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线粒体铁代谢与人类疾病的基础研究

医学研究生学报 2016年第1期29卷 24-28页

作者：李宽钰南京大学医学院基础部铁代谢实验室/江苏省医学分子技术重点实验室南京210093

铁是生命所必需的元素,而游离的铁又具有毒性。细胞内过多的铁可诱导产生大量的活性氧给细胞带来致命性损伤,所以铁在细胞内的代谢受到严格的调控。线粒体是细胞内最大的铁代谢细胞器,主要负责血红素和铁硫簇的合成。血红素和铁硫簇是... 详细信息

铁是生命所必需的元素,而游离的铁又具有毒性。细胞内过多的铁可诱导产生大量的活性氧给细胞带来致命性损伤,所以铁在细胞内的代谢受到严格的调控。线粒体是细胞内最大的铁代谢细胞器,主要负责血红素和铁硫簇的合成。血红素和铁硫簇是很重要的2种辅基,参与DNA的合成与修复,蛋白的合成与折叠,三羧酸循环,线粒体电子传递链的正常进行等重要代谢过程。线粒体内铁代谢的紊乱会严重地影响到整个细胞的铁代谢以及能量代谢,从而影响线粒体的功能,导致各种疾病的发生。文章就铁代谢和线粒体功能相关研究的工作特别是对最近1年以内发表的文章相关内容作一总结和展望。

关键词：铁硫簇线粒体的功能铁代谢疾病

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RELP在林木遗传育种中的应用

世界林业研究 1993年第3期6卷 43-48页

作者：黄敏仁李宽钰许农南京林业大学南京210037

本文介绍了一种丰富的遗传标记—DNA限制性片段长度多态性(简称RELP)的原理、方法以及在林木遗传育种中的应用,并展望了RFLP在林木育种中的利用前景。

关键词：林木育种应用 RELP 遗传育种

敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛次要组分FimCDE的载体构建

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上海口腔医学 2013年第6期22卷 623-627页

作者：黎景景高鑫李宽钰王文梅南京大学医学院附属口腔医院口腔黏膜病科江苏南京210008 南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室.江苏南京210093

目的:构建重组质粒pPHU281-C-Spec-E,用于敲除菌毛蛋白次要组分基因fimCDE。构建fimCDE缺陷的牙龈卟啉单胞菌,为进一步研究FimCDE在感染中的作用奠定基础。方法:厌氧罐培养牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC33277,提取基因组DNA后,PCR扩增获得含... 详细信息

目的:构建重组质粒pPHU281-C-Spec-E,用于敲除菌毛蛋白次要组分基因fimCDE。构建fimCDE缺陷的牙龈卟啉单胞菌,为进一步研究FimCDE在感染中的作用奠定基础。方法:厌氧罐培养牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC33277,提取基因组DNA后,PCR扩增获得含有人工设计的酶切位点的fimC基因的上游片段及fimE的下游片段,将其克隆到自杀质粒pPHU281内,命名为pPHU281-C-E;再将抗大观霉素的抗性基因插入到C及E片段之间,最终获得重组质粒pPHU281-C-Spec-E。结果:酶切及DNA序列分析验证重组质粒pPHU281-C-Spec-E构建成功。结论:成功构建了含有牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白次要组分基因fimC上游及fimE下游片段的重组质粒pPHU281-CSpec-E,可用于构建菌毛蛋白次要组分FimCDE缺陷的的突变体。

关键词：牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白次要组分FimCDE突变体载体构建

定向敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA的重组质粒构建

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中华口腔医学杂志 2012年第11期47卷 671-674页

作者：杨洁刘玉吴娟孙卫斌李宽钰南京大学口腔医学院-南京市口腔医院牙周科 210008 南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室

目的构建定向敲除牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis，Pg）菌毛蛋白FimA基因的质粒pPHU281_A_Spec_B，用于后续构建菌毛蛋白FimA缺陷型Pg，为研究FimA的功能奠定分子基础。方法厌氧培养PgATCC33277，提取基因组DNA，聚合酶链反... 详细信息

目的构建定向敲除牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis，Pg）菌毛蛋白FimA基因的质粒pPHU281_A_Spec_B，用于后续构建菌毛蛋白FimA缺陷型Pg，为研究FimA的功能奠定分子基础。方法厌氧培养PgATCC33277，提取基因组DNA，聚合酶链反应扩增PgFimA基因一定长度的上游A片段及下游B片段，并在扩增片段两端添加合适的酶切位点；利用定向克隆技术将A和B基因插入到载体自杀质粒pPHU281中，并添加大观霉素抗性基因片段，重组的pPHU28_1_A_Spec_B在大肠杆菌DH-5仪内扩增后酶切电泳鉴定并进行DNA测序。结果通过对重组质粒pPHU281_A_Spec_B进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析，证明重组质粒pPHU28_1_A_Spec_B构建成功。结论成功构建了质粒pPHU28_1_A_Spec_B，有利于菌毛蛋白FimA缺陷型Pg的构建，为深入研究FimA的作用机制奠定了基础。

