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畜禽业 2024年第1期35卷 44-46页

作者：李能章何芳彭远义西南大学动物医学院重庆北碚400715

兽医专业学位研究生的培养目标是培养具有扎实理论基础、丰富实践经验和综合能力的高级专业人才。从兽医专业学位研究生培养存在的问题入手,详细阐述了知识融合与实践探索在兽医专业学位研究生培养中的重要作用,以期为兽医专业学位研究... 详细信息

兽医专业学位研究生的培养目标是培养具有扎实理论基础、丰富实践经验和综合能力的高级专业人才。从兽医专业学位研究生培养存在的问题入手,详细阐述了知识融合与实践探索在兽医专业学位研究生培养中的重要作用,以期为兽医专业学位研究生的培养提供参考。

关键词：兽医专业学位研究生培养知识融合实践

1株牛肺源化脓隐秘杆菌的生物学特性及其疫苗免疫保护性研究

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中国兽医学报 2024年第6期44卷 1156-1164页

作者：王媛媛杨乐真袁祥彭旭刘心语彭远义李能章西南大学动物医学院重庆北碚 400715

化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,TP)是一种重要的畜禽病原,可致动物化脓性肺炎、关节炎、乳腺炎等多种疾病.重庆云阳某牛场新进犊牛发生呼吸道疾病并伴随死亡,剖检发现肺部出现化脓结节,组织触片染色观察,发现大量单一短小杆菌,分... 详细信息

化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes,TP)是一种重要的畜禽病原,可致动物化脓性肺炎、关节炎、乳腺炎等多种疾病.重庆云阳某牛场新进犊牛发生呼吸道疾病并伴随死亡,剖检发现肺部出现化脓结节,组织触片染色观察,发现大量单一短小杆菌,分离培养及16S rRNA序列测定分析,确诊其感染病原为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyo-genes),命名为***-yy1在兔血平板上可致双层溶血环,发酵葡萄糖、赖氨酸等,其耐药特性可随培养基质改变而发生部分变化;胸腔和腹腔途径感染,TpCQ-yy1可致小鼠肺部及腹部的化脓性病变并伴随死亡,皮下和肌肉途径感染仅注射部位有化脓灶,并与感染剂量有关,无致死性;TpCQ-yy1基因组大小为2.335 Mb,编码2 107个蛋白,进化分析与牛源化脓隐秘杆菌TP1株相近,与其他动物源菌株差异较大;感染巨噬细胞可促进其细胞炎症因子分泌,制备TpCQ-yy1灭活菌苗及重组溶血素(rPLO)亚单位疫苗,分别通过皮下和肌肉途径免疫小鼠,均产生较高水平抗体,但对TpCQ-yy1腹腔途径攻毒的免疫保护率为33.3％～66.7％.该研究为深入了解化脓隐秘杆菌生物学特性、致病性及其防控提供了基础依据.

关键词：牛肺源化脓隐秘杆菌分离鉴定生物学特性炎症免疫保护

植物抗菌内生菌A11的分离鉴定及其活性物质的初步研究

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植物抗菌内生菌A11的分离鉴定及其活性物质的初步研究

作者：李能章西南农业大学

学位级别：硕士

植物内生菌作为生活在植物组织内部的一大类微生物，在其生活史的一定阶段或全过程中对宿主植物不表现出病症，由于生活环境的特殊性，在生理生物学作用上与外界环境微生物都有所不同。在长期共同进化过程中，植物内生菌与宿主植物之间... 详细信息

