检索结果-南通市图书馆

华南国防医学杂志 1994年第2期8卷 183-185页

作者：赖莉华杜京穗唐迎红梁卫萍张小京刘华芳欧阳文莺 177医院

语言是护士感情与内心世界的表露,是护土心灵美与仪表美的整体表现。她的一言一行和一举一动,对病人的情绪、精神状态、疾病的转归起着直接重要的作用。因此,注意加强语言修养,是每一个护士不可忽视的问题。本文就此问题浅谈几点体会:

关键词：语言修养仪表美问题浅谈心灵美品德修养精神需求文化素质护理人员最佳心理状态临床第一线

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

水稻OsMY1基因的克隆及功能的初步鉴定

水稻OsMY1基因的克隆及功能的初步鉴定

作者：杜京尧河南师范大学

学位级别：硕士

OsMY1（GenBank DQ641916）基因是本实验室前期通过酵母双杂交筛选,从水稻雌雄蕊形成期幼穗cDNA库中分离得到的功能未知基因。序列分析显示,该基因cDNA编码区的5’端不完整。本研究拟克隆该基因全长cDNA序列,并利用CRISPR/Cas9基因组编... 详细信息

OsMY1（GenBank DQ641916）基因是本实验室前期通过酵母双杂交筛选,从水稻雌雄蕊形成期幼穗cDNA库中分离得到的功能未知基因。序列分析显示,该基因cDNA编码区的5’端不完整。本研究拟克隆该基因全长cDNA序列,并利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,构建OsMY1基因敲除水稻,同时以实验室前期构建的OsMY1基因RNAi水稻T1代为材料开展研究,旨在明确该基因在水稻生长发育中的功能。为了获得OsMY1基因的5′端序列,采用5′-RACE结合RT-PCR技术,从水稻的幼穗组织中克隆该基因全长cDNA序列。首先通过5′-RACE获得其5’端序列,与原3′端序列拼接后,得到全长为1953bp的OsMY1基因cDNA序列,据此设计引物,通过RT-PCR扩增其cDNA序列。测序结果显示,OsMY1基因cDNA序列中包含一个1140bp的ORF,编码379个氨基酸。生物信息学分析显示,OsMY1蛋白中仅含有两个保守的CC结构域,属于水稻ICR蛋白,OsMY1与短花药野生稻的ICR序列具有90.7%的同源性。为了分析OsMY1基因在水稻中的表达模式,采用qRT-PCR技术,检测水稻不同发育阶段:幼苗期（根、叶）、分蘖期（根、叶）、幼穗分化期8个阶段中OsMY1基因的表达水平。发现OsMY1在幼苗期的叶比在根中的表达量高,在分蘖期的根中比在叶中表达量高,而抽穗期的幼穗中,OsMY1的表达水平明显比其他两个发育时期的表达水平高,其中在颖花长度3-5mm的幼穗中表达量最高。为了鉴定水稻OsMY1基因的功能,利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建基因敲除水稻。通过序列比对,筛选了两个编辑靶点,进而构建了CRISPR/Cas9植物表达载体。以日本晴水稻为材料,利用农杆菌介导法,对水稻愈伤组织进行遗传转化,并获得再生植株。经潮霉素抗性基因筛选及PCR靶位点分子测序检测,证实获得了2个纯合敲除水稻株系（Cas9-OsMY1）。对Cas9-OsMY1水稻T1代进行农艺学性状统计,结果表明,敲除水稻与对照相比,株高极显著降低,平均减小5.3%;穗长极显著增加,平均增加18.6%,但是在有效分蘖数、穗实粒数,结实率,千粒重等农艺学性状上均无明显差异。对实验室前期构建的OsMY1基因RNAi水稻（RNAi-OsMY1）进行T2和T3代的连续筛选和鉴定,获得6个OsMY1基因表达量下调的株系。对RNAi-OsMY1水稻表型观察发现,与对照相比,在幼苗期和生殖生长阶段,RNAi水稻株高均极显著降低。农艺性状统计表明,株高、穗长、结实率和千粒重均极显著降低,其中株高平均减小21.25%,穗长平均降低17.1%,结实率平均降低10.5%,千粒重平均降低13.24%。为了探究OsMY1基因RNAi水稻和敲除水稻株高降低的原因,利用qRT-PCR技术,检测了赤霉素（GA）合成途径以及信号传递途径8个相关基因在叶片中的表达,发现无论在RNAi水稻还是敲除水稻中,赤霉素合成基因（OsCPS、OsKO2、OsKAO）和信号正向调控传导基因（OsGID1、OsGID2）与对照相比表达量均下调,而负调控信号传导基因OsSLR1与对照相比表达量上调。本文基于实验室的前期工作基础,通过5′-RACE结合RT-PCR技术,克隆了OsMY1基因的全长cDNA序列,并通过序列比对分析,明确了该基因属于水稻ICR蛋白。分别采用RNAi和CRISPR/Cas9基因组编辑技术对该基因开展功能鉴定,证实该基因被敲除或者表达被抑制都导致水稻株高降低。为解析转基因水稻株高降低的分子机制,以GA信号通路为切入点,证明了株高降低的原因在于GA合成途径以及信号传递途径关键基因表达水平下调,为后续深入研究OsMY1基因在水稻株高性状控制中的功能奠定了基础,同时也为水稻矮化分子育种提供了新的潜在的候选基因。