关键词：紫单胞菌龈菌毛蛋白质类质粒构建牙龈卟啉单胞菌 FimA 重组质粒

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用RAPD探讨毛白杨起源

植物分类学报 1997年第1期35卷 24-31页

作者：李宽钰黄敏仁王明庥南京林业大学林木遗传和基因工程开放研究实验室

利用RAPD分子标记对山杨、欧洲山杨、银白杨、响叶杨及毛白杨的5个不同类型,即抱头毛白杨、截叶毛白杨、易县毛白杨、陕西毛白杨和南京栽培的毛白杨进行了分析,并进行了银白杨×响叶杨正反交实验,研究杂种后代与毛白杨的关系。RAPD分析... 详细信息

利用RAPD分子标记对山杨、欧洲山杨、银白杨、响叶杨及毛白杨的5个不同类型,即抱头毛白杨、截叶毛白杨、易县毛白杨、陕西毛白杨和南京栽培的毛白杨进行了分析,并进行了银白杨×响叶杨正反交实验,研究杂种后代与毛白杨的关系。RAPD分析说明,毛白杨的亲缘关系与银白杨和响叶杨较近,而与山杨和欧洲山杨的亲缘关系则较远。毛白杨在聚类图上首先是与银白杨和响叶杨聚为一类,再与山杨和欧洲山杨聚在一起。通过比较毛白杨与银白杨和响叶杨的正反交子代,发现毛白杨更接近银白杨×响叶杨的子代,而与反交子代有所区别。由此可见,毛白杨为天然杂种是没有疑义的,而且很可能是银白杨×响叶杨的杂种。本研究筛选出的13个引物,产生了78条谱带,覆盖了基因组的一定区域,其可靠性是较高的。

关键词：毛白杨 DNA多态性起源 RAPD

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青杨的遗传分化

Acta Botanica Sinica 1997年第8期39卷 753-758页

作者：李宽钰黄敏仁杨自湘王明庥黄丰厚南京林业大学林木遗传与基因工程开放研究实验室中国林业科学研究院林业研究所北京100091 美国阿肯色州立大学

分析了10个省市自治区的30个群体的青杨(Populus cathayana Rehd.),共169株,用RAPD方法分析群体间和群体内的DNA多态性。结果显示群体间的DNA多态度远高于群体内的,而且东部群体与西部群体间存在较大的遗传差异,相邻产地之间的遗传差异... 详细信息

分析了10个省市自治区的30个群体的青杨(Populus cathayana Rehd.),共169株,用RAPD方法分析群体间和群体内的DNA多态性。结果显示群体间的DNA多态度远高于群体内的,而且东部群体与西部群体间存在较大的遗传差异,相邻产地之间的遗传差异相对较小。聚类分析结果表明,东、西部群体已出现明显分化。整个聚类图与青杨的地理分布区大致相对应。西部群体内DNA多态性比东部群体高,因此西部群体在研究青杨的起源与演化中将显得更为重要。按照多样性中心与起源中心的关系,青杨可能起源于我国西北部,逐渐向东扩散,形成现代分布格局。

关键词：杨树青杨遗传分化

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3种转录因子对FXN基因表达的影响

医学研究生学报 2013年第7期26卷 690-694页

作者：戴晓曼周迪李宽钰南京大学医学院南京210093 福建医科大学附属协和医院老年医学研究所

目的弗里德赖希共济失调(Friedreich ataxia,FRDA)是一种常染色体隐性遗传疾病,其发病机制是frataxin(FXN)基因的第1个内含子上GAA序列的大量重复扩展,使FXN蛋白表达量减少所致。文中旨在研究FXN基因启动子区域上的转录因子对FXN表达的... 详细信息

目的弗里德赖希共济失调(Friedreich ataxia,FRDA)是一种常染色体隐性遗传疾病,其发病机制是frataxin(FXN)基因的第1个内含子上GAA序列的大量重复扩展,使FXN蛋白表达量减少所致。文中旨在研究FXN基因启动子区域上的转录因子对FXN表达的影响。方法运用Genomatix软件预测出FXN基因的启动子区域及转录因子可能的结合位点,用基因定点突变技术克隆这些结合位点,并用双报告基因法检测启动子活性;qPCR、Western blot以及酶活性实验分别用于检测过表达转录因子后FXN表达量的变化及FXN在铁代谢中的功能。结果启动子活性测定发现FXN基因的启动子1和启动子2活性较高,在该活性较高区域,预测出转录因子可能结合位点,并发现这些结合位点对启动子的活性很重要;过表达转录因子HMX2、HMX3和EGR3能促进细胞内源性FXN mRNA和蛋白的表达,并影响细胞内铁代谢水平。结论转录因子HMX2,HMX3和EGR3能够促进FXN基因的表达,增强细胞铁代谢的能力和线粒体的功能。

