检索结果-南通市图书馆

中国医院药学杂志 2001年第9期21卷 548-549页

作者：杨希才卢爱英施伟济南市中心医院山东济南250013

目的:探讨异丙酚静脉麻醉在人工流产中的应用。方法:观察异丙酚在人工流产术中的镇痛效果。结果:异丙酚麻醉受术者镇痛效果高于非麻醉组，总有效率为100%。结论:异丙酚可用于人工流产术中的麻醉，值得临床推广应用。

关键词：异丙酚人工流产静脉麻醉

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锤头型核酶作用机理的研究进展

生物化学与生物物理进展 1999年第5期26卷 422-425页

作者：邓文生杨希才彭毅康良仪中国科学院微生物研究所北京100080

概述了锤头型核酶的二级结构特征，动力学反应的特点以及核酶切割反应的催化机制，

关键词：锤头型核酶动力学反应催化机制

神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达

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微生物学报 2004年第2期44卷 210-214页

作者：张朝春梁伟锋杨希才中国科学院微生物研究所北京100080

根据人神经营养素 3(Humanneurotrohin 3,hNT 3)的基因序列 ,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱的形式 ,设计了 10条 36～ 5 9nt的寡聚核苷酸引物 ,通过 5次连续PCR反应 ,获得了人工合成的NT 3cDNA片段 (简称NT... 详细信息

根据人神经营养素 3(Humanneurotrohin 3,hNT 3)的基因序列 ,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱的形式 ,设计了 10条 36～ 5 9nt的寡聚核苷酸引物 ,通过 5次连续PCR反应 ,获得了人工合成的NT 3cDNA片段 (简称NT 3b基因 )。将合成的NT 3b基因克隆到pPIC9K质粒上 ,获得重组表达载体pPIC9K NT 3b。将重组表达载体pPIC9K NT 3b和pPIC9K hNT 3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株 ,经筛选得到重组转化子。不同转化子经甲醇诱导 ,表达产物进行SDS PAGE检测、Westernblot检测和ELISA分析 ,结果表明 ,NT 3b基因和hNT 3基因成功获得分泌性表达 ,从整体水平上 ,使用偏爱密码子的NT 3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT 3基因 (x2 =4 .334,P <0 .0 5 ) ,表达量在诱导后 72～ 96h最高 ,达到 31mg L左右。

关键词：神经营养素-3 基因人工合成毕赤酵母分泌性表达偏爱密码子真核蛋白表达系统

自切割核酶介导的转基因淋巴细胞有效抑制猴免疫缺陷病毒的感染和致病

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中华医学杂志 2001年第4期81卷 222-226页

作者：邓文生张奉学杨希才符林春康良仪中国科学院微生物研究所北京100080 广州中医药大学热带医学研究所

目的　获得抗猕猴免疫缺陷病毒 (SIV)转基因的淋巴细胞。方法　将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 ,人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescriptSK的XhoI SalI位点 ,通过连续 4次克隆获得 10拷贝核酶基... 详细信息

目的　获得抗猕猴免疫缺陷病毒 (SIV)转基因的淋巴细胞。方法　将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶 ,人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescriptSK的XhoI SalI位点 ,通过连续 4次克隆获得 10拷贝核酶基因的载体。转染前测定自切割核酶的体外活性并将之转移至哺乳动物表达载体上 ,脂质体法转染含核酶基因的表达载体 ,转染细胞在含 40 0mg/LG418的培养介质中筛选。转基因细胞对猴免疫缺陷病毒的抗性通过免疫荧光测定来估测。结果　 37℃孵育 15min后 85 %的十体核酶自切割成单体核酶。在初始 2 5min的反式切割反应中尽管10体核酶摩尔数不足单体核酶十分之一 ,但十体核酶平均超过单体核酶 13 31%的切割产物。Northern点杂交证明单体核酶基因和十体核酶基因已经转入细胞并在细胞中获得表达。SIV攻毒试验表明 ,SIV接种 6d后转染单体核酶基因的细胞生长正常 ,不出现融合细胞 ,绝大多数转染十体基因的细胞生长良好 ,只发现极少数的融合细胞 ;转染单体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率达到10 0 % ,转染十体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率为 91 2 % ,转空表达载体细胞为 48%。结论　转自切割核酶基因的细胞对SIV的感染和致病均表现较强的抗性 ,但单体核酶比

