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生姜蛋白酶分离纯化及品种间差异性比较

生姜蛋白酶分离纯化及品种间差异性比较

作者：杜新永山东农业大学

学位级别：硕士

生姜在我国栽培历史悠久,是重要的调味品和重要的中药。本实验以优质莱芜大姜为原料,研究了生姜蛋白酶的提取、纯化及活性检测技术,另外,以38种生姜为原料,测定不同品种生姜的蛋白酶、姜黄素、姜辣素的含量。(1)生姜蛋白酶活性测定方法... 详细信息

生姜在我国栽培历史悠久,是重要的调味品和重要的中药。本实验以优质莱芜大姜为原料,研究了生姜蛋白酶的提取、纯化及活性检测技术,另外,以38种生姜为原料,测定不同品种生姜的蛋白酶、姜黄素、姜辣素的含量。(1)生姜蛋白酶活性测定方法最佳酶促反应温度为40℃,反应时间为5min,以酪氨酸为标准对照品计算酶活力值。通过比较紫外分光光度法(Abs 280nm法)和Lowery法两种酶活测定方法,证明紫外分光光度法(Abs 280nm法)具有操作简便、稳定性高、灵敏度好等优点,以此方法测得生姜蛋白酶在最适反应条件时的米氏常数为46.18μg/mL。(2)生姜蛋白酶提取方法通过正交试验及方差分析,姜汁浸提法方案为:缓冲液pH 7.5、离子强度0.03mol/L、料液比1:2、无水乙醇用量1:2.5,按此方案进行生姜蛋白酶的提取,得到的粗酶活力值843.7U,粗酶得率为1.40%。乙醇粉法提取生姜蛋白酶最佳提取工艺条件为:缓冲液pH6.5、离子强度0.10mol/L、打浆用无水乙醇料液比1:3。按此方案进行生姜蛋白酶的提取,测得酶活力值601.5U,粗酶得率为1.39%。(3)柱层析法纯化生姜蛋白酶使用Sephadex G-50 Medium为填料纯化生姜蛋白酶时,最佳层析柱为16×500mm,洗脱条件是:柱床体积(CBV)为100mL,洗脱速度1.5mL/min,洗脱缓冲液为磷酸缓冲液(pH 7.5 0.03mol/L),上样量为3mL(蛋白质含量42.7μg/mL)时。以此洗脱条件进行尺寸排阻层析(SEC)纯化,可以得到两个明显的洗脱峰,其中峰Ⅰ有酶活性。以姜汁酶活力为基准,粗酶的比活力为其1.98倍,而经过SEC纯化后,以比活力为考察指标纯化倍数达到4.19倍,是粗酶的2.11倍。使用Cellulose DE-52(洗脱速度0.5mL/min)与Sepharose DE-52 (Fast Flow)(洗脱速度1.0mL/min)两种填料进行离子交换层析(IEC)纯化,采用阶段洗脱法(总用量50mL,初始缓冲液与极限缓冲液变化梯度为5mL,共10个梯度)均可以得到6个较明显的蛋白峰,其中,以CelluloseDE-52为填料时,峰Ⅲ和峰Ⅳ有酶活;而用Sepharose DE-52 Fast Flow为填料时,峰Ⅱ和峰Ⅲ有酶活。离子交换层析结果与生姜蛋白酶的等电点有关,即生姜蛋白粗酶经过IEC纯化后,得到了两个等电点不同的组分,且都是酸性蛋白质。(4)生姜蛋白酶活力保护在缓冲液中添加半胱氨酸能有效地保护生姜蛋白酶活力,在室温(25℃)时,以0.015mol/L的半胱氨酸保持酶活力效果最好,保存180min的酶样品活力值为保存15min时的85%。在低温(4℃)时,0.020mol/L的半胱氨酸酶活力保持效果最好,保存第8天时活力值为第1天时的87%。(5) 38种生姜资源调查不同品种生姜的蛋白酶、姜黄素、姜辣素的含量均有较大的差异,以生姜蛋白酶比活力为考察目标,辽宁丹东姜、江西黄老门姜、山东莱芜大姜等均适合于提取生姜蛋白酶。

