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2021年云南省环境污水中检出1株疫苗衍生脊髓灰质炎病毒

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病毒学报 2022年第6期38卷 1289-1296页

作者：汤晶晶张杰张筱碟李江嵘祝双利李晓嫘严冬梅李凯丁峥嵘云南省疾病预防控制中心昆明650022 云南省肠道病毒研究中心昆明650022 昆明医科大学昆明650022 中国疾病预防控制中心北京102206

为了解云南省污水中脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)的变异特征,为维持无脊灰工作提供依据,本研究于2021年1-12月在昭通市开展了环境污水监测研究。每月采集某污水处理厂水样标本800mL,采用阴离子膜吸附洗脱法对样品进行浓缩处理,... 详细信息

为了解云南省污水中脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)的变异特征,为维持无脊灰工作提供依据,本研究于2021年1-12月在昭通市开展了环境污水监测研究。每月采集某污水处理厂水样标本800mL,采用阴离子膜吸附洗脱法对样品进行浓缩处理,进行PV分离。PV分离物进行实时荧光定量RT-PCR型内鉴定和VP1区核苷酸序列分析,并对发现的一株Ⅲ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)进行全基因组序列测定与生物学特征分析。昭通市2021年的12份水样中,3份(3/12,25%)分离到10株PV,其中1株为Ⅲ型VDPV,与Ⅲ型Sabin株相比,VP1编码区存在10个变异;另外9株为疫苗相关株。该VDPV基因组全长7432 nt,编码2207个氨基酸,与SabinⅢ疫苗株全基因组核苷酸和氨基酸序列的相似性分别为99.2%和99.5%。系统进化分析显示,昭通VDPV株在进化树中处独立分支,同其他国家及地区的Ⅲ型VDPV序列无明显相关性。关键位点分析显示该VDPV毒株有2个减毒位点(nt 472、nt 2493)发生了回复突变。温度敏感性实验表明该Ⅲ型VDPV分离物的温度敏感性有所降低。本研究结果证明了PV的环境监测具有较高的敏感性,是急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例监测的有效补充。在我国边境省份开展环境监测对于防控VDPV的潜在传播甚至脊灰野病毒的输入及将防控关口前移具有重要的意义。

关键词：环境监测疫苗衍生脊髓灰质炎病毒基因特征序列测定和分析

肠道病毒C组96型(EV-C96)新疆株的全基因组序列分析

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病毒学报 2022年第2期38卷 332-340页

作者：孙强刘莹唐海淑李晓嫘严冬梅祝双利王东艳崔惠许文波张勇中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所脊髓灰质炎室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心免疫规划科乌鲁木齐830011 中国科学院生物安全大科学研究中心武汉430000

肠道病毒C组96型(EV-C96)是C组肠道病毒的一种新型肠道病毒,在临床上多与急性弛缓性麻痹等疾病相关联,世界分布较广,近年来陆续在中国、芬兰等多个国家的急性弛缓性麻痹患者、腹泻患者、健康人群或环境标本中分离到。为探究在我国新疆... 详细信息

肠道病毒C组96型(EV-C96)是C组肠道病毒的一种新型肠道病毒,在临床上多与急性弛缓性麻痹等疾病相关联,世界分布较广,近年来陆续在中国、芬兰等多个国家的急性弛缓性麻痹患者、腹泻患者、健康人群或环境标本中分离到。为探究在我国新疆地区流行的EV-C96毒株的基因特征与进化特征,本研究对2011年从我国新疆地区一名急性弛缓性麻痹病例及一名接触者中分离到的两株EV-C96进行了全基因组序列测定,随后与全球EV-C96流行株以及C组肠道病毒原型株进行进化分析,与C组肠道病毒代表株进行核苷酸和氨基酸相似性分析和重组分析。结果显示,两株新疆EV-C96毒株与原型株以及1991年在我国山东地区分离的毒株等早期流行株分布于两个分支,且在基因组结构的多个区域核苷酸差异性较大,同时其非结构蛋白区域与其它型别的C组肠道病毒之间存在重组。EV-C96可能通过重组方式发生毒力改变,需加强C组肠道病毒在我国的监测,提升对其所导致的暴发疫情进行应急处置的能力。本研究揭示了EV-C96的起源进化,证实了C组肠道病毒多个型别之间的重组关系,为我国肠道病毒的防控提供科学依据。