植物内生菌作为生活在植物组织内部的一大类微生物，在其生活史的一定阶段或全过程中对宿主植物不表现出病症，由于生活环境的特殊性，在生理生物学作用上与外界环境微生物都有所不同。在长期共同进化过程中，植物内生菌与宿主植物之间形成了一种共生关系，外界环境条件与宿主植物代谢变化影响着植物内生菌的种类及其代谢发生相应变化。随着世界人口的增长，某些癌症，抗药细菌，寄生原生动物和病原真菌严重影响着人们身体健康，寻找更有效药物迫在眉睫。植物抗菌内生菌作为植物内生菌中的一类，能产生多种新的抗菌活性物质，不但可以帮助人类解决健康问题，也可以解决植物和动物健康问题，但现阶段对植物抗菌内生菌的研究刚刚开始，对其特性了解还不够深入，无法对其充分利用，因此，对植物抗菌内生菌的研究不仅能带来巨大的社会效益还具有现实的理论意义。本实验主要选择了一些具有药用功效的植物组织作为抗菌内生菌分离材料，对从芦荟中分离到的一株具有广谱抗菌活性的A11菌进行了种属鉴定，并对其抗菌物质进行了分离纯化。实验结果如下： 1、采用组织表面消毒的方法从银杏、芦荟等十多种植物组织中分离出了115株植物内生菌，其中细菌60株，真菌55株，这些真菌在28℃恒温条件培养大多都不产孢。在这115株菌中共筛选出了5株抗菌活性不同的植物抗菌内生菌，它们分别是从银杏叶中分离到的一株内生真菌(G6)、芦荟叶中的一株内生细菌(A11)、地瓜中的一株内生细菌(F4)、夹竹桃中的两株真菌(N11、N20)，其中一株从芦荟组织中分离到的内生细菌(A11)具有广谱的抗菌活性，选择A11做深入研究。 2、内生菌A11具有广谱的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌有很强的抑制作用，但对革兰氏阴性菌的抑制活性不高，对一些植物病原真菌如番茄晚疫病原菌，桃红粉单端孢菌、桃褐腐病原菌等也有较好的抑制效果，对引起食品腐败的霉菌如青霉、黄曲霉等同样有很好的抑制效果。该菌在初始pH4-10的培养基中都能够生长，生长最适温度范围为28-30.5℃，在PDA、查氏等真菌培养基中生长旺盛，在高氏1号和无氮源培养基中同样生长良好，而在LB与牛肉膏蛋白胨等细菌培养基中生长很差，碳源是其生长的关键因子，这有别于一般细菌的营养需求。在含碳源丰富的培养基上产生大量的粘性物质，而芦荟同样产生大量的粘性物质，它们是否有必然的联系，是否是相互选择的结果，这些问题需要进一步的研究。西南农业大学硕士学位论文 3、参照《伯杰细菌鉴定手册》第八版和《常见细菌系统鉴定手册》，通过形态学观察，该菌株在PDA培养基上菌体杆状，产生芽抱，芽抱膨大为中生或近端生，革兰氏染色呈阳性，对内生菌All做生理生化特征测定，其接触酶阳性，氧化酶为阴性，运动性强，有鞭毛，能水解淀粉，利用尿素，不降解狡甲基纤维素，v.P阳性，利用葡萄糖等各种糖类产酸产气，硫化氢的产生和亚硝酸还原都为阴性，兼性厌氧，该菌在不同培养基上菌体的形态有很大的变化，从短杆状到丝状，生长的最适温度范围28一30 .5℃:对内生菌All做16SrDNA序列测定，序列长度为1498bP，通过与GenBa川日EMB沁DBJ爪DB该酸序列数据库中的序列进行比对，该菌与类芽抱杆菌属下的一个菌株尸口‘”才占配亩刀公行万西berisis的序列同源性为99肠，与其它类芽抱杆菌属下的其它种的序列相似性也在96-98%，基于16SrDNA序列构建了All与这些相关菌的系统发育树。与All同一簇的其它菌都属于类芽抱杆菌属，因此可以判定内生菌All属于类芽饱杆菌属，人11虽与尸冶阴亡6配“八绍kribber臼纽的165 rDNA序列同源性在99%，但它们的生理生化性质又有差别，相反All的生理生化性质与多粘类芽抱杆菌(尸尸。加拟口)的性质更为相似，因此该菌株应属类芽抱杆菌属中的一个新种。 4、内生菌All产生的抗菌活性物质具有广谱抗菌活性，该物质具有热稳定性，121℃处理30min活性没有损失，无挥发性，在PH6.0时不带电荷，溶于水，也能溶于甲醉、无水乙醇、丙酮、正丁醉等极性较强的有机溶剂，不溶于氛仿和乙酸乙醋等极性较弱的有机溶剂，该物质活性pH范围为2.0一9.0，经处理其pH值在2一9.。之外无活性的发酵液重新调节其PH到2.0-9.0

关键词：植物抗菌内生菌A11 分离鉴定生物学性质活性物质纯化

qseC及luxS双基因缺失对多杀性巴氏杆菌毒力及其交叉免疫保护性的影响

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中国兽医学报 2023年第10期43卷 2062-2071页

