扩张及其战略相关的理论和文献,说明了本文的研究内容和研究方法。第二章至第四章是本文的主体部分:首先,描述了Y公司发展历程以及战略扩张进展的相关特征。Y公司通过设立子公司进行大规模投资,在多个地区进行产业布局,由于投资决策失误,过程把控不当以及行业不景气等影响,投资项目收益均未能达到预期,导致其投资收益与业务布局规模不成正比,经营状况随之不断恶化,最终使企业陷入经营和财务困境;其次,针对Y公司战略扩展的过程和陷入困境的原因进行分析,分别从Y公司的外部行业环境、财务方面以及公司治理三个角度寻找Y公司扩张发展过程中存在的问题及原因。造成Y公司战略扩张困境的主要原因是:管理方式粗放、内部治理存在缺陷、经营成本控制不力、投资项目盲目、筹资策略欠佳和风险意识薄弱等;最后,就Y公司如何摆脱战略扩张困境提出了以下对策:（1）企业应在理性实施扩张战略的前提下,根据自身情况调整发展策略和布局;（2）通过加大研发投入和创新力度等方式提高企业的盈利能力,培养核心人才和建立高素质人才队伍,以保持企业良性经营的可持续性;（3）企业还需要完善其自身的内部治理结构与建立健全相关的风险控制制度;（4）提高资产周转率和订单的交付能力,使企业资产结构配置合理以便获得更高的利润;（5）规范和完善公司投资决策程序,对投资项目价值进行客观评价,切防盲目冒进;（6）充分地利用上市融资平台,完善公司融资结构,降低融资成本和融资风险。

关键词：战略扩张困境对策

基于礼俗文化研究的独立设计品牌语义建构与设计

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于礼俗文化研究的独立设计品牌语义建构与设计

作者：谢文芹四川美术学院

学位级别：硕士

物质文明的快速发展、信息传播的变革性巨变,正在引发日常生活方式的巨大变化。传统礼俗,在我国有着悠久的历史,在文化创意的时代背景下、消费日益升级的商业趋势中,正在逐渐复苏成为有温度的人际纽带,以礼俗为主题的礼品、生活用品和... 详细信息

物质文明的快速发展、信息传播的变革性巨变,正在引发日常生活方式的巨大变化。传统礼俗,在我国有着悠久的历史,在文化创意的时代背景下、消费日益升级的商业趋势中,正在逐渐复苏成为有温度的人际纽带,以礼俗为主题的礼品、生活用品和创意产品成为市场的热点,以礼俗链接的文化现象亦成为撬动品牌、生活、消费、社交等新的生活方式的动力。礼俗文化带动的礼品行业,曾经由于市场基础的不充分,同时传统礼俗文化与现代生活的断裂,与日常生活并不紧密,因而缺乏发展动力,特色产品也不突出。当下的文化复兴和消费升级,以礼俗文化为资源,重新链接传统礼俗与日常生活关联的需求变得日益迫切。礼俗文化品牌或礼俗品牌,在本文中主要指以传统礼俗文化为内涵的产品品牌,多集中在文化用品、生活创意产品、礼品等范围,相较于其他日常生活品牌,它强调满足人们的情感需求,突出体现礼物馈赠行为的内涵特征。基于其特殊的文化内涵、审美意识,以及消费使用场景,将更聚焦于具有独立原创等特点的独立设计品牌为调研蓝本。本课题基于礼俗文化的研究与理解,梳理独立设计品牌的概念及特征,导入品牌研究的方法,以现代艺术审美为导向,活化传统礼俗文化,进行独立设计品牌的语义建构与设计,探索其中的方法和可能性,增强人们对礼俗文化品牌的认知,以希获得设计的判断与标准,并通过实际案例“喜是”品牌设计进行例证。全文共包含六个章节:第一章,详细介绍了本课题的研究背景与现状、研究对象与内容、研究目的与意义、研究方法与思路及创新点。第二章,从文创语境下解读生活方式的变化,分析品牌设计的趋势——环境导致趋势。第三章,从视觉传达视阈剖析礼俗文化,分析礼俗文化的特征与独立设计品牌的特征与发展,寻找设计介入链接礼俗文化与现代生活方式的方法——趋势产生需求。第四章,结合实际案例从礼俗文化角度对独立设计品牌进行语义建构,并具体进行品牌调研、品牌策划、品牌定位等研究——需求引发设计。第五章,基于对礼俗文化的研究通过实践案例“喜是”品牌进行例证。第六章,对本课题进行归纳与总结。

关键词：礼俗文化独立设计品牌语义品牌设计

基于5E教学模式下高中信息科技概念学习的实证研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

基于5E教学模式下高中信息科技概念学习的实证研究

作者：徐顺芹上海师范大学

学位级别：硕士

信息科技课程的开设在数字信息化时代为国家信息技术的发展灌输新血液、培养新骨干。掌握好信息技术基础知识与技能是学习者真正了解与掌握一门课程的铺路石,是所有高层次教育目标的引导线。当下“媒体、信息与技术”消费观充斥着我国... 详细信息