关键词：免疫缺陷病毒感染自切割核酶介导转基因淋巴细胞基因治疗

高抗马铃薯纺锤形块茎类病毒的转基因马铃薯细胞内核酶转录产物的分布

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科学通报 1998年第17期43卷 1851-1855页

作者：刘灿辉杨希才王小凤田波中国科学院微生物研究所北京100080

以对马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)有高度抗性的表达核酶的转基因马铃薯为材料 ,研究了核酶转录产物在植株根细胞中的亚细胞分布 .首先通过往返式凝胶电泳和North ern杂交选择出表达核酶并对PSTVd高抗的 ,即检测不出PSTVd存在的马铃薯... 详细信息

以对马铃薯纺锤形块茎类病毒 (PSTVd)有高度抗性的表达核酶的转基因马铃薯为材料 ,研究了核酶转录产物在植株根细胞中的亚细胞分布 .首先通过往返式凝胶电泳和North ern杂交选择出表达核酶并对PSTVd高抗的 ,即检测不出PSTVd存在的马铃薯系 .用其根细胞进行原位杂交 ,结果表明核酶转录产物主要分布在转基因马铃薯细胞的细胞核中 .这一结果支持我们提出的核酶对在核内复制的类病毒更为有效的假说 .

关键词：转基因马铃薯 PSTVd 原位杂交核酶亚细胞分布

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类立克次体是中国杏树小叶病的病原

微生物学报 1993年第1期33卷 54-57页

作者：史春霖谢家仪杨希才刘学文中国科学院微生物研究所北京100080 北京市林业保护站北京100029

本文描述了到目前为止仅在我国发现的一种杏树新病害——小叶病。用电镜检查天然感病杏树叶片中脉的超薄切片,发现韧皮细胞中存在类立克次体(RLO)。RLO 为卵圆形或棒状,直径约0.2—0.5μm,长约1.0—2.5μm。它们被双膜(波纹状的细胞壁... 详细信息

本文描述了到目前为止仅在我国发现的一种杏树新病害——小叶病。用电镜检查天然感病杏树叶片中脉的超薄切片,发现韧皮细胞中存在类立克次体(RLO)。RLO 为卵圆形或棒状,直径约0.2—0.5μm,长约1.0—2.5μm。它们被双膜(波纹状的细胞壁和光滑的细胞质膜)环围着。在横切片中,这些微生物为卵圆形,内部结构由核糖体和带有 DNA 样细丝的核区组成。在纵切片中,微生物呈棒状。在健株组织中未发现这种微生物。青霉素处理染病杏树后,病状完全消失,说明利用电镜看到的类立克次体是杏树小叶病的病原物。

关键词：类立克次体杏树小叶病

玉米粗缩病毒基因组第七组份的cDNA克隆及序列分析

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微生物学报 2000年第5期40卷 488-494页

作者：邓文生杨希才张玉满刘玉乐康良仪中国科学院微生物研究所分子病毒学与生物工程开放实验室北京100080

从采自中国河北滦城感病的玉米材料中提取玉米粗缩病毒 (MRDV)的双链RNA。根据已知MRDV的部分序列设计引物 ,反转录、PCR扩增 ,克隆并测序分析了MRDV的第七片段 (S7)cDNA序列。结果表明 ,S7cDNA序列全长为 1 936bp ,与国外所测的MRDVS7... 详细信息

从采自中国河北滦城感病的玉米材料中提取玉米粗缩病毒 (MRDV)的双链RNA。根据已知MRDV的部分序列设计引物 ,反转录、PCR扩增 ,克隆并测序分析了MRDV的第七片段 (S7)cDNA序列。结果表明 ,S7cDNA序列全长为 1 936bp ,与国外所测的MRDVS7的序列长度相等 ,而且S7包含的两个阅读框 (ORF1和ORF2 )位置无变化。它们的核苷酸和最大开放阅读框 (ORF1 )同源性分别为 87 7%和 91 6% ,然而 ,MRDVS7的片段与水稻黑条矮缩病毒 (RBSDV)S8片段的核苷酸和最大开放阅读框 (ORF1 )有更高的同源性 ,分别为 95 5%和93 5%。

