检索结果-南通市图书馆

作者：杜国俊陕西师范大学

学位级别：硕士

蛇毒磷脂酶A2 (Snake venom phospholipase A2,svPLA2)是蛇毒中毒性最强的组分,除具有酶活性外,还可能具有多种毒理学活性,具有潜在的利用价值。同一种毒蛇的蛇毒中可能存在多种PLA2,虽然它们的氨基酸序列和空间结构相似,一级结构差异不... 详细信息

蛇毒磷脂酶A2 (Snake venom phospholipase A2,svPLA2)是蛇毒中毒性最强的组分,除具有酶活性外,还可能具有多种毒理学活性,具有潜在的利用价值。同一种毒蛇的蛇毒中可能存在多种PLA2,虽然它们的氨基酸序列和空间结构相似,一级结构差异不大,但功能上却差异明显,因此是研究蛋白质结构和功能的极好模型,也是蛇毒研究领域的一个热点。中介蝮(Gloydius intermedius)为蝰科蝮亚科(Crotalinae)毒蛇,广泛分布于我国西北、华北地区,是我国6种蝮蛇中毒性最强的一种,其PLA2的结构及作用的分子机制有待阐明,而分离获得PLA2是解决这些问题的前提。本研究的内容及结果： 1.中介蝮蛇毒PLA2的分离纯化 (1)以中介蝮粗毒为原料,用Sephacryl-200HR凝胶过滤层析柱进行初步分离,用50mmol/L醋酸铵缓冲液洗脱,分离得到8个蛋白峰(Peak1-8)。以获得的峰组分1mL腹腔注射昆明小鼠,观察急性毒性效应,并采用SDS-PAGE分析组分的蛋白纯度。结果表明,Peak1和Peak8蛋白含量甚微,无致死活性。Peak2、Peak6和Peak7虽然有小鼠致死活性,但是没有引起偏瘫和呼吸衰竭,而且有出血,推测可能为出血毒素。Peak3、Peak4、Peak5有致死活性,且能引起偏瘫及呼吸衰竭,可能为神经毒素。SDS-PAGE分析发现这3个组分都非单一条带,因此需要进一步分离。 (2)用HiTrap Q阴离子交换层析对具有神经毒性的Peak3、4、5进一步的分离纯化,上样后以A液(50 mmol/L醋酸铵缓冲液,pH7.8)洗脱未结合的组分,之后从A液到100%B液(50mmol/L醋酸铵缓冲液,0.5mol/L NaCl pH7.8)进行线性梯度洗脱。收集各洗脱峰及穿透峰,然后取各组分1mL腹腔注射昆明小鼠,根据急性毒性结果判定神经毒素活性,用SDS-PAGE分析组分纯度。结果表明,Peak3-1、Peak4-1和Peak5-2有致死活性,且局部有出血,其可能为出血毒素。Peak3-2、Peak4-2、Peak5-1均有致死活性,且可导致偏瘫及呼吸衰竭,为神经毒素,由于SDS-PAGE分析发现不是单一条带。 (3)最后,利用HiTrap SP|阳离子交换柱对有PLA2神经毒活性的3个峰组分(Peak 3-2、Peak 4-2、Peak1 5-1)进行了分离,上样后以A液(50 mmol/L醋酸铵缓冲液,pH5.5)为起始洗脱液,之后从A液到100% B液(50 mmol/L醋酸铵缓冲液,0.5mol/L NaCl pH5.5)进行线性梯度洗脱,收集各洗脱峰。腹腔注射昆明小鼠,观察急性毒性效应,同步用SDS-PAGE分析组分纯度,卵磷脂琼脂平板法检测致死毒性组分的PLA2活性。结果表明,Peak3-2-2、Peak4-2-1、Peak4-2-2和Peak5-1-2无致死活性,Peak3-2-1和Peak5-1-1均有致死活性,Peak3-2-1分子量在14kDa左右,纯度接近单一条带,Peak5-1-1仍有三个条带,不纯。Peak3-2-1、Peak5-1-1都具有磷脂酶A2活性,其中Peak3-2-1的PLA2活性最高。 2.生物活性初步检测： (1)酶活性检测：以中介蝮蛇粗毒做阳性对照,卵磷脂琼脂平板法检测了Peak3-2-1组分的PLA2酶活性,结果显示Peak3-2-1比粗毒的透明圈大。 (2)抑菌活性检测：以大肠杆菌为对象,粗毒为阳性对照,PBS为阴性对照,检测Peak3-2-1组分的24h抑菌效应,粗毒组出现的抑菌圈明显,而Peak3-2-1组分的抑菌活性不高。 (3)溶血活性检测：以粗毒为阳性对照,红细胞血红蛋白释放法测定毒素的溶血活性,发现Peak3-2-1组分可以引起溶血,但活性比粗毒低。 (4)以SD大鼠的膈神经-肌肉接头标本为模型,电生理学方法检测了Peak3-2-1的突触阻断效应,发现Peak3-2-1 20min后就可以抑制间接刺激诱发的膈肌收缩,60 min后膈肌收缩下降到只有正常幅度的10%左右。而且Peak3-2-1对间接刺激诱发的大鼠膈肌收缩有抑制作用,但不影响直接刺激膈肌引起的肌肉收缩,说明它抑制的是神经-肌肉接头的传递,而对肌肉组织本身无明显影响,其作用部位在突触间隙,因此属于神经毒素。结论：采用凝胶过滤层析和离子交换层析技术,从中介蝮蛇粗毒中筛选分离得到了一种具有神经毒性的PLA2,其分子量大约为14 kDa,该PLA2具有溶血活性、无抑菌活性。本工作为下一步研究中介蝮PLA2的分子进化及作用机理奠定了基础。