关键词：生姜蛋白酶酶活检测柱层析尺寸排阻层析离子交换层析品种差异

Sephadex G-50纯化生姜蛋白酶的研究

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食品工业科技 2010年第3期31卷 303-305页

作者：杜新永唐晓珍山东农业大学食品科学与工程学院山东泰安271018 山东省青州市农业局山东青州262500

采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方... 详细信息

采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方案为:柱床高度50cm,上样量3mL粗酶,流速45cm/h,洗脱液总用量150mL。纯化后的生姜蛋白酶比活性是姜汁的4.192倍,粗酶的2.113倍,而且还去除了色素、不溶物等杂质,纯化效果极佳。

关键词：生姜蛋白酶 Sephadex G^50(葡聚糖凝胶) 尺寸排阻层析(SEC) 纯化

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双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

食品与发酵工业 2011年第1期37卷 184-188页

作者：谢芳唐晓珍马明杜新永卢会忠山东农业大学食品科学与工程学院山东省莱芜市莱城区农业局山东莱芜271100

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体... 详细信息

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。

关键词：双水相萃取生姜蛋白酶酶活力分配系数

驻马店市大型接待活动期间的食品安全保障工作

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海峡预防医学杂志 2012年第2期18卷 61-62页

作者：杜新永驻马店市卫生监督所河南463000

驻马店市近年政治、经济、旅游活动逐渐增多,大型活动的接待工作日益繁重。为了在活动期间防止食物中毒和食源性疾病的发生,采取了一系列措施。为了给今后其他城市开展大型接待活动的食品安全保障工作提供借鉴,笔者根据2008-2010年驻马... 详细信息

驻马店市近年政治、经济、旅游活动逐渐增多,大型活动的接待工作日益繁重。为了在活动期间防止食物中毒和食源性疾病的发生,采取了一系列措施。为了给今后其他城市开展大型接待活动的食品安全保障工作提供借鉴,笔者根据2008-2010年驻马店市成功开展的各种大型活动食品安全监督检测资料,对驻马店市大型活动的食品安全保障措施进行了总结分析。

关键词：食品安全卫生监督大型接待活动驻马店

驻马店市农村学校食堂食品安全监督量化分级管理实践

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安徽预防医学杂志 2013年第4期19卷 311-312页

作者：杜新永驻马店市食品安全监督管理支队河南驻马店463000

驻马店市从2006年在农村学校食堂开展量化分级管理工作以来，积累了一些经验。笔者就近3年来驻马店市农村学校食堂实施该工作过程中存在的经验和教训进行了深刻的剖析，希望藉此为今后开展农村学校食堂量化分级管理提供一定的借鉴。

关键词：农村学校量化分级监测管理

驻马店市卫生监督人员食品安全预警知识掌握情况调查

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职业与健康 2009年第23期25卷 2624-2625页

作者：杜新永河南省驻马店市卫生监督所 463000

2009年2月28日,十一届全国人大常委会通过的(以下简称食品安全法)对食品安全预警做了专门规定.第11条规定:国家建立食品安全风险监测制度,对食源性疾病、食品污染以及食品中的有害因素进行监测;第13条规定:国家建立食品安全风险评估制度... 详细信息

2009年2月28日,十一届全国人大常委会通过的(以下简称食品安全法)对食品安全预警做了专门规定.第11条规定:国家建立食品安全风险监测制度,对食源性疾病、食品污染以及食品中的有害因素进行监测;第13条规定:国家建立食品安全风险评估制度,对食品、食品添加剂中生物性、化学性和物理性危害进行风险评估.