关键词： EV-C96 新型肠道病毒全基因组序列基因特征基因重组

山西省2014年Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒的基因特性分析

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病毒学报 2015年第2期31卷 157-163页

作者：严冬梅李晓嫘张勇杨建芳祝双利王东燕张创业朱晖许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 山西省疾病预防控制中心太原030012

2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）对Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎（脊灰）病毒（Vaccinederived Poliovirus,VDPV）定义进行了修订,为研究新定义的Ⅱ型VDPV的基因特征及进化,本研究对山西省2014年1例急性弛缓性麻痹（Acu... 详细信息

2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）对Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎（脊灰）病毒（Vaccinederived Poliovirus,VDPV）定义进行了修订,为研究新定义的Ⅱ型VDPV的基因特征及进化,本研究对山西省2014年1例急性弛缓性麻痹（Acute flaccid paralysis,AFP）病例中分离到的1株Ⅱ型VDPV进行全基因组序列测定和分析。测序显示毒株的基因全长为7 439个碱基,共编码2207个氨基酸,与Sabin2疫苗株相比不存在碱基的插入和缺失。该毒株在已知的减毒位点5′非编码区nt481上发生了回复突变,而在另一个减毒位点VP1衣壳编码区nt2909位点上未发生核苷酸变异。毒株与Sabin1发生重组,重组位点位于3D非结构编码区的nt6 247～6 281之间。VP1编码区基因进化树分析表明山西Ⅱ型VDPV的进化独立于国内外至今发现的其它Ⅱ型VDPVs,按照脊灰已知的基因进化速率估算该毒株已在人群中循环约176d。本研究再次证明了中国脊灰实验室网络监测的敏感性,能够及时准确地发现VDPV,在中国维持无脊灰状态过程中发挥重要作用。

关键词：山西疫苗衍生脊髓灰质炎病毒基因特征

2020年新疆维吾尔自治区喀什市环境污水中首次分离到Ⅰ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒的早期应对

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中国疫苗和免疫 2022年第4期28卷 381-384页

作者：唐海淑沙吾拉西·热加甫李晓嫘凯赛尔·吾斯曼王琪彭力吉宁静严冬梅祝双利新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心新疆乌鲁木齐830011 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的对新疆喀什市2020年9月环境污水中Ⅰ型疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)分离株进行鉴定和早期应对。方法2020年9月-2021年6月在喀什市每月采集1-2份环境污水标本,2020年12月10-12日对环境污水覆盖区... 详细信息

目的对新疆喀什市2020年9月环境污水中Ⅰ型疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Vaccine derived poliovirus,VDPV)分离株进行鉴定和早期应对。方法2020年9月-2021年6月在喀什市每月采集1-2份环境污水标本,2020年12月10-12日对环境污水覆盖区域内<5岁健康儿童采集粪便标本,进行脊灰病毒(Poliovirus,PV)分离,采用实时荧光定量PCR对PV分离株进行型内鉴定,分析VP_(1)区核苷酸序列变异,构建系统进化树以确定来源。结果在14份环境污水标本中11份标本分离到38株PV,在51份健康儿童粪便标本中2份标本分离到2株PV,其中2020年9月环境污水标本分离的1株PV的VP_(1)区有12个核苷酸变异,鉴定为I型VDPV,与中国既往或GenBank中Ⅰ型VDPV序列均不同源,之后连续7个月未再检出遗传学相关的VDPV,该分离株确定为未分类VDPV。结论本研究从喀什市环境污水中检出的I型VDPV来源不明确;环境监测有助于VDPV或脊灰野病毒的及时发现和早期应对。

关键词：脊髓灰质炎脊髓灰质炎病毒 Ⅰ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒环境监测

甘肃省2008-2012年手足口病流行特征及病原学研究

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病毒学报 2014年第1期30卷 25-32页

作者：于德山张勇陈建华段莉平赵晓虹李晓嫘孙强陈晓刘建锋郑云鹤孟蕾甘肃省疾病预防控制中心兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒与病毒病重点实验室北京102206