关键词：中介蝮蛇毒磷脂酶A2 分离纯化生物活性

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翼状胬肉切除术后佩戴软性亲水接触镜的针对性围术期护理

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实用防盲技术 2023年第1期18卷 45-46页

作者：李玲杜国俊建湖建阳眼科医院江苏盐城224700

目的探讨翼状胬肉切除术后佩戴软性亲水接触镜的围术期的护理方法。方法回顾性分析2019年1月-2019年10月共80例(108眼)翼状胬肉切除术后佩戴软性亲水接触镜的围术期的护理要点和经验。结果通过对80例翼状胬肉手术患者施行针对性的围... 详细信息

目的探讨翼状胬肉切除术后佩戴软性亲水接触镜的围术期的护理方法。方法回顾性分析2019年1月-2019年10月共80例(108眼)翼状胬肉切除术后佩戴软性亲水接触镜的围术期的护理要点和经验。结果通过对80例翼状胬肉手术患者施行针对性的围术期护理有助于维护患者的心理健康,保护角膜,明显减轻眼部疼痛等诸多不适症状,提高了患者术后舒适度,提高了患者的满意度。结论加强翼状胬肉切除术后佩戴软性亲水接触镜的针对性围术期护理,可以尽早促使角膜上皮修复、有效减轻患者疼痛等不适,增加患者的自信心和满意度。

关键词：翼状胬肉切除软性亲水接触镜围术期护理

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蛇毒蛋白原核表达包涵体复性研究进展

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中国生物工程杂志 2011年第3期31卷 113-119页

作者：刘晓飞裴剑竹杜国俊杨章民陕西师范大学生命科学学院西安710062

外源基因在大肠杆菌中表达后常形成不溶性的无活性包涵体。包涵体的形成已经成为研究和应用活性蛋白质生产的主要障碍。然而,在合适的条件下,包涵体经过溶解、纯化、复性过程后可在体外重新折叠成有活性的蛋白质。迄今,已对蝰科、眼镜蛇... 详细信息

外源基因在大肠杆菌中表达后常形成不溶性的无活性包涵体。包涵体的形成已经成为研究和应用活性蛋白质生产的主要障碍。然而,在合适的条件下,包涵体经过溶解、纯化、复性过程后可在体外重新折叠成有活性的蛋白质。迄今,已对蝰科、眼镜蛇科11种毒蛇的18个基因(包括金属蛋白酶、PLA2、β-银环蛇毒素、心脏素素、丝氨酸蛋白酶、神经生长因子、C-型凝集素等)成功进行了原核表达,采用稀释复性、透析复性和层析复性三种方法成功进行了包涵体复性。着重就蛇毒蛋白原核表达后包涵体复性所用的方法予以综述。