关键词：水稻 OsMY1基因 CRISPR/Cas9 RNAi 株高赤霉素

水稻OsMPK15的cDNA克隆和转录水平分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通报 2018年第6期34卷 66-72页

作者：石佳杨丹丹葛慧雯杜京尧梁卫红河南师范大学生命科学学院新乡453007

MAPK基因参与水稻的生物与非生物胁迫应答及生长发育过程,通过克隆水稻OsMPK15并初步研究其表达特性,为后续功能研究奠定基础。采用RT-PCR技术从日本晴水稻的根组织中克隆OsMPK15的cDNA编码区,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析Os... 详细信息

MAPK基因参与水稻的生物与非生物胁迫应答及生长发育过程,通过克隆水稻OsMPK15并初步研究其表达特性,为后续功能研究奠定基础。采用RT-PCR技术从日本晴水稻的根组织中克隆OsMPK15的cDNA编码区,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析OsMPK15在不同组织中以及不同非生物胁迫下的表达特性。结果表明,从日本晴水稻根组织中克隆的OsMPK15的cDNA编码区序列与生物信息学预测的结果一致,OsMPK15的第13-304位为丝氨酸/苏氨酸激酶结构域,属于水稻MAPK家族E组。qRT-PCR结果表明,该基因在水稻幼穗期各组织表达存在差异,主要在叶和叶鞘中表达。干旱和盐胁迫均可诱导OsMPK15在水稻幼苗根中表达量的上调,但表达模式具有不同的规律。同时,OsMPK15对3种胁迫相关激素ABA、JA和SA处理均产生应答,其中以ABA诱导OsMPK15表达上调幅度最大。

关键词：水稻 OsMPK15 转录水平表达特性非生物胁迫植物激素

OsRhoGDI2过表达转基因水稻的筛选鉴定及外源基因拷贝数的初步分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

江苏农业科学 2019年第14期47卷 50-54页

作者：杜京尧尚飞王高华梁卫红河南师范大学生命科学学院

水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采... 详细信息

水稻RhoGDP解离抑制基因OsRhoGDI2是从幼穗中分离出的功能未知基因.为鉴定该基因的功能,笔者所在实验室前期构建了植物过表达载体pCAMBIA1302-OsRhoGDI2-GFP,并对水稻进行了遗传转化.对OsRhoGDI2过表达转基因水稻T2代进行筛选和鉴定,采用PCR技术鉴定转基因植株,采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测OsRhoGDI2在转基因水稻中的表达水平,结果显示,其中6个株系为过表达转基因植株,OsRhoGDI2表达水平上调1.69~13.35倍.为检测外源基因在转基因水稻中的拷贝数,分别以蔗糖磷酸合成酶基因SPS和潮霉素抗性基因HYG为内参基因和标记基因,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术结合内参基因和标记基因的标准曲线进行分析,结果显示在所检测的6个转基因株系中,外源基因的拷贝数均为1,提示已经获得稳定遗传的OsRhoGDI2过表达转基因水稻,为后续OsRhoGDI2基因的功能研究奠定基础.

关键词： OsRhoGDI2 转基因水稻表达分析拷贝数外源基因

利用HiTAIL-PCR技术鉴定T-DNA在RNAi-OsRhoGAP2水稻中的插入位点

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

江苏农业科学 2018年第9期46卷 55-59页

作者：葛慧雯李佳佳王高华闫鑫甜安文静杜京尧石佳彭静静王美娜梁卫红河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

水稻OsRhoGAP2基因是前期从幼穗cDNA文库中筛选获得的功能未知基因,采用DNA重组技术构建OsRhoGAP2基因RNA干扰载体,并转化水稻。对转基因水稻的表型分析显示,OsRhoGAP2基因RNA干扰水稻株高显著高于对照水稻。采用高效热不对称交错PCR法(... 详细信息

水稻OsRhoGAP2基因是前期从幼穗cDNA文库中筛选获得的功能未知基因,采用DNA重组技术构建OsRhoGAP2基因RNA干扰载体,并转化水稻。对转基因水稻的表型分析显示,OsRhoGAP2基因RNA干扰水稻株高显著高于对照水稻。采用高效热不对称交错PCR法(Hi TAIL-PCR)对RNAi-OsRhoGAP2转基因水稻T-DNA插入位点的侧翼序列进行分析,利用特异性嵌套引物扩增,结合序列对比分析,发现在4个不同的转基因水稻株系中,TDNA均插入到水稻OsRhoGAP2基因的第5个外显子内,本研究将为后续对该基因的功能鉴定提供重要依据。

关键词： OsRhoGAP2基因 HiTAIL-PCR 侧翼序列 T-DNA 转基因水稻插入位点