作者：胡沛彭旭程丹李甜王媛媛高丽旭袁祥彭远义李能章西南大学动物医学院重庆北碚400715

qseC和luxS是多杀性巴氏杆菌群体感应系统相关基因,为探讨其双缺失对多杀性巴氏杆菌致病性及交叉免疫保护的影响,本研究在前期构建的牛源A型多杀性巴氏杆菌CQ2株(PmCQ2)qseC基因缺失株(ΔqseC)的基础上进行了luxS基因缺失,构建了qseC及l... 详细信息

qseC和luxS是多杀性巴氏杆菌群体感应系统相关基因,为探讨其双缺失对多杀性巴氏杆菌致病性及交叉免疫保护的影响,本研究在前期构建的牛源A型多杀性巴氏杆菌CQ2株(PmCQ2)qseC基因缺失株(ΔqseC)的基础上进行了luxS基因缺失,构建了qseC及luxS双基因缺失株(ΔqseCΔluxS)。与野生型PmCQ2相比,该双基因缺失株在生物膜产生方面显著上升,而其荚膜生成量、血清敏感性及其毒力却显著下调,与qseC单基因缺失相比,双基因缺失在调节菌株部分生物学特性方面具有正向或负向叠加效应。疫苗交叉免疫保护性方面,与ΔqseC及野生型PmCQ2比较发现,双基因缺失株中luxS基因的缺失,减弱了部分qseC基因缺失所赋予菌株的交叉免疫保护效果,但却增强了菌株对牛源F型多杀性巴氏杆菌的交叉免疫保护作用,相比PmCQ2的无交叉免疫保护作用,qseC及luxS双基因缺失仍赋予了菌株很好的交叉免疫保护性。研究结果表明,群体感应基因qseC和luxS均可调控多杀性巴氏杆菌毒力及其交叉免疫保护性,该双基因缺失株可作为多杀性巴氏杆菌广谱型疫苗候选菌株。

关键词：多杀性巴氏杆菌群体感应系统基因缺失毒力交叉免疫保护性

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病原微生物荚膜多糖的生物学功能

畜牧兽医学报 2021年第3期52卷 576-587页

作者：谢黎卿杨洋彭远义李能章西南大学动物医学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆400700

荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)是一种广泛存在于细菌、支原体、部分真菌等菌体表面的碳水化合物。同时,荚膜多糖有助于菌体抵抗干燥和低温等不利环境,并通过在菌体表面形成物理屏障阻碍宿主补体的杀伤与吞噬作用。在长期多种应... 详细信息

荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)是一种广泛存在于细菌、支原体、部分真菌等菌体表面的碳水化合物。同时,荚膜多糖有助于菌体抵抗干燥和低温等不利环境,并通过在菌体表面形成物理屏障阻碍宿主补体的杀伤与吞噬作用。在长期多种应激-压力环境下,病原菌已进化出多种免疫逃避机制并促进宿主感染;在非病原微生物中,荚膜多糖可正向调节宿主免疫作用,并拮抗机体免疫因子,保护宿主免受病原菌引起的炎症性疾病。本文将结合本团队的相关研究工作,对荚膜多糖的结构、合成调控机制、生物学功能、免疫逃避机制和致病机制,特别是荚膜多糖正向调节宿主免疫系统及其应用潜力等方面作一综述,为病原菌致病机制的研究和疫病的有效防控提供参考依据。

关键词：荚膜多糖合成调控机制免疫逃避致病机制免疫调节

PRRSV GP5基因的优化、表达及其表达产物的免疫学活性分析

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西南大学学报（自然科学版） 2012年第1期34卷 1-5页

作者：黄园媛邹灵秀李能章彭远义西南大学动物科技学院重庆400715

PRRSV GP5基因含有一段信号肽及3个跨膜功能区,这些区域可以使翻译的GP5停留在内质网,从而抑制其表达.根据实验室分离测定的PRRSV T1株GP5基因序列进行优化设计,通过人工合成获得GP5-ShortDNA并构建表达载体pGEX-GP5,将其转入大肠杆菌BL... 详细信息

PRRSV GP5基因含有一段信号肽及3个跨膜功能区,这些区域可以使翻译的GP5停留在内质网,从而抑制其表达.根据实验室分离测定的PRRSV T1株GP5基因序列进行优化设计,通过人工合成获得GP5-ShortDNA并构建表达载体pGEX-GP5,将其转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得约41kD的目的融合蛋白.通过Western-blot检测,结果显示该融合蛋白可与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有免疫学活性.研究结果为PRRSV基因工程苗的研究奠定了基础,同时也为基因的优化提供了借鉴.