信息科技课程的开设在数字信息化时代为国家信息技术的发展灌输新血液、培养新骨干。掌握好信息技术基础知识与技能是学习者真正了解与掌握一门课程的铺路石,是所有高层次教育目标的引导线。当下“媒体、信息与技术”消费观充斥着我国信息技术教育行业,导致教学仅重视学生是否能够利用已有的软件工具,完成日常生活中的信息浏览、加工与表达,而对于学生是否真正理解、掌握基础性概念知识点没有深层次的教学研究与探讨。对于高中信息科技课程,如何顺应教育潮流、关注学习者特征,设计适宜的教学活动以改善学习者对概念知识点的学习态度,提高概念知识点的教学效果,是本研究的重点。本研究基于5E教学模式的基本理念,以《高中信息科技(第一册)(试用版)》中的原理性概念知识作为教学内容,课前调查学习者的先前认知,以了解其认知情况;课中按照5E教学模式自主构建的概念教学框架设计交互性教学课件并展开概念教学实验;课后巩固反思,调查概念掌握情况,作前后对比分析。试图解决问题:5E教学模式下构建的概念教学框架对高中信息科技概念教学的效果性与有效性如何?有效性主要表现在:1.在教学前后概念学业成绩如何?是否存在差异性?2.在教学前后学习者关于本学科概念学习的学习态度是否有所改善?围绕上述研究问题,本研究采用问卷调查法、访谈法以及准实验法进行以下四方面的研究:1.查阅大量文献资料,查找关于概念教学的教学模式,自主构建关于本学科的概念教学框架。2.分析《高中信息科技(第一册)》中的概念知识点,选取具有代表性的原理性概念知识进行相应的教学活动设计与辅助课件资源的制作。3.基于5E教学模式下构建的概念教学框架对实验班开展教学,与此同时对照班以常规方式教学。在教学前后,分别对两个班级进行概念学业测试与学习态度的情况调查。4.整理与分析收集到的数据,来获取实验结论。通过多次教学实验研究发现,基于5E教学模式下构建的概念教学框架在高中信息科技课程概念知识教学的应用,实验班的概念学习效果要比常规式教学的对照班显著;同时在此教学模式下,实验班的学习者对本学科概念知识的学习态度有了明显的转变,与对照班的常规教学相比,其学习兴趣与动机都有明显提高。本研究的研究问题得到解决,5E教学模式下构建的概念教学框架在高中信息科技概念教学的应用,转变了学习者关于概念知识的学习态度,提升了学习者的概念学业成绩,使得本学科概念知识的教学效果发生质的变化。

关键词： 5E教学模式高中信息科技概念学习学习态度

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

青岛某项目钢结构钢网架安装技术分析

青岛某项目钢结构钢网架安装技术分析

作者：张丽芹青岛理工大学

学位级别：硕士

近年来,随着我国大跨度建筑物的不断发展,形态各异的网架结构作为一种广受建筑设计师青睐的结构形式被广泛应用到体育馆、飞机库、展览馆等公共建筑中。目前,针对以四角锥或三角锥作为基本单元构成的空间网架结构的施工方法的研究较多,... 详细信息

近年来,随着我国大跨度建筑物的不断发展,形态各异的网架结构作为一种广受建筑设计师青睐的结构形式被广泛应用到体育馆、飞机库、展览馆等公共建筑中。目前,针对以四角锥或三角锥作为基本单元构成的空间网架结构的施工方法的研究较多,也积累了较多的工程实践经验,但其施工过程中冗杂的力学问题和高难度的安装就位技术仍困扰着设计人员和施工现场的工作人员。因此,对空间网架结构施工方法展开深入的研究,在借鉴其他地区对钢网架施工方法研究的基础上,结合本项目的实际施工,为其它相似工程大跨度结构安装提供有益的借鉴,是非常必要和有意义的。本文主要的研究内容包括:(1)针对国内外各种大跨空间钢网架结构形式常用施工方法进行深入研究,为本项目的施工方法的确定奠定理论基础;(2)以青岛某项目为工程背景,在对其工程概况和钢网架施工方案深入了解的基础上,对比分析并选择钢网架结构安装方案,从施工方法选择、施工顺序、吊装思路及吊装设备选型几个方面入手,分别对工程各部分钢网架的拼接方案和吊装方案进行深入分析研究,并提出合理的施工措施;(3)针对该项目各部分钢网架施工时的各阶段进行施工力学数值模拟分析,确定其可行性。通过本文的研究,得到的主要结论如下:使用Midas Gen软件对各种最不利工况下的支撑杆件、滑移轨道进行设计模拟验算,通过对设计验算结果的分析,发现各个指标都符合规范的要求,说明了设计方案的安全可靠性,表明该项目的施工方法具有较好的实用价值。

