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Caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制

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Caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制

作者：李正杨第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景和目的：迟发性脑血管痉挛(delayed cerebral vasospasm，DCVS)是蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后的严重并发症，也是SAH后致死和致残的主要原因。其主要表现是受累动脉管腔狭窄、管壁增厚等形态学改变，包括... 详细信息

研究背景和目的：迟发性脑血管痉挛(delayed cerebral vasospasm，DCVS)是蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后的严重并发症，也是SAH后致死和致残的主要原因。其主要表现是受累动脉管腔狭窄、管壁增厚等形态学改变，包括血管壁中内皮细胞凋亡、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖，但DCVS的发病机制尚未完全阐明[1]。小窝(caveolae)是细胞质膜表面特异性的内陷微区，该结构聚集了多种受体分子，如转化生长因子受体、表皮生长因子受体、血小板源性生长因子受体、血管紧张素受体等，在信号通路中起重要的枢纽作用[2]。小窝蛋白-1(caveolin-1)是caveolae的表面标记蛋白，而且使caveolae保持结构和功能完整。有研究显示，caveolin-1在调节VSMCs的收缩和增殖反应中起重要的作用[3-4]。新近研究提示，DCVS的发生可能与转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1, TGF-β1)、血管内皮生长因子等有关，这些细胞因子积极参与了脑血管壁增殖过程[5]。而且TGF-β可以启动胞内Smads信号系统的表达调控[6]。因此，我们设想通过体外培养VSMCs，破坏细胞膜Caveolae结构后，观察TGF-β/Smad途径信号通路是否增强，从而抑制VSMCs的增殖。以此研究蛛网膜下腔出血后脑血管壁增殖的可能机制。方法： 1、解剖SD大鼠，分离并取出颈总动脉进行体外组织贴块法培养原代血管平滑肌细胞，免疫荧光法鉴定血管平滑肌细胞;2、 CCK-8法检测实验组和正常对照组血管平滑肌增殖变化;3、免疫组化法检测caveolin-1、TβR-1在细胞中表达水平;4、 Western blot法检测caveolin-1、pSmad2蛋白表达;5、 RT-PCR检测caveolin-1、Smad2mRNA转录水平;结果: 1、成功分离和体外培养颈总动脉血管平滑肌细胞;2、 CCK-8法检测显示MβCD干扰后，实验组VSMCs增殖被显著抑制(P<0.01);3、免疫组化法检测实验组caveolin-1在细胞膜和细胞质中表达降低，TβR-1表达增强;4、 RT-PCR法和western blot法分别检测实验组caveolin-1基因表达水平和蛋白表达水平明显下降;5、 RT-PCR法检测实验组Smad2基因表达水平明显上升，western blot法检测pSmad2蛋白表达水平亦明显上升;结论： Caveolae受MβCD干扰后结构被破坏，TGF-β/Smad信号通路增强，血管平滑肌细胞增殖受到抑制

关键词：血管平滑肌细胞小窝转化生长因子

高温对抗性和敏感小菜蛾海藻糖及其酶活性的影响

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高温对抗性和敏感小菜蛾海藻糖及其酶活性的影响

作者：李正杨福建农林大学

学位级别：硕士

本文采用生物和化学的分析方法,研究了高温(33.5、35、37、40℃)处理不同时间(4、8、24、48、72h)后,抗性和敏感小菜蛾[Plutella xylostella (L.)]不同龄期[幼虫(论文中幼虫均为四龄,以下简称幼虫,不再赘述)、蛹、成虫]体内海藻糖和海... 详细信息