关键词：蛇毒蛋白包涵体复性方法

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蛇毒素蛋白毕赤酵母表达进展

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中国生物工程杂志 2010年第10期30卷 86-93页

作者：杜国俊刘晓飞王红军杨章民陕西师范大学生命科学学院西安710062 哈佛大学医学院Dana-Farber癌症研究所波士顿02115

蛇毒是许多具有独特生物活性的蛋白质与酶的混合物,在基础科学研究和临床上有重大应用价值,但是通过从蛇毒中分离获取活性组分具有局限性。巴斯德毕赤酵母表达系统是最为常用的真核表达系统之一,其真核加工、折叠、翻译后修饰等能力使... 详细信息

蛇毒是许多具有独特生物活性的蛋白质与酶的混合物,在基础科学研究和临床上有重大应用价值,但是通过从蛇毒中分离获取活性组分具有局限性。巴斯德毕赤酵母表达系统是最为常用的真核表达系统之一,其真核加工、折叠、翻译后修饰等能力使得所表达的重组蛋白具有与天然蛋白近似的生物活性,因而该系统在富含二硫键或糖基化的蛇毒素蛋白表达中被广为采用。迄今为止,已经有12个属的25种蛇毒素蛋白(包括蛇毒丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶/去整合素、L-氨基酸氧化酶、C-型凝集素和神经毒素、血管收缩因子、神经生长因子等家族)在毕赤酵母中获得成功表达,蛇毒富半胱氨酸蛋白、缓激肽增强肽(BPP)等至今尚未见酵母表达的报道。毕赤酵母表达蛇毒素蛋白失败的原因可能在于,有关密码子偏爱性、目的基因转录出的RNA二级结构特征、糖基化程度不均一及糖型差异、所表达毒素对酵母细胞的毒性等方面,并对解决的方法进行了讨论。

关键词：蛇毒蛋白家族毕赤酵母表达

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也说“立此为照者”

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中国语文 2024年第5期 596-604,640页

作者：任国俊北京语言大学语言科学院北京

黑维强、杨青青(2023)指出元代契约文书“立此为照者”之类的固定格式受蒙古语影响,“者”由表示祈使语气类推扩展出表达陈述语气的用法。“者”的来源及用法尚有待进一步探讨。本文认为“者”来源于蒙古语陈述句末指代强调助词je,文献... 详细信息

黑维强、杨青青(2023)指出元代契约文书“立此为照者”之类的固定格式受蒙古语影响,“者”由表示祈使语气类推扩展出表达陈述语气的用法。“者”的来源及用法尚有待进一步探讨。本文认为“者”来源于蒙古语陈述句末指代强调助词je,文献中音译为“者”,意译作“那般者”。

关键词：元代契约文书 “者” 蒙古语指代强调助词je 语言接触

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中国特色解决民族问题正确道路的内涵、特点、本质和优势

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广西民族研究 2024年第3期 1-8页

作者：哈正利莫国俊中南民族大学

中国特色解决民族问题的正确道路是中国共产党站在中华民族伟大复兴的战略高度，坚持马克思主义与近代以来中国革命、建设、改革开放不同阶段的历史任务和现实实际相结合，开辟出来的用社会主义建设解决民族问题的中国之路。为了彰显中... 详细信息

中国特色解决民族问题的正确道路是中国共产党站在中华民族伟大复兴的战略高度，坚持马克思主义与近代以来中国革命、建设、改革开放不同阶段的历史任务和现实实际相结合，开辟出来的用社会主义建设解决民族问题的中国之路。为了彰显中国特色解决民族问题的正确道路具有的明显优越性，文章依照党史文献，结合习近平相关论述梳理了理论表述脉络，一是聚焦中国特色民族工作格局，凝练揭示了正确道路的六大科学内涵；二是在特点上，阐明基于实践底色的马克思主义中国化理论特质，基于历史格局的中华文明包容性特质，基于特色国家结构、政治哲学、实践与体系上的模式特质；三是在本质上，阐释了党在实践与理论相互转化后取得的原创性重大成果与自信之由；四是在优势上，遵循论从史出，史论结合，从“国家与社会”“党与政”的两对关系，显现出中国特色解决民族问题的正确道路缘何优越。

