特异切割苹果锈果类病毒的核酶基因的克隆和转录物的体外活性测定

作     者：周丽 孙洁霖 杨希才 ZHOU Li\ SUN Jie-Lin\ YANG Xi-Cai  (Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100080, China)

作者机构：中国科学院微生物研究所北京100080 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2002年第18卷第1期

页      面：25-29页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目资助 (No .39870 46 5 )~~ 

主　　题：特异切割 苹果锈果类病毒 核酶基因 转录物 体外活性测定 锤头型核酶 基因克隆 

摘      要：根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成和克隆了特异切割苹果锈果类病毒ASSVd正链 (194- 196位点 )或负链 (89- 91位点 )RNA的 2个短臂锤头型核酶基因 :42nt的RzASSVd(+)和 40nt的RzASSVd(- )。经转录获得核酶转录物和3 2 P标记的ASSVd正、负链转录物。将核酶与ASSVd混合 ,5 0℃或 37℃保温 3～ 4h ,进行 8%PAGE(含8mol L尿素 )和放射自显影分析。体外切割检测表明 :2个核酶均具有特异切割活性 ,其中RzASSVd(- )对ASSVd负链的切割活性较高 ,对ASSVd正链不起作用。RzASSVd(+)对ASSVd正链的切割活性较弱 ,对ASSVd负链亦不起作用。在此基础上 ,构建得到双价核酶基因pGEMRzASSVd(± )。