本文采用生物和化学的分析方法,研究了高温(33.5、35、37、40℃)处理不同时间(4、8、24、48、72h)后,抗性和敏感小菜蛾[Plutella xylostella (L.)]不同龄期[幼虫(论文中幼虫均为四龄,以下简称幼虫,不再赘述)、蛹、成虫]体内海藻糖和海藻糖酶的变化情况及其比较;以及40℃高温处理不同时间(24、48、72h)小菜蛾成虫后,采用单细胞凝胶电泳技术检测其精子DNA的损伤情况,进一步研究了高温对小菜蛾种群生殖发育能力的影响机制。研究结果如下：(1)高温(33.5、35、37、40℃)处理不同时间(4、8、24、48、72h)后对小菜蛾四龄幼虫的海藻糖含量的影响为：先升高后下降,短期的高温处理会使其体内海藻糖含量出现短暂的上升,随着处理时间延长,总体表现下降,在72h后会出现一定回升;而海藻糖酶活性则受高温的抑制,总体上,抗性小菜蛾四龄幼虫体内海藻糖含量及海藻糖酶活性均低于敏感小菜蛾,而受高温影响后下降的程度较敏感小菜蛾显著;(2)高温(33.5、35、37、40℃)处理不同时间(4、8、24、48、72h)后对小菜蛾蛹的海藻糖含量和海藻糖酶活性的影响均为抑制,但抑制程度不显著;其中抗性小菜蛾下降程度较敏感小菜蛾更为显著,以33.5℃处理表现得尤为明显;高温对抗性和敏感小菜蛾蛹的抑制程度差异不显著：(3)高温(33.5、35、37、40℃)处理不同时间(4、8、24、48、72h)后对小菜蛾成虫的海藻糖含量和海藻糖酶活性的影响均为显著的抑制,其中,对敏感小菜蛾的抑制程度高于抗性小菜蛾;高温对小菜蛾成虫体内海藻糖及海藻糖酶的抑制程度为三个龄期中最显著的,特别是对酶活性的抑制,远远高于以上两个龄期小菜蛾。(4)高温(40℃)处理不同时间(24、48、72h)后对小菜蛾成虫精子DNA的损伤程度随处理时间的延长而加重,彗星出现率以及彗尾荧光强度、长度、面积与高温处理时间呈正比,证明小菜蛾精子DNA损伤频率及损伤程度和与高温处理时间呈正比。

关键词：小菜蛾高温海藻糖海藻糖酶

网孔支架辅助微弹簧圈治疗已破裂颅内动脉瘤的临床疗效分析

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第三军医大学学报 2013年第4期35卷 339-342页

作者：赖挺刘俊杨辉周政李正杨第三军医大学新桥医院神经外科全军癫痫病诊治中心重庆400037

目的探讨网孔支架辅助微弹簧圈在已破裂颅内动脉瘤栓塞治疗过程中的操控性、相关并发症及临床疗效。方法回顾性分析应用网孔支架辅助微弹簧圈栓塞治疗60例已破裂颅内动脉瘤患者资料。结果所有60枚支架顺利释放到位。术后即刻造影,动脉瘤... 详细信息

目的探讨网孔支架辅助微弹簧圈在已破裂颅内动脉瘤栓塞治疗过程中的操控性、相关并发症及临床疗效。方法回顾性分析应用网孔支架辅助微弹簧圈栓塞治疗60例已破裂颅内动脉瘤患者资料。结果所有60枚支架顺利释放到位。术后即刻造影,动脉瘤获100%栓塞34个,95.0%栓塞11个,90.0%栓塞14个,80.0%栓塞1个。术中出现血管痉挛4例,动脉瘤破例3例,血栓形成1例。术后随访3～18个月,死亡2例,患者术后生存质量与术前(Hunt-Hess分级)有统计学差异(P<0.05)。患者术后获影像学随访23例,其中DSA随访19例,1例出现支架内血管狭窄,均无动脉瘤复发。结论使用网孔支架辅助微弹簧圈栓塞治疗已破裂颅内动脉瘤具有操作性良好、安全性高等优点;术者娴熟的技术、对手术时机的准确把握和对介入材料的正确选择有助于减少并发症。

关键词：破例颅内动脉瘤网孔支架微弹簧圈血管内治疗

Rock信号通路参与TNF-α刺激兔基底动脉平滑肌增殖

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第三军医大学学报 2013年第18期35卷 1952-1956页