分析甘肃省手足口病流行特征及病原学特征，为制定有效的防控策略提供依据。采用描述性流行病学分析方法对甘肃省手足口病发病资料进行分析，采集的病例临床标本用RT—PCR或Real-time PCR法检测肠道病毒（Human enterovirus，HEV）核酸... 详细信息

分析甘肃省手足口病流行特征及病原学特征，为制定有效的防控策略提供依据。采用描述性流行病学分析方法对甘肃省手足口病发病资料进行分析，采集的病例临床标本用RT—PCR或Real-time PCR法检测肠道病毒（Human enterovirus，HEV）核酸，用RD和HEp-2细胞分离病毒，阳性病毒株采用RT—PCR方法扩增全长VP1编码区后，进行核苷酸序列测定和分析。结果表明2008-2012年共报告手足口病病例52550例，包括重症病例205例，死亡病例27例。5年全省发病率依次为22．42／10万、49．29／10万、47．20／10万、27．27／10万和55．84／10万，全省14个市州均有发病。兰州市发病数最高为16001例，占全省病例的30．45％，发病集中在5～7月，占全年病例的51．69％，男女性别比为1．69；1，其中5岁以下儿童发病占87．59％。对5416例病例标本进行了实验室检测，HEV核酸阳性3322例（阳性率61．34％），其中肠道病毒A组71型（Enterovirus A71，EV71）占46．96％，柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16，CVA16）占41．57％，其他HEV占11．47％。对186例重症病例进行实验室检测，HEV核酸阳性114例（阳性率61．29％），其中EV71占82．46％；对25例死亡病例进行实验室检测，均为EV71感染。从3111份临床标本（咽拭子2123份，粪便705份，疱疹液705份）分离到病毒402株，其中EV71占70．15％，CVA16占27．11％，其它柯萨奇A组病毒占3．98％，柯萨奇B组病毒占2．49％，埃可病毒占1．74％，腺病毒占1．99%。流行HEV的基因型分析结果显示，2008～2012年分离到的194株EV71均为C4基因亚型的C4a进化分支；45株CVA16均为B1基因亚型，其中12株属于Bla进化分支，33株属于Blb进化分支，2012年Blb已成优势亚型。结论是甘肃省手足口病在5岁以下儿童感染率最高，主要病原为EV71和CVA16，发病率随感染病原型别的不同呈现波浪形变化，不同病原呈现交替流行的现象，重症和病死病例与EV71感染密切相关，同一年度不同地区的病原型别存在差异。

关键词：手足口病甘肃省流行病学肠道病毒71型柯萨奇病毒A组16型

2007～2012年山东省临沂市手足口病流行病学和肠道病毒71型基因特征分析

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病毒学报 2014年第3期30卷 246-252页

作者：张盛张勇檀晓娟林艺王连森祝双利李晓嫘王东艳徐爱强裴耀文王显军许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 山东省疾病预防控制中心济南250061

为了分析山东省临沂市2007～2012年手足口病（Hand, foot, and mouth disease, HFMD）的流行病学和肠道病毒71型（Enterovirus A71, EV-A71）的基因特征，采用描述流行病学方法，对国家传染病监测信息报告管理系统中的HFMD疫情资料进行... 详细信息

