利用HiTAIL-PCR技术鉴定T-DNA在RNAi-OsRhoGAP2水稻中的插入位点

作     者：葛慧雯 李佳佳 王高华 闫鑫甜 安文静 杜京尧 石佳 彭静静 王美娜 梁卫红 

作者机构：河南师范大学生命科学学院河南新乡453007 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2018年第46卷第9期

页      面：55-59页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号:31171182) 河南省高校科技创新团队支持计划(编号:15IRTSTHN020) 河南省基础与前沿技术研究项目(编号:132300410137) 

主　　题：OsRhoGAP2基因 HiTAIL-PCR 侧翼序列 T-DNA 转基因水稻 插入位点 

摘      要：水稻OsRhoGAP2基因是前期从幼穗cDNA文库中筛选获得的功能未知基因,采用DNA重组技术构建OsRhoGAP2基因RNA干扰载体,并转化水稻。对转基因水稻的表型分析显示,OsRhoGAP2基因RNA干扰水稻株高显著高于对照水稻。采用高效热不对称交错PCR法(Hi TAIL-PCR)对RNAi-OsRhoGAP2转基因水稻T-DNA插入位点的侧翼序列进行分析,利用特异性嵌套引物扩增,结合序列对比分析,发现在4个不同的转基因水稻株系中,TDNA均插入到水稻OsRhoGAP2基因的第5个外显子内,本研究将为后续对该基因的功能鉴定提供重要依据。