作者：安家印周政刘俊杨辉雷雪李正杨第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037

目的探索Rock信号通路在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)引起兔基底动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法组织块法原代培养兔基底动脉VSMCs,TNF-α刺激VSMCs,Rho激酶(Rho kinase,Rock)抑制剂Y-27632预处理,CCK-8法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在VSMCs的定位及表达变化,Western blot法检测细胞PCNA表达量的变化。结果细胞培养24 h后,与阴性对照组比较,20 ng/mL TNF-α处理可以显著增加VSMCs的增殖率(P<0.01),PCNA蛋白表达显著增高(P<0.01),S期+G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05);加入Y-27632预处理后,与20 ng/mL TNF-α处理组相比,VSMCs的增殖率受到显著抑制(P<0.01),PCNA蛋白表达明显减少(P<0.05),S期+G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05)。结论 TNF-α可促进VSMCs增殖和细胞周期进程,Rock抑制剂可阻滞TNF-α对VSMCs的这一作用,Rock信号通路参与TNF-α诱导的VSMCs增殖和细胞周期进程加速。

关键词：基底动脉血管平滑肌细胞 rho相关激酶类细胞增殖肿瘤坏死因子α 兔

caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制

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第三军医大学学报 2013年第12期35卷 1262-1266页

作者：李正杨周政杨辉刘俊赖挺安家印雷雪第三军医大学新桥医院神经外科全军癫痫病诊治中心重庆400037

目的观察caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制。方法取培养第3代VSMCs培养皿中培养。干扰组细胞加甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,MβCD)(5 mmol/L,DMEM配置)作用2 h;对照组加入与MβCD等量的DMEM作用2 h后以DMEM冲洗... 详细信息

目的观察caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制。方法取培养第3代VSMCs培养皿中培养。干扰组细胞加甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,MβCD)(5 mmol/L,DMEM配置)作用2 h;对照组加入与MβCD等量的DMEM作用2 h后以DMEM冲洗3次后正常培养48 h。采集细胞进行RT-PCR检测Caveolin-1、pSmad2 mRNA表达变化,Western blot法检测Caveolin-1、pSmad2蛋白表达变化,免疫组化检测Caveolin-1、TGF-β受体1(TGF-βR1)在细胞中的表达分布,CCK-8法检测细胞增殖能力。结果 Caveolin-1在MβCD干扰后,基因和蛋白表达水平明显下降(P<0.01),并且以细胞膜和细胞质高表达为主;而Smad2在MβCD干扰后,基因和蛋白表达水平明显上升,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);并且TβR-1在MβCD干扰后细胞内表达增加。CCK-8检测结果显示,MβCD干扰后,VSMCs增殖被显著抑制(P<0.01)。结论破坏caveolae结构后可以抑制VSMCs的增殖,其可能的机制是caveolae被破坏后,TGF-β/Smad信号通路增强,不能抑制Smad2磷酸化和下游的信号转导,从而达到抑制VSMCs的增殖的作用。

关键词：血管平滑肌细胞小窝转化生长因子

浅谈新课标理念下如何在初中英语教学中进行德育渗透

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贵州教育 2005年第14期 43-44页

作者：李正杨余庆县松烟中学

社会生活的信息化和经济的全球化,使英语的重要性日益突出.英语作为重要的信息语言之一,已在人类生活各个领域中被最广泛使用.新课标明确提出基础教育阶段英语课程的任务是:激发和培养学生学习英语的兴趣,使学生树立自信心,养成良好的... 详细信息

社会生活的信息化和经济的全球化,使英语的重要性日益突出.英语作为重要的信息语言之一,已在人类生活各个领域中被最广泛使用.新课标明确提出基础教育阶段英语课程的任务是:激发和培养学生学习英语的兴趣,使学生树立自信心,养成良好的学习习惯和形成有效的学习策略,发展自主学习的能力和合作精神;使学生掌握一定的英语基础知识和听、说、读、写技能,形成一定的综合语言运用能力;培养学生的观察、记忆、思维、想象能力和创新精神;帮助学生了解世界和中西方文化的差异,拓展视野,培养爱国主义精神,形成正确的人生观,为他们的终身学习和发展打下良好的基础.