关键词：弗里德赖希共济失调启动子 Frataxin HMX2 HMX3 EGR3

青杨的DNA多态性及遗传分化——Ⅰ.青杨的DNA多态性

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科学通报 1997年第9期42卷 969-972页

作者：李宽钰黄敏仁王明庥杨自湘黄丰厚南京林业大学林木遗传与基因工程开放实验室中国林业科学研究院林业研究所 UniversityofArkansas FayettevideAR72701USA

杨属(Populus)5个派中,青杨派(***)种类最多,且绝大部分都分布于我国西北、西南、华北及东北地区.青杨派中的青杨(Populus cathayana Rehd.)为我国特有,分布范围仅次于小叶杨,位居青杨派中的第二位.青杨整个分布区内种内遗传变异性很大... 详细信息

杨属(Populus)5个派中,青杨派(***)种类最多,且绝大部分都分布于我国西北、西南、华北及东北地区.青杨派中的青杨(Populus cathayana Rehd.)为我国特有,分布范围仅次于小叶杨,位居青杨派中的第二位.青杨整个分布区内种内遗传变异性很大,但对此开展的研究并不多,除王建园、杨自湘对苗期种源差异,以及杨自湘对不同产地的叶片进行较详细的研究以外,青杨的其他表型性状及同工酶、DNA水平的研究都未见报道.物种或群体的遗传多样性大小是长期进化的产物,是其生存(适应)和发展(进化)的前提.一个群体或种内的遗传多样性越高或遗传变异越丰富,对环境变化的适应能力就越强,越容易扩散其分布范围和开拓新的环境,无性繁殖为主的种也不例外.理论推导和大量实验证据表明,群体的遗传变异的大小与其进化速率成正比,因此对遗传多样性的研究,可以揭示物种和群体的进化历史(起源的时间、地点和方式),也能为进一步分析其进化潜力和未来的命运提供重要的资料.本文用RAPD技术对广泛分布区内的青杨进行分析,揭示青杨种内具有丰富的遗传变异性,并探讨群体发生遗传分化的机制.

关键词：杨树青杨 DNA 多态性遗传分化

肝配蛋白B2在牙龈卟啉单胞菌诱导单核细胞黏附人脐静脉内皮细胞中的作用

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中华口腔医学杂志 2014年第10期49卷 614-618页

作者：张彩霞宋洁徐杨吴娟孙卫斌李宽钰南京大学医学院细胞生物学与遗传学教研室·江苏省医学分子技术重点实验室 210093

目的检测肝配蛋白B2 （erythropoietin producing hepatomocellular receptor interacting protein B2,Ephrin B2）及其受体在单核细胞THP-1黏附人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中的作用,揭示牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）感染增强THP-1黏附HUVEC的分子机制.方法应用厌氧罐培养Pg,以感染复数1∶100感染人单核细胞株THP-1,感染8和24 h后,收集部分样品分别用于检测THP-1细胞Ephrin B2及其受体表达水平的变化;其余样品与转染空载体或过表达Ephrin B2的HUVEC细胞共培养,用实时荧光定量和蛋白质印迹法检测HUVEC细胞Ephrin B2的表达水平,并观察Ephrin B2对THP-1与HUVEC黏附的影响.结果 Pg感染24 h后,THP-1细胞Ephrin B2受体EphB3、EphB4和EphA4的mRNA表达水平分别提高至5.169±0.152、11.040± 1.195和4.976±0.122,与未感染对照组（结果数据为1）相比差异均有统计学意义（P＜0.01）;与经Pg感染的THP-1共培养后,HUVEC细胞Ephrin B2的表达提高至8.938±0.962,与未感染对照组相比差异均有统计学意义（P=0.008）;不经过感染,HUVEC直接过表达Ephrin B2后,THP-1对HUVEC黏附性显著增加.结论感染Pg的THP-1黏附HUVEC的数量增多与Ephrin B2及其受体的相互作用有关,提示动脉血管内皮细胞特异性表达的Ephrin B2分子参与动脉粥样硬化的发生.

关键词：紫单胞菌龈单核细胞内皮细胞促红细胞生成素产生的肝细胞受体-肝配蛋白B2