关键词：大跨度结构钢网架滑移法数值模拟施工方案

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

网络直播对大学生影响研究

网络直播对大学生影响研究

作者：郭亚芹内蒙古师范大学

学位级别：硕士

2019年是新中国成立70周年,在这七十年里我国发生了翻天覆地的变化,无论是在政治领域、经济领域、文化领域还是在其他各个领域中都取得了瞩目的成就。在科技领域信息技术的发展尤为突出,4G网络、无线网络的出现为我国的政治、经济、文... 详细信息

2019年是新中国成立70周年,在这七十年里我国发生了翻天覆地的变化,无论是在政治领域、经济领域、文化领域还是在其他各个领域中都取得了瞩目的成就。在科技领域信息技术的发展尤为突出,4G网络、无线网络的出现为我国的政治、经济、文化领域等的发展做出了巨大的贡献。随着4G、无线网络的普及,一些衍生产品不断出现,网络直播就这样应运而生。网络直播具有以往一些的社交软件所没有的特色,得到更多的人的喜爱与使用。大学生是最容易接受新鲜事物的群体,在大学生这个群体中观看网络直播的行为是非常流行的,但是网络直播呈现出“泛娱乐化”的发展倾向,并且暴露出了很多的问题。与此同时,大学生还没有形成比较成熟的价值观,所以他们的价值观很容易受到冲击。本文主要从四个部分来进行网络直播对大学生影响研究。首先,笔者从理论方面入手,对网络直播、大学生给出了界定。其次,笔者就大学生使用网络直播的现状进行了调查,在内蒙古自治区11所高校中进行了调查问卷的发放。再次,根据问卷法的数据整合分析出网络直播对大学生既有积极的影响也存在着消极的影响。并对消极影响的产生缘由从国家、高校、大学生自身三个层面进行了探究。最后,在消除网络直播对大学生价值观的消极影响的策略这一部分,对应消极影响产生的原因,从国家、高校、大学生这三个层面提出了应该采取的举措。

关键词：网络直播大学生影响

miR200c靶基因PCDH8对食管鳞癌增殖、侵袭和血管生成的作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

miR200c靶基因PCDH8对食管鳞癌增殖、侵袭和血管生成的作用

作者：蒋小芹东南大学

学位级别：硕士

目的研究miR-200c靶基因PCDH8对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、侵袭及血管形成的作用。方法采用TargetScan、PicTar等miRNA靶基因预测软件筛选出miR-200c候选靶基因PCDH8;荧光素酶报告基因实验验证PCDH8为miR-200c的靶基因;免疫组化检测食管... 详细信息

目的研究miR-200c靶基因PCDH8对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、侵袭及血管形成的作用。方法采用TargetScan、PicTar等miRNA靶基因预测软件筛选出miR-200c候选靶基因PCDH8;荧光素酶报告基因实验验证PCDH8为miR-200c的靶基因;免疫组化检测食管鳞癌组织中PCDH8的表达并分析其与临床病理参数间的关系;qPCR及检测KYSE-150细胞株与HET-1A细胞株的PCDH8和miR-200c mRNA及蛋白的表达Western blotting水平;PCDH8基因过表达载体转染KYSE-150细胞株,观察转染后KYSE-150细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成的改变。结果(1)荧光素酶报告基因实验证实PCDH8为miR-200c的靶基因;(2)与对照组相比,食管鳞癌组织中PCDH8表达降低(P<0.05),PCDH8表达与肿瘤大小(P值=0.011)、组织学分级(P值=0.002)和淋巴结转移(P值=0.017)相关;(3)与正常食管鳞状上皮HET-1A细胞相比,KYSE-150细胞miR-200c表达显著增加(P<0.05),而PCDH8表达降低(P<0.05);(4)CCK8检测显示过表达PCDH8的KYSE-150细胞增殖受到抑制;(5)Transwell法显示PCDH8过表达KYSE-150细胞的侵袭能力显著降低;(6)定量ELISA检测显示,PCDH8过表达的KYSE-150细胞中VEGFA表达下调;(7)血管形成实验表明,PCDH8过表达的KYSE-150细胞的血管形成降低。结论(1)PCDH8是miR-200c的靶基因,miR-200c抑制食管鳞癌细胞与组织中PCDH8的表达;(2)食管鳞癌组织中,miR-200c表达上调,而PCDH8表达下调,提示两者参与了食管鳞癌的发生、发展过程;(3)转染PCDH8的食管癌细胞株KYSE-150,其增殖、侵袭及血管形成降低,而细胞凋亡增加,提示PCDH8在食管癌中可能发挥着抑癌基因的作用。

关键词： PCDH8 鳞状细胞癌细胞增殖侵袭、转移预后