关键词： PRRSV GP5 基因合成原核表达免疫学活性

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细菌自转运蛋白主要功能与应用研究进展

中国兽医学报 2019年第8期39卷 1647-1652页

作者：冯腾李攀赵光夫李能章彭远义西南大学动物科技学院

革兰阴性菌具有外膜和内膜2层脂质双分子层,其分泌系统较革兰阳性菌更为复杂多样,而其中Ⅴ型分泌系统是其中结构最简单的一种。Ⅴ型分泌系统所转运的蛋白质统称为自转运蛋白(autotransporter)。自转运蛋白是在革兰阴性菌中广泛存在的一... 详细信息

革兰阴性菌具有外膜和内膜2层脂质双分子层,其分泌系统较革兰阳性菌更为复杂多样,而其中Ⅴ型分泌系统是其中结构最简单的一种。Ⅴ型分泌系统所转运的蛋白质统称为自转运蛋白(autotransporter)。自转运蛋白是在革兰阴性菌中广泛存在的一类蛋白质,它通常作为细菌的外膜蛋白或者分泌蛋白在细菌的多种生命活动中发挥着重要的作用,尤其是在一些动物共生菌或致病菌中,这些细菌在与宿主体内环境的长期共同进化中,分化出多种功能的自转运蛋白,使其能够更加适应体内的环境。

关键词：革兰阴性菌自转运蛋白功能应用

牛A型多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白免疫保护性的研究

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中国兽医科学 2016年第9期46卷 1153-1158页

作者：吉佳乐谷千冲李秀华胡治强李能章彭远义西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室重庆400715

为研究多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白(TAAs)的免疫保护效果,在对牛A型多杀性巴氏杆菌Pm CQ2株假定TAAs编码基因Pm1g0001的黏附基序分析基础上,对其黏附基序进行PCR扩增,并与质粒p ET-32a(+)连接,将重组质粒转入BL21(DE3)诱导表达获得... 详细信息

为研究多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白(TAAs)的免疫保护效果,在对牛A型多杀性巴氏杆菌Pm CQ2株假定TAAs编码基因Pm1g0001的黏附基序分析基础上,对其黏附基序进行PCR扩增,并与质粒p ET-32a(+)连接,将重组质粒转入BL21(DE3)诱导表达获得重组蛋白,纯化后与佐剂混合免疫小鼠,三免后收集小鼠血清检测抗体效价,并用Pm CQ2菌液进行攻毒保护性试验。结果显示,Pm1g0001的黏附基序具有TAAs的典型结构,重组蛋白r Pm1g0001免疫小鼠后可以刺激机体产生高效价抗体,对Pm CQ2的保护率达60%,具有良好的免疫保护效果,提示牛A型多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白可以作为研究新型亚单位疫苗的候选靶标。

关键词：多杀性巴氏杆菌三聚体自转运蛋白原核表达免疫保护

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溶血性曼氏杆菌白细胞毒素研究进展

中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1178-1182页

作者：张继鑫彭远义李能章西南大学动物科技学院

溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是一种革兰氏阴性短杆菌,可作为常在菌定植于牛羊上呼吸道,但在应激条件下,能够引起牛呼吸道疾病综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)、羊肺炎和新生羔羊急性败血症等多种牛羊... 详细信息

溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是一种革兰氏阴性短杆菌,可作为常在菌定植于牛羊上呼吸道,但在应激条件下,能够引起牛呼吸道疾病综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)、羊肺炎和新生羔羊急性败血症等多种牛羊疾病。溶血性曼氏杆菌病导致的临床病理变化以纤维素性渗出性肺炎、大叶性肺炎、胸膜肺炎为主,对牛羊养殖业造成了重大的经济损失,仅北美,Mh给肉牛养殖业造成的经济损失就高达数十亿美元[1]。

关键词：溶血性曼氏杆菌急性败血症大叶性肺炎新生羔羊胸膜肺炎肉牛养殖业白细胞毒素常在菌

革兰阴性菌孔蛋白结构、功能和应用的研究进展

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中国预防兽医学报 2020年第2期42卷 200-206页

作者：汪德会李攀李能章彭远义西南大学动物科技学院重庆400715

革兰阴性菌(Gram-negative bacteria)的外膜是一种由蛋白质、脂多糖、磷脂等多种物质组成的复合结构,约占细胞壁干重的80%,是革兰阴性菌抵抗外来有毒化合物的第一道防线。孔蛋白(Porins)是外膜蛋白(OMPs)家族中的一类典型膜通道蛋白,197... 详细信息

革兰阴性菌(Gram-negative bacteria)的外膜是一种由蛋白质、脂多糖、磷脂等多种物质组成的复合结构,约占细胞壁干重的80%,是革兰阴性菌抵抗外来有毒化合物的第一道防线。孔蛋白(Porins)是外膜蛋白(OMPs)家族中的一类典型膜通道蛋白,1979年Nakae第一次描述了它的特征并将其命名为孔蛋白。孔蛋白的结构在荚膜红细菌(Rhodo bacter capsulatus)中首次得到了精准解析[1],这类蛋白质参与了多种营养物质和有毒小分子(糖、药物、小肽、化学物质)的运输。

关键词：外膜蛋白革兰阴性菌第一道防线孔蛋白化学物质复合结构脂多糖通道蛋白