关键词：玉米粗缩病毒 S7 基因克隆序列同源性

特异切割苹果锈果类病毒的核酶基因的克隆和转录物的体外活性测定

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生物工程学报 2002年第1期18卷 25-29页

作者：周丽孙洁霖杨希才中国科学院微生物研究所北京100080

根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成和克隆了特异切割苹果锈果类病毒ASSVd正链 (194- 196位点 )或负链 (89- 91位点 )RNA的 2个短臂锤头型核酶基因 :42nt的RzASSVd(+)和 40nt的RzASSVd(- )。经转录获得核酶转录物和3 2 P标记的ASSVd... 详细信息

根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成和克隆了特异切割苹果锈果类病毒ASSVd正链 (194- 196位点 )或负链 (89- 91位点 )RNA的 2个短臂锤头型核酶基因 :42nt的RzASSVd(+)和 40nt的RzASSVd(- )。经转录获得核酶转录物和3 2 P标记的ASSVd正、负链转录物。将核酶与ASSVd混合 ,5 0℃或 37℃保温 3～ 4h ,进行 8%PAGE(含8mol L尿素 )和放射自显影分析。体外切割检测表明 :2个核酶均具有特异切割活性 ,其中RzASSVd(- )对ASSVd负链的切割活性较高 ,对ASSVd正链不起作用。RzASSVd(+)对ASSVd正链的切割活性较弱 ,对ASSVd负链亦不起作用。在此基础上 ,构建得到双价核酶基因pGEMRzASSVd(± )。

关键词：特异切割苹果锈果类病毒核酶基因转录物体外活性测定锤头型核酶基因克隆

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快速制备RNA小分子质量标记的新方法

生物化学与生物物理进展 2000年第3期27卷 309-311页

作者：邓文生杨希才康良仪张奉学符林春 *** 中国科学院微生物研究所北京100080 广州中医药大学热带医学研究所广州510407

在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过... 详细信息

在锤头型核酶下游增加一段核酶作用的靶序列 ,使之成为自切割的核酶 .将自切割核酶基因合成 ,扩增并克隆在质粒pBluescriptSK上 ,经连续 4次克隆获得含 10个拷贝的自切割核酶基因的载体 .5%聚丙烯酰胺变性凝胶电泳结果显示 :体外转录过程中多体酶发生了自切割 ,核酶转录物切割成从 70nt到 70 6nt的RNA等梯度带 ,因此。

关键词：锤头型核酶自切割 RNA分子质量标记制备

酵母pac-1基因的克隆、序列分析和在大肠杆菌中的高效表达及活性测定

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生物工程学报 2001年第2期17卷 203-206页

作者：步威孙洁霖杨希才中国科学院微生物研究所北京100080

The Schizosaccharmyces pombe pac\|1 gene product is a kind of dsRNA dependent ribonuclease,which has potential to degrade the dsRNA viral genome, the replication form of ssRNA viral genome and viroid ***,to introduce the pac\|1 gene into plants conferring them resistance to viruses is a new method of establishing the anti\|virus transgenic *** pac\|1 gene from the *** genome DNA isolated from China was cloned by means of PCR *** pac\|1 gene was inserted into the cloning vector pGEM\|7Zf(+) by using restriction endonuclease Kpn Ⅰ/Bam *** analysis shows that it is a complete gene with 1095 *** to the reported pac\|1 gene,its homology is significant,but with 5 nucleotides differences,leading to only one amino acid difference. Pac\|1 gene was inserted into the prodaryotic expression vector pET\|21(a) by using the restriction endonuclase Nde Ⅰ/Bam *** was induced by the IPTG in *** BL21 harbouring the recombinant vector pET\| pac\|1 .The pac\|1 gene product is analyzed by the SDS\|*** result shows the product of pac\|1 gene exists in the supernatant part as soluble form and in the precipitant part as inclusion bodies after the cells were lysed by ultrasonic *** supernatant was applied to detect the enzyme activity of pac\|1 gene *** conclued that pac\|1 gene has the biological activity of degrading the CMV\|dsRNA.

关键词：粟酒裂殖酵母pac-1基因 dsRNA 核糖核酸酶原核表达 CMV-dsRNA 大肠杆菌