关键词：卫生监督人员食品安全预警知识

2008～2010年驻马店市区糕点面包类食品卫生状况调查分析

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安徽预防医学杂志 2011年第6期17卷 454-455页

作者：杜新永驻马店市卫生监督所河南驻马店463000

为了解驻马店市区糕点、面包类食品的卫生状况,笔者对2008～2010年部分糕点面包类食品生产、销售单位样品的检测结果进行了整理与分析。1材料与方法按照单位从业人员数量对生产经营单位进行了划分,从业人员在100人以上的为大型生产经营... 详细信息

为了解驻马店市区糕点、面包类食品的卫生状况,笔者对2008～2010年部分糕点面包类食品生产、销售单位样品的检测结果进行了整理与分析。1材料与方法按照单位从业人员数量对生产经营单位进行了划分,从业人员在100人以上的为大型生产经营单位,10～100人的为中型生产经营单位,10人以下的为小型生产经营单位。采样情况为：

关键词：糕点面包食品卫生监测

驻马店市驿城区创建餐饮服务食品安全示范区措施与成效

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河南预防医学杂志 2013年第5期24卷 432-433页

作者：杜新永驻马店市食品药品监督管理局河南驻马店463000

2010年6月25日,国家食品药品监督管理局、商务部联合下发了《关于印发餐饮服务食品安全百千万示范工程建设指导意见的通知》。笔者所在的驻马店市驿城区高度重视餐饮服务食品安全区创建工作,通过努力,于2012年11月顺利通过了"河南省餐... 详细信息

2010年6月25日,国家食品药品监督管理局、商务部联合下发了《关于印发餐饮服务食品安全百千万示范工程建设指导意见的通知》。笔者所在的驻马店市驿城区高度重视餐饮服务食品安全区创建工作,通过努力,于2012年11月顺利通过了"河南省餐饮服务食品安全示范区"验收。笔者作为全程参与创建工作的一员,为了给今后其他城市开展创建工作提供借鉴,将驻马店市驿城区在餐饮服务食品安全示范区建设中的工作措施及成效进行了总结分析。

关键词：餐饮服务食品安全示范区措施与成效

培养基pH调控法高密度发酵唾液乳杆菌XH4B研究

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现代食品科技 2014年第5期30卷 196-201,110页

作者：杜新永高世阳刘同杰林永华何国庆浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江省食品微生物技术重点实验室浙江杭州310058

本研究以MRS培养基为基础,通过优化碳、氮源及无机盐的配方和用量,再结合补料发酵,最终实现唾液乳杆菌XH4B高密度培养的目的。以乳酸菌的生物量为指标,同时考查发酵液pH值、乳酸含量等,最终确定酵母粉和蔗糖为最佳氮、碳源,同时增加乙... 详细信息

本研究以MRS培养基为基础,通过优化碳、氮源及无机盐的配方和用量,再结合补料发酵,最终实现唾液乳杆菌XH4B高密度培养的目的。以乳酸菌的生物量为指标,同时考查发酵液pH值、乳酸含量等,最终确定酵母粉和蔗糖为最佳氮、碳源,同时增加乙酸钠用量至2%、磷酸二氢钠0.6%,可以对发酵液酸化时提供一定的缓冲作用。采用优化的PY-Suc培养基,唾液乳杆菌XH4B的生物量最高能达到6.91 g/L,明显高于MRS培养基的5.01～6.30 g/L（P〈0.05）。等量补料培养并且采用NaOH中和发酵液pH值时,乳酸最高积累速度可以达到5.958 g/（L·h）,但是随着培养时间延长,积累速度迅速下降。发酵酸化较严重时（乳酸含量9～10 g/L）,唾液乳杆菌XH4B的生物量积累变缓。结论：优化MRS培养基,并加大乙酸钠、磷酸二氢钠等能够缓冲发酵液的无机盐用量,结合补料发酵,可以实现唾液乳杆菌XH4B的高密度培养。

关键词：唾液乳杆菌 α-半乳糖苷酶高密度培养乳酸含量补料发酵