关键词：中国特色解决民族问题的正确道路内涵特点本质优势

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基于改进二维经验模态分解方法的超精密加工振动溯源与抑制研究

基于改进二维经验模态分解方法的超精密加工振动溯源与抑制研究

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作者：杜国才西南科技大学

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用于SoC时钟芯片的环形压控振荡器设计与实现

用于SoC时钟芯片的环形压控振荡器设计与实现

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作者：廖国俊电子科技大学

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低温下阻遏蛋白MogR对单增李斯特菌鞭毛形成的影响

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微生物学报 2024年第5期64卷 1506-1520页

作者：汪国俊邓霞栗绍文刘梅华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

【目的】单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)(Listeria monocytogenes,Lm)是食源性病原菌,可以引发李斯特菌病(listeriosis)。Lm能在低温下生长,对冷藏食品的安全构成严重威胁,并对人类健康造成潜在的危害。Lm能低温生长与抑制鞭... 详细信息

【目的】单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)(Listeria monocytogenes,Lm)是食源性病原菌,可以引发李斯特菌病(listeriosis)。Lm能在低温下生长,对冷藏食品的安全构成严重威胁,并对人类健康造成潜在的危害。Lm能低温生长与抑制鞭毛基因表达以减少鞭毛的合成有关。MogR是Lm鞭毛基因转录的阻遏蛋白,在机体里或37℃环境下具有阻遏作用,Lm不产生鞭毛;然而,当Lm处于20-30℃时MogR无阻遏作用,Lm产生鞭毛。我们研究发现在4℃生长条件下Lm鞭毛合成减少,但具体的分子机制尚未明确。本文探究在4℃下Lm鞭毛合成少与MogR起阻遏作用的关系。【方法】以Lm ATCC 19115为亲本株,分别构建了MogR和鞭毛丝蛋白FlaA的缺失株ΔmogR和ΔflaA(作为无鞭毛对照株)及其回补株cΔmogR和cΔflaA,测定了菌株在4、28、37℃时的运动性、鞭毛产生情况和鞭毛基因表达量,并对所构建的菌株进行了4、28、37℃时生长曲线的测定。【结果】在4℃时,mogR缺失后,菌株运动性显著强于亲本株(P<0.01),鞭毛合成量显著多于亲本株(P<0.001),鞭毛基因转录水平显著高于亲本株(P<0.001);缺失株ΔmogR的生长能力显著弱于亲本株(P<0.05)。回补株cΔmogR的运动能力、鞭毛合成量和鞭毛基因转录水平与亲本株相比,无显著性差异。【结论】在4℃时,Lm鞭毛产量少与MogR对鞭毛基因起转录抑制作用有关,低温条件下Lm能生长繁殖与MogR对鞭毛基因表达的抑制作用有关。本研究结果为揭示Lm低温生长机制提供了新的信息。

关键词：单增李斯特菌 MogR 鞭毛低温生长

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固体氧化物燃料电池氧化锆基电解质薄膜制备技术研究进展

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硅酸盐学报 2024年第5期52卷 1722-1738页

作者：徐而翔李晓艳陈宋璇杜国山付云枫清华大学材料学院北京100084 中国恩菲工程技术有限公司北京100038

固体氧化物燃料电池(SOFC)具有高能量转化效率、环境友好性等特征,是全球能源环境问题的重要解决方案。电解质作为SOFC的关键组件,决定了电池的工作温度与输出性能。首先,以典型的氧化锆基电解质材料为例,介绍了其导电机理和导电性能的... 详细信息

固体氧化物燃料电池(SOFC)具有高能量转化效率、环境友好性等特征,是全球能源环境问题的重要解决方案。电解质作为SOFC的关键组件,决定了电池的工作温度与输出性能。首先,以典型的氧化锆基电解质材料为例,介绍了其导电机理和导电性能的影响因素。为促进SOFC的商业化,电解质材料需在较低的工作温度下有较低的欧姆阻抗,电解质薄膜化是降低电池工作温度的有效方法。而后,从固相粉体成型、液相成型、气相成型3个方面综述了氧化锆基电解质薄膜的常见制备方法,并分析各种方法的优劣势。最后,对电解质薄膜的制备方法做简要展望。

关键词：固体氧化物燃料电池电解质氧化锆薄膜

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