为了分析山东省临沂市2007～2012年手足口病（Hand, foot, and mouth disease, HFMD）的流行病学和肠道病毒71型（Enterovirus A71, EV-A71）的基因特征，采用描述流行病学方法，对国家传染病监测信息报告管理系统中的HFMD疫情资料进行统计分析；对2007～2012年山东省临沂市HFMD病例的EV-A71分离株的VP1编码区进行逆转录-聚合酶链反应，并对扩增产物进行核苷酸序列测定，使用MEGA 5.0软件分析VP1区基因变异特征以及基因亲缘关系。结果显示，2007～2012年山东临沂市每年均有HFMD报告，其中2009年发病例数和死亡病例数最多，分别为14697例和9例，报告发病率为140.28/10万，死亡率为0.086/10万。发病高峰主要发生在4～7月，5月份最高；其中散居儿童发病数占77.37%～92.00%。2007～2009年发病高峰在2.5岁，2010～2012年发病高峰在1.5岁。连续6年实验室确诊HFMD共计1365例，占总病例数比例为2.98%；其中EV-A71构成比为44.18%，柯萨奇病毒A组16型（Coxsackievirus A16, CVA16）为46.59%。2007～2012年在山东省临沂市分离到的EV-A71均属于C4基因亚型中C4a进化分支。2007～2012年山东省临沂市均有HFMD暴发流行，各区县发病率有明显差异，发病高峰在每年的4～7月。发病年龄集中在3岁以下儿童，散居儿童构成比例最高。各年份引起HFMD的病原体均以EV-A71和CVA16共循环为主。自2007年在山东省临沂市发现EV-A71 C4基因亚型的C4a引起的HFMD疫情以来，C4a在临沂市已经持续传播和流行了6年。

关键词：手足口病流行病学 EV-A71基因特征

单纯疱疹病毒1型引起的发热出疹性疾病需要与手足口病进行鉴别

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病毒学报 2013年第4期29卷 415-420页

作者：祝双利刘建锋孙强李静李晓嫘张勇陈瑛温小云严冬梅黄国虹张宝敏张波安洪秋李慧许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 甘肃省疾病预防控制中心兰州730000

对2008年在甘肃省发生的一起疑似手足口病(HFMD)的发热出疹性疾病的流行进行病原体的实验室检测,明确引起这起传染病流行的病原体。从4名发热出疹患者采集的8份临床标本中(每个患者采集咽拭子和疱疹液标本),首先将临床标本接种到RD和HE... 详细信息

对2008年在甘肃省发生的一起疑似手足口病(HFMD)的发热出疹性疾病的流行进行病原体的实验室检测,明确引起这起传染病流行的病原体。从4名发热出疹患者采集的8份临床标本中(每个患者采集咽拭子和疱疹液标本),首先将临床标本接种到RD和HEp-2细胞上进行病毒分离,对病毒分离阳性的标本提取病毒核酸,然后使用荧光定量-逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行人肠道病毒(HEV)核酸的检测。对HEV检测结果阴性的标本采用序列非依赖的单引物扩增技术(SISPA)进行"未知病原体"的鉴定。分离到的6株病毒均鉴定为单纯疱疹病毒I型(HSV-1),结合分析这起流行中患者的临床表现、流行病学调查结果以及实验室检测结果,表明HSV-1是引起这起发热出疹性疾病流行的病原体。6株HSV-1的gG区核苷酸和氨基酸水平上差异都较小,同源性分别高达98.8%和97.9%,说明这起疫情是由同一个病毒传播链引起的。HSV-1等病毒引起的发热出疹性疾病需要与HFMD进行鉴别诊断,由于仅从临床症状和流行病学资料上判断引起发热出疹性疾病的病原体是非常困难的,因此,必须依赖于实验室的诊断。

关键词：发热出疹性疾病手足口病序列非依赖的单引物扩增技术单纯疱疹病毒1型 A基因型

中国2015年脊髓灰质炎实验室网络的运转与评价

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中国疫苗和免疫 2017年第2期23卷 127-133页

作者：祝双利李晓嫘朱晖王东艳严冬梅范钦樊春祥张勇许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生和计划生育委员会医学病毒学和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 中国疾病预防控制中心免疫规划中心北京100050 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051

目的评价中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区)2015年脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(Polio laboratory network,PLN)运转情况,为中国维持无脊灰状态提供病毒学依据。方法对中国急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例监... 详细信息