关键词：初中英语教学德育渗透渗透德育新课标理念

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33种植物提取物促生根活性初步研究

安徽农业科学 2010年第6期38卷 3007-3008,3054页

作者：查友贵吴义玲刘林赵艳李正杨叶敏肖春王静农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室云南农业大学植物保护学院云南昆明650201

[目的]研究植物提取物的促生根活性,为开发高效、安全、与环境友好的新型天然源生根剂奠定基础。[方法]采用绿豆生根法,研究33种植物提取物对绿豆切段生根的促进作用。[结果]在1 mg/ml浓度下,紫茎泽兰(茎和叶)、柳杉(茎和叶)、云南松(茎... 详细信息

[目的]研究植物提取物的促生根活性,为开发高效、安全、与环境友好的新型天然源生根剂奠定基础。[方法]采用绿豆生根法,研究33种植物提取物对绿豆切段生根的促进作用。[结果]在1 mg/ml浓度下,紫茎泽兰(茎和叶)、柳杉(茎和叶)、云南松(茎)、云南松(叶)、杜鹃花(叶)、华山松(叶)、荔枝(皮)、华山松(果)和水冬瓜(叶)9种植物提取物对绿豆切段生根有很强的促进作用,生根促进率均达100%以上;其中紫茎泽兰(茎和叶)提取物的促生根作用最强,达(1 068.42±7.87)%,极显著高于其他植物提取物。[结论]紫茎泽兰(茎和叶)、柳杉(茎和叶)、云南松(茎)、云南松(叶)、杜鹃花(叶)、华山松(叶)、荔枝(皮)、华山松(果)和水冬瓜(叶)9种植物中含有促生根活性较强的物质,可进一步研究开发天然源生根剂。

关键词：植物源农药生根剂筛选

打响爱情保卫战,她要用20万买断“恋爱权”

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幸福（少年） 2009年第1期 12-14页

作者：李正杨草草

金钱真的能买来爱情吗?江苏女孩肖蕾给出了一个肯定的答案:她筹措出20万元巨款付给情敌,希望能一次性买断对方的"恋爱权",让她退出自己的爱情战场。这段恋情最后能修成正果吗?她用20万元可以买到自己梦寐以求的真情吗?

关键词：财产保全诉讼请求爱的权利案件受理鼓足勇气还给我笔迹鉴定我们俩值班民警主审法官

甲基-β-环糊精对内皮素-1诱导大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞胞内钙浓度变化的影响

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第三军医大学学报 2014年第11期36卷 1173-1177页

作者：雷雪阴金波刘俊李正杨安家印周政第三军医大学新桥医院神经外科全军癫痫病诊治中心重庆400037

目的研究甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,MβCD)对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)诱导大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法原代培养大鼠颈总动脉平滑肌细胞,通过形态学和免疫荧光染色鉴定。再通过炎症因子TNF-α(100μg/L)和MβCD(5 mmol/L)的不同处理将细胞分为4组:PSS液+ET-1组(A组)、PSS液+MβCD+ET-1组(B组)、PSS液+TNF-α+ET-1组(C组)、PSS液+TNF-α+MβCD+ET-1组(D组)。最后各组细胞经Furo-2/AM染色后,采用TILL荧光钙成像系统检测活细胞在ET-1(100 nmol/L)刺激下胞内钙荧光强度的变化情况,R(F 340 nm/F 380 nm)值代表单细胞胞内钙荧光强度比值。结果TILL荧光钙成像系统检测结果显示A^D组细胞静息状态荧光强度R0值分别为(0.591 6±0.082 0)、(0.575 3±0.079 0)、(0.655 1±0.083 7)、(0.610 5±0.080 4),组间比较无统计学差异(P>0.05)。各组细胞经ET-1(100 nmol/L)刺激后胞内钙荧光强度分别较静息状态上升:A组上升(115±17)%,B组上升(67±15)%,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组上升(279±21)%,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01);D组上升(88±16)%,与C组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MβCD破坏caveolae结构后明显降低了VSMCs胞内钙离子浓度升高程度,caveolae可能是抑制脑血管痉挛发生的重要靶点。

关键词：血管平滑肌细胞甲基-β-环糊精小窝结构钙离子浓度内皮素-1