目的评价中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区)2015年脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(Polio laboratory network,PLN)运转情况,为中国维持无脊灰状态提供病毒学依据。方法对中国急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例监测信息报告管理系统中31个省(自治区、直辖市)报告的AFP病例和中国疾病预防控制中心(CDC)病毒病预防控制所国家脊灰实验室(National Polio Laboratory,NPL)的监测数据库进行统计分析,对PLN的各项运转指标进行评价。结果 2015年中国共报告5 218例AFP病例,PLN收到5 173例AFP病例的10 335份粪便标本;14天内双份粪便标本采集率为92.76%;合格粪便标本采集率为92.16%,病毒分离结果 14天内反馈率为96%。5 173例病例中,L20B阳性69例(1.33%);非脊灰肠道病毒(Non-polio enterovirus,NPEV)阳性472例(9.12%)。NPL收到省级脊灰实验室送检的分离自AFP病例、非AFP病例、AFP病例接触者及健康人的179株L20B细胞阳性分离物,其中173株为脊灰病毒(Poliovirus,PV),4株为NPEV,2株为非肠道病毒(Non-enterovirus,NEV)。173株PV中,8株为疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived poliovirus,VDPV),来自浙江、广东和辽宁;未发现脊灰野病毒(Wild poliovirus,WPV)。从脊灰病毒外环境监测采集的污水标本中分离到1株Ⅱ型VDPV。2015年NPL和31个省CDC脊灰实验室都通过了世界卫生组织(WHO)粪便标本脊灰等肠道病毒的新检测流程的能力验证标本考核。NPL和27个省CDC脊灰实验室通过了WHO型内鉴定能力验证考核。结论中国PLN 2015年运转正常,未发现WPV,为维持中国无脊灰状态,早期发现VDPV或VDPV病例,早期采取应对措施阻断其传播提供了重要的病毒学依据。

关键词：脊髓灰质炎实验室网络脊髓灰质炎病毒疫苗衍生脊髓灰质炎病毒

中国2014年脊髓灰质炎实验室网络的运转与评价

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中国疫苗和免疫 2017年第1期23卷 1-7页

作者：祝双利朱晖范钦张勇王东艳严冬梅李晓嫘樊春祥许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生和计划生育委员会医学病毒学和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 中国疾病预防控制中心免疫规划中心北京100050

目的评价中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同)2014年脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(Polio Laboratory Network,PLN)运转情况,为中国维持无脊灰状态提供病毒学依据。方法对中国急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)... 详细信息

目的评价中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同)2014年脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(Polio Laboratory Network,PLN)运转情况,为中国维持无脊灰状态提供病毒学依据。方法对中国急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例监测信息报告管理系统中31个省份报告的AFP病例和国家脊灰实验室(National Polio Laboratory,NPL)的监测数据进行分析,对PLN的各项运转指标进行评价。结果 2014年中国PLN共报告5 751例AFP病例,收到5 688例AFP病例的11 363份粪便标本;14天内双份粪便标本的采集率为92.16%,合格粪便标本采集率为91.65%,病毒分离结果 18天内反馈率为97.62%。从5 688例粪便标本中132例(2.32%)分离到脊灰病毒(Poliovirus,PV);590例(10.37%)分离到非脊灰肠道病毒(NPEV)。2014年NPL收到省级脊灰实验室送检的分离自AFP病例及其接触者、非AFP病例、健康人的292株L20 B细胞阳性分离物,262株为PV,21株为NPEV,9株为非肠道病毒(Non-enterovirus,NEV)。262株PV中,7株为疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived poliovirus,VDPV),来自内蒙古、山西、河北和湖南;未发现脊灰野病毒(Wild poliovirus,WPV)。从脊灰病毒外环境监测采集的污水标本中分离到4株VDPV。2014年NPL和31个省级CDC脊灰实验室都通过了世界卫生组织(WHO)粪便标本肠道病毒的新检测流程的能力验证标本考核。NPL和8个省级CDC脊灰实验室接受并通过了WHO现场评估认证,其他省级实验室接受了信函认证。结论中国PLN 2014年运转正常,未发现WPV,为维持中国无脊灰状态、早期发现VDPV或VDPV病例、早期采取应对措施阻断其传播提供了重要的病毒学依据。

关键词：脊髓灰质炎网络运转脊髓灰质炎病毒,疫苗衍生脊髓灰质炎病毒